Agar Endo ali Endo medij trdnem mediju, razlika in z določeno stopnjo selektivnosti kulture. Izvirno formulo je ustvaril Endo leta 1904 za razlikovanje laktozne fermentacije od nefermentnih bakterij. Sprva je bil zasnovan za izolacijo Salmonella typhi, kasneje pa se je cilj medija usmeril v iskanje koliform.
Načelo Endo Agar je ostalo, vendar je njegova formulacija z leti doživela nešteto sprememb. Trenutno je medij sestavljen iz peptidne prebave živalskega tkiva, laktoze, dikalijevega hidrofosfata, natrijevega sulfita, osnovnega fuksina in agarja.
O: Virgin Endo Agar B: seme Endo Agar, na sredini agarja lahko opazite kovinski sijaj seva E. coli. Vir: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Glavna uporaba medija je bila povezana z izolacijo in diferenciacijo gram-negativnih bacilov, ki pripadajo družini Enterobacteriaceae in drugim ožjim družinam.
Dolgo časa so jo uporabljali pri odkrivanju koliform v vzorcih vode, mleka in hrane, danes pa so uporabo tega medija izpodrinili drugi s podobnimi funkcijami. Vendar nekateri mikrobiološki laboratoriji uporabljajo ta agar za izolacijo Enterobacteriaceae iz vzorcev kliničnega izvora.
Osnove
Endo agar vsebuje peptone, ki služijo kot vir aminokislin, dušika, ogljika in energije, potrebne za rast nezahtevnih mikroorganizmov.
Po drugi strani je rahlo selektiven značaj agarja zagotovljen z dodatkom natrijevega sulfita in bazičnega fuksina; obe komponenti delno ali v celoti zavirata rast večine gram-pozitivnih bakterij.
Diferencialni značaj daje prisotnost fermentiranega ogljikovega hidrata, ki je v tem primeru laktoza in bazični fuksin, ki služi tudi kot indikator pH.
Gram-negativne bakterije, ki rastejo na tem agaru in lahko fermentirajo laktozo, tvorijo močne rožnate kolonije; ker so patognomične bakterije Escherichia coli, nastajajo temno rdeče kolonije z iridescentno zelenkastim kovinskim sijajem. To je posledica velike proizvodnje kislin iz fermentacije ogljikovih hidratov.
Treba je opozoriti, da tudi medij okoli kolonij spremeni močno roza barvo. Ker fermentacija, ki ne vsebuje laktoze, Gram negativne palice tvorijo bledo rožnate kolonije, podobne srednjim ali brezbarvnim.
Dikalijev hidrogenfosfat uravnava pH medija in agar je tista komponenta, ki zagotavlja trdno konsistenco.
Priprava
Endo agar
Odtehtamo 41,5 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru destilirane vode. Zmes mešamo s pogostim mešanjem, dokler medij ni popoln. Sterilizirajte v avtoklaviranju pri 121 ° C, pri pritisku 15 lb, 15 minut.
Ko odstranite iz avtoklava, pustite, da se ohladi na približno 45-50 ° C, mešanico pred serviranjem pretresite, da se homogenizira. 20 ml vlijemo v sterilne Petrijeve posode.
Pustite, da se plošče strdijo, jih obrnite in shranite v plaquero ali zavijte s temnim papirjem, preden shranite v hladilnik. Zelo pomembno je, da pripravljen medij zaščitite pred direktno svetlobo. Najboljša praksa je, da pripravite natančen znesek, ki ga boste potrebovali.
Če ga hranite v hladilniku, je treba plošče pred uporabo pustiti, da se segrejejo.
PH medija mora biti med 7,2 in 7,6, barva pripravljenega medija pa je bledo roza.
Varianta M-Endo agar
Obstaja še ena različica Endo agarja (m-Endo), ki sledi formuli McCarthy, Delaney in Grasso, ki vsebuje več spojin in se razlikuje v obliki priprave.
