SOJINA BROZGA TRYPTICASEIN: TEMELJ, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2025

Sojina juha tripton je tekoče gojišče, zelo hranljiva, neselektivna. Zaradi svoje vsestranskosti je eden najpogosteje uporabljanih tekočih kulturnih medijev v mikrobiološkem laboratoriju.

Znano je tudi po imenu triptične sojine juhe ali prebavljenega kazein-soje, katere kratica je TSB za akronim v angleščini Tryptic Soy broth ali CST za akronim v španščini. Njegova sestava je zaradi svoje sestave zelo raznolika. Sestavljen je iz tripteina, sojinega peptona, natrijevega klorida, dikalijevega fosfata in glukoze.

Sojina juha, ki je bila triptikasein, posejana s sevom bakterije Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, kjer opazimo proizvodnjo pigmenta. Vir: Fotografijo avtor mag. Marielsa Gil.

Sposoben je razmnoževanja klinično pomembnih patogenih bakterij, vključno s tistimi, ki so prehransko zahtevne in anaerobne bakterije. V tem okolju se lahko razvijejo tudi nekatere oportunistične in onesnažujoče glive.

Zaradi visoke prehranske moči ima visoko občutljivost za zaznavanje mikrobne kontaminacije, zato jo je za mikrobiološko analizo cepiv izbrala Služba za zdravstveno varstvo živali in rastlin USDA.

Prav tako triptikasein sojina brozga izpolnjuje zahteve različnih farmakopej (evropskega EP, japonskega JP in severnoameriškega USP) za mikrobiološko študijo izdelkov na industrijski ravni, kot sta kozmetika in hrana.

Po drugi strani je treba omeniti, da je ta medij kljub veliki uporabnosti relativno poceni, zaradi česar je dostopen za večino mikrobioloških laboratorijev. Prav tako je zelo enostaven za pripravo.

Osnove

Triptein, pepton in glukoza zagotavljajo bistvene prehranske lastnosti, da so idealen medij za hitro rast mikrobov.

V približno 6 do 8 urah inkubacije lahko rast opazimo že pri večini mikroorganizmov. Vendar obstajajo počasi rastoči sevi, ki lahko trajajo več dni.

Natrijev klorid in dikalijev fosfat delujeta kot osmotsko ravnovesje in regulatorja pH. Prisotnost rasti dokazuje pojavljanje motnosti v gojišču; če ni rasti, ostane medij prosojen.

Zaradi svoje svetle barve je mogoče opazovati proizvodnjo pigmentov, kot je tisti, prikazan na sliki na začetku članka, ki ustreza pigmentu, ki ga proizvaja Pseudomonas aeruginosa.

Priprava

-Triptizein sojin juh

Za pripravo triptičnega sojine juhe je treba digitalno tehtati 30 g dehidriranega komercialnega medija. Nato se raztopi v litru destilirane vode, ki jo vsebuje bučka.

Mešanico pustimo počivati ​​5 minut, nato pa jo odnesemo v vir toplote, da se sredstvo raztopi. Med vrenjem 1 minuto ga je treba pogosto mešati.

Ko se raztopi, se po potrebi porazdeli v epruvete ustrezne velikosti. Uporabite lahko cevi z bombažnimi čepi ali z bakelitnimi pokrovčki. Nato se epruvete 15 minut sterilizirajo z medijem v avtoklavu pri 121 ° C.

PH medija mora ostati 7,3 ± 0,2

Upoštevati je treba, da je barva dehidriranega gojišča svetlo bež barve in jo je treba hraniti med 10 in 35 ° C, v suhem prostoru. Medtem ko je pripravljena juha svetlo rumene barve, jo je treba hraniti v hladilniku (2 do 8 ° C).

-Varjanci soptine juhe iz triptikaseina

Spremenjeno sojino juho iz triptikaseina lahko pripravimo z dodajanjem žolčnih soli in novobiocina, da postane izbirna za izolacijo E. coli. Druga možnost za isti namen je priprava sojine brozge triptilkaze, dopolnjene z vankomicinom, cefiksimom in teluritom (2,5 µg / ml).

Po drugi strani pa lahko triptični sojini juhi dodamo več glukoze (0,25%), kadar je cilj spodbuditi nastanek biofilmov.

Uporaba

Dovolj je hranljiv, da omogoči rast prekomernih ali obilnih bakterij, kot so Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp in Brucella sp, brez potrebe po dopolnjevanju s krvjo ali serumom.

