TIOGLIKOLAT JUHA: UTEMELJITEV, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2025

Tioglikolatni brozgo je medij obogaten v tekočem stanju. Akronim FTM ga pozna po akronimu v angleščini Fluid Thioglycollate Medium. Ustvaril jo je Brewer, leta 1944 pa jo je spremenila Vera, ki ji je dodala kazein pepton.

Ta medij ima majhen oksidacijsko-redukcijski potencial, zato ni priporočljiv za razvoj strogih aerobnih bakterij, vendar je idealen za obnavljanje fakultativnih aerobnih, strogih anaerobnih in nezahtevnih mikroaerofičnih bakterij.

Tioglikolat juha brez indikatorja. Pokaže izcedek iz nožnice. Vir: Bobjgalindo

Visoka učinkovitost, ki jo je ta medij opazil pri izolaciji in obnavljanju najrazličnejših mikroorganizmov, je sprejela farmakopejo Združenih držav (USP), Uradno združenje kmetijskih kemikov (AOAC) in Evropsko farmakopejo ( EP).

Te organizacije ga priporočajo za preverjanje sterilnosti farmacevtskih izdelkov in za obogatitev različnih vrst vzorcev.

Cado tioglikolat je sestavljen iz izvlečka kvasa, izločanja kazeina trebušne slinavke, brezvodne dekstroze, L-cistina, natrijevega klorida, natrijevega tioglikolata, resazurina in agarja v majhni količini.

Obstaja več različic tega gojišča, med njimi so: tioglikolat juha z indikatorjem, tioglikolat juha brez indikatorja, tioglikolat juha z indikatorjem, obogatena s heminom in vitaminom K _1, ter tioglikolatna juha s kalcijevim karbonatom.

Zlasti različica tioglikolatne juhe, obogatena s heminom in vitaminom K, služi za povečanje rasti močnih anaerobov, različica tioglikolatne juhe, ki vsebuje kalcijev karbonat, pa je uporabna za boj proti kislinam, ustvarjenim med rastjo mikrobov.

Osnove

Tioglikolatna juha velja za neselektivno obogatitveno gojišče, saj omogoča rast večine nenasilnih bakterij. Prehranske potrebe zagotavljajo izvleček kvasa, prebavila trebušne slinavke in glukoza.

Po drugi strani pa ta medij, kljub temu da je juha, vsebuje majhno količino agarja; To pomeni, da ima majhen oksidacijsko-redukcijski potencial zaradi dejstva, da upočasni vstop kisika, in sicer tako, da se kisik zmanjša, ko gre globlje v cev.

Zato je ta medij idealen za razvoj fakultativnih aerobnih, mikroaerofilnih in strogih anaerobnih bakterij, slednjih 2 pa ni treba inkubirati v teh pogojih. Isti medij uravnava količino kisika v mediju, če je odsoten na dnu cevi in ​​v zadostni količini na površini.

Prav tako tioglikolat in L-cistin delujeta kot reduktorja in prispevata k preprečevanju kopičenja snovi, škodljivih za razvoj bakterij, na primer peroksida. Poleg tega te spojine vsebujejo sulfhidrilne skupine (-SH-), med drugimi težkimi kovinami nevtralizirajo zaviralne učinke derivatov živega srebra, arzenika.

Resazurin je pokazatelj zmanjšanja oksida. Ta snov je brezbarvna, ko se reducira, in roza, ko oksidira. Obstajajo različice indikatorja in ne-indikatorja tioglikolatne juhe. Njegova uporaba bo odvisna od vrste vzorca in preferenc laboratorija.

Medtem natrijev klorid ohranja osmotsko ravnovesje tioglikolatne juhe, uporaba glukoze v brezvodni obliki pa preprečuje odvečno vlago v dehidriranem mediju.

Priprava

Tioglikolat juha z indikatorjem

Odtehtamo 29,75 g dehidriranega medija in ga raztopimo v 1 litru destilirane vode. Zmes pustimo stati približno 5 minut. Prilijemo do vira toplote in pogosto mešamo, dokler se popolnoma ne raztopi.

Medij vlijemo v epruvete in avtomatsko klaviramo pri 121 ° C 15 minut. Pred uporabo pustite, da se ohladi. Preverite vložek gospodarske hiše za njeno ohranitev. Nekateri priporočajo shranjevanje pri sobni temperaturi v temnem prostoru, drugi pa v hladilniku, zaščitenem pred svetlobo.

PH pripravljenega medija je 7,1 ± 0,2.

Barva dehidriranega medija je svetlo bež, pripravljen medij pa je svetlo jantar z nekaj opalescence.

Tioglikolat juha z indikatorjem, obogatena s heminom in vitaminom K

Obstajajo komercialni mediji, ki že vsebujejo hemin in vitamin K ₁ , zlasti za gojenje anaerobov.

