JUHA IZ SELENITA: OSNOVA, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Selenit je selektivni tekoče gojišče kulture. Leifson ga je oblikoval za obogatitev vzorcev, pri katerih obstaja sum na prisotnost enteropatogenih bakterij iz roda Salmonella.

Ta medij ustreza zahtevam Ameriškega združenja za javno zdravje (APHA), zato je med drugim sprejet za preiskavo prisotnosti salmonele v vzorcih blata, urina, tekoče ali trdne hrane, vode.

Juha iz selenita. Vir: Fotografijo avtor mag. Marielsa gil

Njegova kemična sestava spodbuja obnovo teh mikroorganizmov in zavira rast drugih. Je strupen predvsem za večino bakterij, ki spadajo v družino Enterobacteriaceae. Vendar pa omogoča tudi obnovo sevov Shigella in ne zavira rasti Pseudomonas in Proteusa.

Sestavljen je iz brezvodnega natrijevega hidrogen selenita, brezvodnega natrijevega fosfata, peptonov in laktoze. Obstaja tudi različica, ki ji dodamo cistin, od tod tudi ime selenit-cistinska juha.

Trenutno je prednostna uporaba selenit-cistinske juhe, saj dobimo višji odstotek okrevanja salmonele, enakovreden tistemu, ki ga opazimo z drugimi selektivnimi mediji za isti namen, kot je natrijeva tetrationatna juha.

Osnove

Peptoni, ki jih vsebuje juha, služijo kot hranila za pravilen razvoj mikroorganizmov. Sevi salmonele uporabljajo peptone kot vir dušika, vitaminov in aminokislin.

Laktoza je fermentirajoči ogljikov hidrat, natrijev selenit pa je zaviralna snov, ki ustavi rast gram-pozitivnih bakterij in večine bakterij, ki so prisotne v črevesni flori, zlasti iz družine Enterobacteriaceae. Natrijev fosfat je pufer, ki stabilizira pH medija.

V primeru variante selenitne juhe, ki vsebuje L-cistin, je ta dodatna spojina redukcijsko sredstvo, ki zmanjša strupenost selenita in poveča obnovo salmonele.

Priprava

-Selenitna juha

Če imate sestavine mešanice, lahko tehtate:

4 g brezvodnega natrijevega hidrogen selenita.

10 g brezvodnega natrijevega fosfata.

5 g peptonov.

4 grame laktoze.

Spojine raztopimo v 1 litru sterilne destilirane vode. Lahko ga nekoliko segrejemo, da se popolnoma raztopi.

Nekateri laboratoriji medij izpostavljajo 10 minut v tekoči pari, da ga sterilizirajo, saj avtoklava ne bi smeli uporabljati. Če je medij steriliziran, ga lahko do uporabe hranite v hladilniku.

Pripravimo ga lahko tudi nesterilno in ga postrežemo 10 do 15 ml v sterilne epruvete.

V tem primeru ga je treba pustiti počivati ​​in takoj uporabiti. Ker medij ni sterilni, ga ni mogoče hraniti v hladilniku za kasnejšo uporabo.

- Priprava trgovskega okolja

Če je na voljo komercialni medij, se 23 g dehidriranega medija stehta in raztopi v litru sterilne destilirane vode. Na kratko segrejte, da se konča raztapljanje. Ne avtoklavirajte. Aseptično servirajte 10 ali 15 ml v sterilnih epruvetah.

Končni pH medija mora biti 7,0 ± 0,2.

Treba je opozoriti, da je barva dehidriranega medija bež, pripravek pa lahek in prosojen jantar.

Različica selenitsko-cistinske juhe

Vsebuje enake spojine kot juha iz selenita, dodano pa je 10 mg cistina. Preostali postopek je popolnoma enak zgoraj opisanemu.

Prijave

Ta medij je poseben za uporabo v epidemioloških študijah, kadar bolezen ni v akutni fazi, pri asimptomatskih bolnikih ali zdravih prenašalcih.

Izolacija rodu Salmonella je na splošno težavna, saj ponavadi le slabo onesnažijo vzorce. Ker je v majhnih količinah, ga zlahka prekriva rast drugih bakterijskih rodov, ki jih najdemo v večji količini.

Po drugi strani pa so surovine, iz katerih izdelujejo predelano hrano, pogosto izpostavljene vročini, dehidracijskim procesom, uporabi razkužil, sevanja in konzervansov.

Zato salmonele, ki so prisotne v surovini, trdijo z izpostavljenostjo izdelka zgoraj omenjenim industrijskim postopkom. Prav tako lahko v primeru kliničnih vzorcev, kot so iztrebki, sevi oslabijo, če prihajajo od bolnikov, ki so bili zdravljeni z antibiotiki.

Zato je treba vsak vzorec, za katerega obstaja sum na prisotnost salmonele, predhodno obogatiti z laktozno juho in ga nato obogatiti s selenitno juho, da se optimizira njeno obnavljanje v selektivnih medijih, kot so SS agar, ksilozni agar, lizin deoksiholat (XLD ), med drugim enterični hektoen agar (HE) in svetlo zelen agar.

Posejano

Za vzorce blatu vzamemo 1 g vzorca in suspendiramo v epruveti z 10 do 15 ml juhe selenita. Če je blata tekoča, vzemite 1 ml in suspendirajte v juhi. Pri rektalnih brisih izvlecite material iz brisa v mešanico.

V vzorcih trdne hrane vzamemo 1 g in suspendiramo v juhi selenita.

V tekoči hrani v enakih delih zmešamo juho selenita v dvojni koncentraciji.

Za vzorce urina centrifugirajte supernatant, vzemite vso usedlino in suspendirajte v juhi selenita.

Juhe inkubiramo pri 37 ° C 24 ur inkubacije. Rast bakterij se kaže v motnosti. Za inkubacijo pri 42 ° C lahko vključite tudi dodatno epruveto na vzorec. Nato seme selektivnih trdnih medijev iz juhe selenita.

QA

Za nadzor sterilnosti selenitna juha iz vsake neoklažene šarže 24 ur inkubira pri 37 ° C. Pričakuje se, da ne pride do motnosti ali spremembe barve medija.

Poznani sevi se lahko uporabljajo za nadzor pravilnega delovanja medija, kot so:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 in Proteus mirabilis ATCC 43071.

Pričakovani rezultati so:

• Pri prvih treh bakterijskih sevih mora biti rast zadovoljiva.
• Za delno inhibicijo Escherichia coli.
• Za Proteus zmerno rast.

Omejitve

Medij iz selenitne juhe je strupen za človeško kožo, zato se je treba izogibati neposrednemu stiku.

Reference

1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Primerjava med gojiščem natrijevega selenita in natrijevega tetrationata, inkubirana pri 37 ° C in 42 ° C za izolacija Salmonella spp iz blata nosilcev. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215–220
2. Britannia Laboratories. Juha Selenito. 2015. Dostopno na: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Juha iz selenita. Dostopno na: foodsafety.neogen.com
4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal-Camacho J. Mikrobiološka izolacija Salmonella spp. in molekularna orodja za njegovo odkrivanje. Zdravje, Barranquilla 2014; 30 (1): 73–94. Dostopno na: http://www.scielo.org.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.