Ta varianta vsebuje: laktozo, triptozo, encimsko prebavo kazeina, encimsko prebavo živalskega tkiva, natrijev klorid, dvoosni kalijev fosfat, natrijev sulfit, ekstrakt kvasa, monobazični kalijev fosfat, bazični fuksin, natrijev deoksilat, lavril sulfat natrij in agar.
V tem primeru se 51 g dehidriranega medija stehta in suspendira v 1 litru destilirane vode, ki vsebuje 20 ml etanola.
Med mešanjem rahlo segrevamo, dokler se medij popolnoma ne raztopi. Ne sme se pregreti in ne sme biti avtoklaviran. Ko je zmes homogena, servirajte v sterilni Petrijevi posodi in pustite, da se strdi.
Uporaba
V nekaterih državah se še vedno uporablja za štetje skupnih in fekalnih koliform v vzorcih hrane in vode, zlasti prisotnost bakterije Escherichia coli kot glavnega kazalca onesnaženosti z blagom.
M-Endo agar priporoča Ameriško združenje za javno zdravje (APHA) za spremljanje in nadzor programov dezinfekcije in čiščenja odpadnih voda ter za oceno kakovosti pitne vode.
Najpogosteje uporabljena metoda je membranska filtracija, potem ko vzorec obogatimo z lauril sulfatno juho za 2 do 4 ure.
Uporablja se lahko tudi kot nadomestek agarja EMB pri mikrobiološki analizi hrane in vode z najverjetnejšo tehniko števila (MPN), zlasti v popolni potrditveni fazi, da se potrdi prisotnost E. coli iz motne ES juhe.
QA
Za oceno kakovosti pripravljene serije Endo agar se posejejo znani ali certificirani kontrolni sevi.
Med sevi, ki jih lahko uporabimo v ta namen, so: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus miracalCCCCC 14CC, 11715 Proteus miracaliscus ATCC 12022 .
Seme semenimo po izčrpanosti in jih v aerobiozi 24 ur inkubiramo pri 37 ° C.
Pričakovani rezultati so:
- Za Escherichia coli: močne rdeče kolonije, s kovinskim sijajem.
- Kolonije E. cloacae in K. pneumoniae morajo biti roza mukoidi.
- V primeru S. typhimurium, S. flexneri in P. mirabilis so kolonije običajno bledo rožnate ali brezbarvne.
- Končno naj bi bil E. faecalis delno zaviran, zato mora biti njegova rast zelo majhna, rožnato kolonija.
Omejitve
-Endo medij ima nizko selektivno moč, zato je možno, da lahko rastejo nekateri gram-pozitivni mikroorganizmi, kot so stafilokok, enterokok in celo kvasovke.
-Drugi bacili, ki ne spadajo v družino Enterobacteriaceae, se lahko razvijejo v tem mediju, na primer Pseudomonas sp in Aeromonas sp. Značilnosti teh sevov so brezbarvne nepravilne kolonije.
-Ta pripravljeni medij je zelo občutljiv na svetlobo, zato dolgotrajna izpostavljenost poslabša indikatorski sistem in medij nepovratno poškoduje.
-Sestavine medija veljajo za rakotvorne, zato se je treba izogibati neposrednemu stiku.
- Dehidrirani medij je zelo higroskopen in ga je treba hraniti v originalni posodi pri sobni temperaturi, tesno zaprto in v suhem okolju.
Reference
- BD Laboratoriji. Endo Agar. 2013. Dostopno na: bd.com
- Neogen Laboratories. M Endo Agar. Dostopno na: foodsafety.neogen.com
- Endo Agar. Wikipedija, prosta enciklopedija. 7. september 2017, 08:27 UTC 28. februar 2019, 22:55. Dostopno na: en.wikipedia.
- MercK Laboratorij. Endo agar. 2019.Na voljo na: merckmillipore.com
- Laboratoriji za tehnične liste. M –Endo Agar LES. 2015.Dostopno na: liofilchem.net