CZAPEK AGAR: UTEMELJITEV, PRIPRAVA, UPORABA IN OMEJITVE - BIOLOGIJA - 2024

Czapek (CZA) je selektivni trdnem mediju posebej za gojenje saprofitske bakterije in glive. Ustvaril sta ga botanik Friedrich Johann Franz Czapek, poljskega porekla, in ameriški kemik Arthur Wayland Dox; zaradi tega je ta agar znan tudi kot medij Czapek-Dox.

Prvotni medij je bil tekoč, vendar je bil kasneje dodan agar, da je bil trden medij. Czapekov medij je sestavljen iz natrijevega nitrata, bikalijevega fosfata, magnezijevega sulfata, kalijevega klorida, železovega sulfata, saharoze, agarja in destilirane vode.

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Vir: A. Medmyco / B. Foto: dr. David Midgley. Wikipedia.com

PH Czapekovega agarja je 7,3, vendar obstaja različica, ki ji dodamo 10% mlečne kisline, katere pH ostane pri 3,5. Ta kisli medij se uporablja za gojenje acidofilnih mikroorganizmov.

Po drugi strani so nekatere gospodarske hiše spremenile sestavo agarja Czapek s spreminjanjem magnezijevega sulfata in bikalijevega fosfata z glicerofosfatom; ta sprememba preprečuje nastanek oborine magnezijevega fosfata s konvencionalno formulo. Prav tako obstaja še ena različica, ki ji dodamo ekstrakt kvasa.

Nazadnje agar Czapek priporoča Ameriško združenje za javno zdravje APHA za preučevanje Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp in Penicillium sp. Za te vrste je značilno, da so mikroorganizmi v okolju in oportunistični povzročitelji bolezni.

Osnove

Ta medij vsebuje saharozo; ta ogljikov hidrat služi kot vir ogljika, natrijev nitrat pa je vir dušika, vendar je dušik za razliko od drugih medijev anorganski.

Zaradi tega se medij Czapek šteje za selektivnega, saj lahko rastejo samo mikroorganizmi, ki lahko uporabljajo anorganske spojine kot edini vir dušika.

Kot uravnavalna snov osmolarnosti medija je bikotalijev fosfat. Magnezijev sulfat, kalijev klorid in železov sulfat zagotavljajo bistvene minerale za rast saprofitnih (prosto živečih) mikroorganizmov. Ta formula tvori oborino magnezijevega fosfata.

Končno je agar-agar spojina, ki daje trdno konsistenco mediju, voda pa topilo za vse sestavine.

S spremenjeno formulo Czapek agar ne nastane oborina in izboljšuje rast nekaterih gliv.

Zaradi izjemne kislosti kisline Czapek Agar je to bolj selektivno gojišče, ki omogoča le rast acidofilnih mikroorganizmov, ki lahko uporabljajo anorganski dušik. Medtem Czapek-kvasni agar izboljšuje delovanje nekaterih gob.

Priprava

Srednja Czapek-Dox

Odtehtamo 49 g dehidriranega gojišča in raztopimo v destilirani vodi. Dušimo do vretja. Mešanico pogosto pretresite, dokler se popolnoma ne raztopi.

-Czapek Agar klini

Raztopljeno mešanico porazdelite po epruvetah in avtoklavirajte pri 121 ° C 15 minut. Ko odstranite iz avtoklava, homogenizirajte pred polaganjem cevi in ​​pustite, da se strdi.

-Czapek plošče agarja

Raztopljeno mešanico avtomatizirajte 15 minut pri 121 ° C in pustite, da se ohladi na 50 ° C, homogenizirajte in vlijte 20 ml v sterilne Petrijeve posode. Pustite, da se strdi, obrnite in hranite v hladilniku do uporabe.

PH naj ostane 7,3 ± 0,2. Barva dehidriranega medija je bela, pripravljen medij pa svetlo rumen, rahlo moten zaradi prisotnosti flokulirajoče oborine.

Czapekov medij pri kislem pH

Pripravite, kot je že opisano, vendar dodajte 10 ml sterilne 10% mlečne kisline na vsak liter pripravljenega medija. Modificirani Czapekov medij naj bo pri pH 3,5 ± 0,2.

Modificiran Czapek Medium

Odtehtamo 45,4 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru vode. Preostali del pripravka je enak zgoraj opisanemu. Barva dehidriranega medija je bela, pripravljen medij pa belkast. Končni pH medija je 6,8 ± 0,2.