Če nimate obogatenega gojišča za anaerobe, lahko pripravite osnovno tioglikolatno juho. Za to dodamo 10 mg hemin hidroklorida in 1 mg vitamina K ₁ na vsak liter medija. Če pa tioglikolatni juhi dodamo kri ali serum, dodajanje hemina ali vitamina K ni potrebno.

Tioglikolatna juha s kalcijevim karbonatom

Prihaja v komercialni obliki in je pripravljen po navodilih na vložku.

Tioglikolat juha brez indikatorja

Ta ima enako sestavo osnovnega tioglikolata, vendar ne vsebuje resazurina.

Odtehtamo 30 g dehidriranega medija in ga raztopimo v litru destilirane vode. Preostanek pripravka je enak tistemu, ki je opisan v juhi s tioglikolatom s indikatorjem.

Uporaba

Tioglikolatna juha je uporabna za obogatitev kliničnih vzorcev, zlasti tistih s sterilnih mest. Uporabna je tudi za neklinične vzorce, kot so kozmetika, zdravila itd.

Za inokulacijo tekočih vzorcev (kot so CSF, sinovialna tekočina, med drugim) se vzorci najprej centrifugirajo, nato pa se odvzamejo 2 kapljici usedline in dajo v juho s tioglikolatom. Inkubirajte 24 ur pri 35 ° C. Če v tem času ni rasti (motnost), jo inkubiramo do največ 7 dni.

Če se vzorec odvzame z brisom, se gojišče najprej inokulira v plošče in na koncu se bris vnese v brozgo, štrleči del se cepi in epruveta se zapre, pušča pa bris. Inkubirajte 24 ur pri 35 ° C, največ 7 dni.

Za trdne vzorce homogeniziramo v fiziološki fiziološki raztopini (SSF) in nato namočimo juho s tioglikolatom z 2 kapljicama suspenzije.

Včasih se lahko uporablja kot transportno sredstvo za vzorce, pri katerih obstaja sum na stroge anaerobe, ali kot rezervno obogatitveno juho.

Različica tioglikolatne juhe s kalcijevim karbonatom se dlje časa uporablja za vzdrževanje kontrolnih sevov, saj ima sposobnost nevtralizacije kislin, ki nastanejo z uporabo glukoze; Te kisline so strupene za nekatere bakterije.

Rast v juhi tioglikolata se bo opazila zaradi motnosti medija. Priporočljivo je, da se izvede madež po Gramu in kasneje subkultura v neselektivnih in selektivnih medijih, odvisno od vrste vzorca in sumljivih mikroorganizmov.

QA

Za nadzor sterilnosti je priporočljivo inkubirati eno ali dve juhi brez inokulacije. Pričakovani rezultat je bistra juha, brez barvne spremembe, čeprav je normalno, da na površini cevi vidite rahlo rožnato barvo.

Za kontrolo kakovosti je treba inokulirati med 10 - 100 CFU certificiranih kontrolnih sevov, kot so Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium 11437 sporo Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkubirajte pri 30-35 ° C v aerobiozi 24 ur do največ 3 dni, saj ti mikroorganizmi hitro rastejo.

Dober razvoj je pričakovan v vseh primerih, razen Micrococcus luteus in Bacillus subtilis, kjer je lahko zmeren razvoj.

Za nadzor kakovosti juhe iz tioglikolata, obogatene s heminom in vitaminom K ₁ , se lahko uporabljajo kontrolni sevi Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 in Bacteroides fragilis ATCC 25285. Pričakovani rezultat je zadovoljiva rast.

priporočila

-Včasih lahko opazimo, da površina tioglikolatne juhe z indikatorjem postane rožnata; To je posledica oksidacije medija. Če roza barva pokriva 30% ali več celotne juhe, jo lahko 5 minut segrejemo v vodni kopeli, ponovno ohladimo in uporabimo.

Tako boste odstranili absorbiran kisik in mu povrnili medij v prvotno barvo. Ta postopek je mogoče storiti samo enkrat.

-Če želite izboljšati rast aerobnih bakterij, inkubirajte s pokrovom rahlo ohlapen. Vendar pa je bolje uporabiti v ta namen možgansko infuzijsko juho ali sojino juho iz tripticaze za pravilen razvoj strogih aerobikov.

- Izogibati se je treba zamrzovanju medija ali pregrevanju, saj oba pogoja medij poškodujeta.

-Direktna svetloba poškoduje gojišče, mora biti shranjeno pred svetlobo.

Reference

1. Britannia Laboratories. Tioglikolat USP s indikatorjem. 2015. Dostopno na: labBritania.com.
2. Chios Sas Laboratories. 2019. Tioglikolatna juha. Dostopno na: quios.com.co
3. Laboratoriji BD tekočinski tioglikolatni medij (FTM). 2003.Dostopno na: bd.com/Europe
4. Mediji BBL, pripravljeni v epruvetah za gojenje anaerobnih mikroorganizmov. Tioglikolatni medij. 2013. Dostopno na: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.