Prav tako se v tej juhi lahko razvijejo nekatere glive, na primer Candida albicans Complex, Aspergillus sp in Histoplasma capsulatum.

Poleg tega je ta medij v anaerobnih pogojih idealen za obnavljanje bakterij iz rodu Clostridium, kot tudi ne-sporuliranih anaerobnih bakterij kliničnega pomena.

Če dodamo 6,5% natrijevega klorida, ga lahko uporabimo za rast enterokoka in drugih streptokokov skupine D.

Na ravni raziskav je bil zelo uporaben v različnih protokolih, zlasti pri preučevanju biofilma ali bakterij, ki tvorijo biofilm. Uporablja se tudi za pripravo 0,5% bakterijske suspenzije Mac Farland, potrebne za izvajanje antibiograma po metodi Kirby in Bauer.

V tem primeru se odvzamejo 3 do 5 kolonij podobnega videza in emulgirajo v 4-5 ml soje iz juha triptihicain. Nato se inkubira 2 do 6 ur pri 35-37 ° C in nato prilagodi na želeno koncentracijo s pomočjo sterilne fiziološke raztopine. Sojine juhe iz tripsinaseina ne smete uporabljati od 18 do 24 ur inkubacije.

Posejano

Vzorec lahko sejemo neposredno ali pa lahko subkultiramo čiste kolonije, odvzete iz selektivnih medijev. Inokulum mora biti majhen, da ne bi zatemnil medija pred inkubacijo.

Običajno ga 24 ur inkubiramo pri aerobiozi pri 37 ° C, vendar se ti pogoji lahko razlikujejo glede na mikroorganizem, ki ga iščejo. Po potrebi ga lahko v anaerobnih pogojih inkubiramo več dni pri 37 ° C. Na primer, hitro rastoči ali hitri mikroorganizmi se lahko inkubirajo do 7 dni.

Pri mikrobiološki analizi farmacevtskih snovi - kot so cepiva - so protokoli strožji. V teh primerih se juha brez rasti ne zavrže, dokler ne doseže 14 dni neprekinjene inkubacije.

QA

Iz vsake pripravljene serije je treba inkubirati 1 ali 2 cepiva, ki niso cepljene, da se pokaže njihova sterilnost. Ostati mora nespremenjeno.

Za oceno svojega vedenja se lahko zasadijo tudi znani sevi. Med sevi, ki jih je mogoče uporabiti, so:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 ali 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC28CC305, ATCC28CC305, ATCC28CC305, ATCC28CC305, PCC, Pneumo, ATCC28CC305.

V vseh primerih mora biti rast v ustreznih atmosferskih in temperaturnih pogojih za vsak mikroorganizem zadovoljiva.

Omejitve

-Fermentacija glukoze povzroči znižanje pH medija zaradi proizvodnje kislin. To je lahko neugodno za preživetje nekaterih mikroorganizmov, občutljivih na kislost.

-Ne priporočamo za vzdrževanje sevov, saj poleg kislosti bakterije po nekaj dneh izčrpavajo hranila s posledičnim nabiranjem strupenih snovi, zaradi katerih je okolje nevzdržno.

-Zato morate delati pri vseh protokolih sterilnosti, saj so juhe zlahka kontaminirane.

-Po pripravi soptnih juh iz triptikaseina ne smete poskušati prenesti juhe v drugo sterilno cev, ker je ta način manevriranja zelo občutljiv na kontaminacijo.

Reference

1. Cona E. Pogoji za dobro študijo občutljivosti z agar difuzijskim testom. Rev. chil. infektol. 2002; 19 (2): 77–81. Dostopno na: scielo.org
2. Britannia Laboratory. Tripinova sojina juha. 2015. Dostopno na: britanialab.com
3. Laboratorij MCD. Soptina brozga Trypticasein. Dostopno na naslovu: electronic-systems.com
4. Neogen laboratorij. Sojin metulj triptiha. Dostopno na: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Vrednotenje tehnike magnetne imunoseparacije za obnovo Escherichia coli O157: H7 v mlečnih kremah. ALAN. 2006; 56 (3): 257–264. Dostopno na: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Formiranje biofilma v izolatih Staphylococcus aureus glede na protimikrobno občutljivost in klinični izvor. Vitae. 2015; 62 (1): 1–8. Dostopno na: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Izolacija Escherichia coli O157: H7 v dvojnih namenskih vzorcih govejih iztrebkov iz občine Miranda, država Zulia, Venezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239–245. Dostopno na: scielo.org