Czapek-kvasni medij

Imenujejo ga tudi Czapek kvasni ekstrakt Agar (CYA). Vsebuje elemente klasičnega agarja Czapek plus kvas.

Uporaba

Medij Czapek se med drugim uporablja za iskanje saprofitnih mikroorganizmov v vzorcih zemlje, zelenjave, zrn, zraka, žuželk.

Czapekov agar s kislim pH se uporablja za rast acidofilnih mikroorganizmov, modificirani Czapekov agar pa je še posebej uporaben za nastanek klamidosporov v vrstah kompleksa Candida albicans.

Končno je Czapek-kvasni agar zelo koristen za izolacijo Aspergillusa in Penicilliuma.

Posejano

-Czapek agar

Za iskanje Actinomycetes v tleh nadaljujemo na naslednji način: vzorec 30 minut obdelamo s fenolizirano vodo in nato sejemo 1 ml suspenzije na agar Czapek. Inkubirajte 5 do 7 dni pri 28 ° C.

Za vzorce zelenjave, zrnja in žuželk jih dajo neposredno na agar. Na površini agarja lahko naredite tudi razredčitve in semenite 0,1 ml.

-Modificirani agar Czapek

Za sejanje uporabimo ravno zanko ali iglo, jo impregniramo z brisom in agar inokuliramo tako, da naredimo preboj, dokler se ne dotakne osnove plošče. Inkubirajte 24 ur pri 28 ° C in preglejte pod mikroskopom nad in pod ploščo, da preverite, ali so se pojavili klamidospori.

Temperatura in čas inkubacije

Temperatura in čas inkubacije se razlikujeta glede na vrsto mikroorganizma, ki ga je treba izolirati. Plošče običajno inkubiramo en do dva tedna v temperaturnem območju od 20 do 25 ° C.

Vendar obstajajo posebni pogoji za nekatere seve. Na primer, večina vrst rodu Aspergillus optimalno raste pri 30 ° C; vendar A. fumigatus raste pri 50 ° C.

Glede časa inkubacije je normalen en ali dva tedna, vendar se lahko Candida albicans razvije pri 24 do 48 urah pri 25 ° C.

Značilnosti nekaterih kolonij na tem mediju

-Penicillium atrovenetum

Razvija se v 12 dneh inkubacije pri 27 ° C. Njihove kolonije so majhne (25 mm).

Kolonije imajo žametno podobo, z določeno belo obrobo in modro-zelenim odtenkom v središču, ki s staranjem postane siv. Hrbtna stran kolonije je oranžna, zaradi česar je sredina enaka barvi zaradi proizvodnje pigmenta.

-Aspergillus niger

Razvija se z belim do rumenim micelijem in črnimi sporami.

-Candida albicans

Razvijajo se kremne svetlo bež kolonije. V modificiranem Czapekovem agarju tvori klamidospore.

-Aspergillus parasiticus

Temno zelen micelij se razvije v 7 dneh pri 25 ° C.

QA

Za oceno kakovosti gojišča lahko posejemo certificirane kontrolne seve, kot so: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger v približno 5 dneh razvije beli do rumeni micelij in črne spore, medtem ko bo Candida albicans v 24 urah inkubacije pri 25 ° C zadovoljivo naraščala; kolonije so kremno obarvane.

Omejitve

Nekatere raziskave so razkrile, da je agar z najboljšim izkoristkom agar s krompirjevo dekstrozo agar z najboljšim donosom na drugem mestu, a za okrevanje Aspergillus in Penicillium je agar Czapek tisti, ki zagotavlja najvišjo stopnjo okrevanja.

Reference

1. Dávila M, et al. Antagonistični aktinomiceti proti fitopatogenim glivam kmetijskega pomena. Vel. Mex. Znanost. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Dostopno na: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Pšenice Á. Izolacija sevov bakterije Aspergillus niger, ki proizvajajo ohratoksin A, v shranjeni zeleni kavi (Coffea arabica). Vel. Mex. Mic. 2010; 32: 63–68. Na voljo na spletnem mestu.scielo.org.
3. Sodelavci Wikipedije. Czapek srednja. Wikipedija, prosta enciklopedija. 13. januar 2019, 20:30 UTC. Dostopno na: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Modificiran Czapek-Dox Agar. Dostopno na: condalab.com
5. Microkit za kulturo. Czapek-Dox Agar. Diosponible v: Medioscultivo.com