TETRATHIONATE JUHA: UTEMELJITEV, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2025

Tetrathionate brozgo ali brozge TT je selektivni tekoče gojišče za obogatitev in predelavo sevov rodu Salmonella. Ustvaril ga je Müeller, kasneje pa ga je spremenil Kauffmann, zato obstajajo tisti, ki mu pravijo buel Müeller-Kauffmann.

Prvotni medij je vseboval proteozne peptone, kalcijev karbonat in natrijev tiosulfat. Kauffmann ji je dodal žolčne soli in ustvaril novo modalnost s svetlo zeleno. Te snovi zavirajo rast koliform, tako da je medij prost za razvoj patogenih bakterij, v tem primeru salmonele.

Dodajanje jodne raztopine joda v tetrationati juho. Vir: Manuel Almagro Rivas

Modifikacija je bila zelo uspešna, saj je znatno povečala občutljivost medija. Zaradi tega je trenutno koristno za iskanje salmonele v katerem koli vzorcu, predvsem pa v trdnih ali tekočih blatu in hrani.

Njegova priprava je sestavljena iz dveh faz; Komercialni medij je osnova za pripravo tetrationate juhe, nato pa, da se lahko tvori tetrationat, dodamo jodirano raztopino joda, da dokončamo medij.

Ameriško združenje za javno zdravje (APHA) priporoča uporabo Tetrathionate broth, dopolnjenega s svetlo zeleno barvo, za obogatitev vzorcev za salmonelo, saj je bolj selektivna kot broth Tetrathionate in selenite.

Na splošno je tetrationata juha idealna, kadar obstaja sum na prisotnost bakterij iz roda Salmonella v majhnih količinah ali kadar jih zlorabljamo zaradi izpostavljenosti zaviralnim snovem ali z industrijskimi postopki, ki zmanjšujejo njihovo sposobnost preživetja.

Osnove

Prisotni peptoni ustrezajo prebavi trebušne slinavke kazeina in prebavnemu prebavi živalskega tkiva. Te zagotavljajo vir ogljika, dušika in splošnih hranil za rast bakterij.

Natrijev tiosulfat reagira z jodirano raztopino in tvori tetrationat. To zavira rast koliform in spodbuja razvoj bakterij, ki vsebujejo encim tetrationate reduktazo, med njimi je rod Salmonella, pa tudi Proteus.

Žolčne soli delujejo tudi kot zaviralna snov za večino gram-pozitivnih in nekaterih gram-negativnih bakterij (koliform).

Kalcijev karbonat absorbira strupene snovi, ki nastanejo pri razpadanju tetrationata, ki tvori žvepleno kislino. V tem smislu kalcijev karbonat nevtralizira kislost in ohranja pH medija stabilnega.

V primeru svetlo zelene modalitete ta snov poveča selektivno moč tetrationatskega juha z zaviranjem mikroorganizmov, ki niso rod Salmonella.

Priprava

-Tetrathionate juha

Jod raztopina joda

Tehtati:

• 6 gramov joda.
• 5 g kalijevega jodida.

Kalijev jodid raztopimo v približno 5 ml sterilne destilirane vode, nato dodamo jod malo po malo, ko se zmes segreva. Po tem, ko se popolnoma raztopi, dopolnite s sterilno destilirano vodo do oznake, dokler ne dosežete končne prostornine 20 ml.

Osnovni medij za tetrationati juho

Odtehtamo 46 gramov dehidriranega medija in suspendiramo v 1 litru sterilne destilirane vode. Mešajte in segrevajte, dokler se popolnoma ne raztopi, lahko zavre samo nekaj minut. Ne avtoklavirajte. Osnovo medija pustimo, da se ohladi na približno 45 ° C in takrat dodamo 20 ml jodirane raztopine.

Po dodajanju jodirane raztopine mediju ga je treba takoj uporabiti. Če ne želite uporabiti celotne mešanice, nadaljujte na naslednji način:

10 ml osnovnega medija se porazdeli v epruvete in samo tistim, ki jih je treba cepiti z vzorci, dodamo 0,2 ml jodirane raztopine.

Tistih, ki jih ne bo mogoče uporabljati, je še vedno mogoče shraniti v hladilniku, a ker medij ni steriliziran, je idealno, da pripravite natančno potrebno količino.

Barva medija pred dodajanjem jodirane raztopine joda je mlečno bela z belo oborino, po dodatku pa rjava z gosto oborino. Opažena oborina je normalna in ustreza kalcijevemu karbonatu, ki se ne raztopi. Končni pH medija je 8,4 ± 0,2.

-Tetrathionate varianta juhe s svetlo zeleno

Za pripravo svetlo zelene tetrationate juhe izvedemo vse zgoraj opisane korake, poleg tega pa bomo zmesi dodali 10 ml svetlo zelene raztopine, pripravljene v 0,1%.

Sijajno zelena

Ta rešitev je pripravljena na naslednji način:

Odtehtamo 0,1 g svetlo zelene barve in suspendiramo v 100 ml destilirane vode. Segrejemo do vrenja, da dosežemo popolno raztapljanje. Shranjujte v jantarni steklenici.

Uporaba

Za vzorce blata (kultura blata) je protokol naslednji:

V epruveto z 10 ml že pripravljene tetrationatske juhe nakapajte 1 g trdnega blata ali 1 ml tekočega blata. Močno pretresite in aerobno inkubirajte pri 43 ° C 6-24 ur.

Nato vzemite 10 do 20 ul alkvote juhe in subkulture v selektivnem mediju za salmonelo, kot so SS agar, XLD agar, svetlo zelen agar, Hektoen enteric agar.

Vzporedno je treba selektivne medije za salmonelo inokulirati z neposrednim vzorcem (blagom) brez obogatitve. Za rektalne vzorce izvlecite zbrani material v cev in nadaljujte, kot je opisano zgoraj.

Za vzorce hrane odtehtamo 10 g čvrste hrane ali 10 ml tekoče hrane in plastenko napolnimo s 100 ml pripravljene juhe iz tetrationata. Nadaljujte na enak način, kot je opisano zgoraj, vendar inkubirajte pri 37 ° C.

Kot je razvidno, bo razmerje med vzorcem in juho vedno 1:10.

QA

Za testiranje gojišča se lahko uporabljajo znani kontrolni sevi. Najbolj razširjeni so sevi s potrjenim ATCC.

Uporabljeni sevi so Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 in Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Odlična rast se pričakuje pri sevih salmonele, medtem ko ima lahko Escherichia coli šibko ali redno rast, gram pozitivni sevi (Enterococcus in Staphylococcus) pa delno ali v celoti zavirajo.

priporočila

-Ker ta medij ne zavira rasti Proteusa, nekateri laboratoriji uporabljajo 40 mg / L novobiocina, da preprečijo razvoj tega mikrobnega seva. Pred raztopino joda je treba dodati antibiotik.

-Po pripravi gojišča, vključno z jodno raztopino, ne sme trajati več kot 2 uri.

-Pri razdeljevanju gojišča v epruvete je treba mešanico nenehno homogenizirati, da se ponovno nastane oborina.

-V manj onesnaženih vzorcih tetrationatirana juha se inkubira pri 35-37 ° C, pri močno onesnaženih vzorcih pa priporočamo inkubacijo pri 43 ° C.

Reference

1. Conda Pronadisa Laboratorij. 2010. Tetrathionate osnova juhe po Müeller-Kauffmannu. Na voljo v:
2. BD Laboratoriji. 2003. Tetrathionate broth Baza. Na voljo v:
3. Britannia Laboratories. 2015. Tetranate osnovna juha. Na voljo v:
4. BBL Media. 2005. Pripravljeno v epruvetah za kulturo vrste Salmonella.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Primerjava med gojiščem natrijevega selenita in natrijevega tetrationata, inkubirana pri 37 ° C in 42 ° C za izolacija Salmonella spp iz blata nosilcev. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215–220