MALONATNA JUHA: TEMELJ, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Malonat brozgo je tekoči gojitveni medij uporabljen za diagnostično preskusno (malonata), ki se uporablja za razlikovanje nekaj rodovi iz družine Enterobacteriaceae. Ustvaril ga je Leifson leta 1933, kasneje pa ga je spremenil Ewing, ki je prvotni formuli dodal majhno količino ekstrakta dekstroze in kvasa.

Medij je trenutno sestavljen iz izvlečka kvasa, amonijevega sulfata, dikalijevega fosfata, monokalijevega fosfata, natrijevega klorida, natrijevega malonata, dekstroze in bromothimol modre barve. Ta test je na splošno vključen v baterijo za biokemično identifikacijo za Enterobacteriaceae, saj pomaga razlikovati nekatere rodove in vrste.

Grafični prikaz malonatnega testa. A. Negativni test, B. (zakisanost) Negativni test, C. (Srednja alkalizacija) Pozitiven test. Vir: Barvne cevi publicdomainpictures.net

Test malonatov temelji predvsem na sposobnosti nekaterih mikroorganizmov, da natrijev malonat uporabljajo kot edini vir ogljika, amonijev sulfat pa kot njihov vir dušika.

Malonatni test je običajno pozitiven pri nekaterih vrstah rodov Enterobacter, Klebsiella in Citrobacter. Ker večina vrst rodov Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus in Providencia daje negativno reakcijo.

Osnove

Test malonatov je sestavljen iz prikaza tistih bakterij, ki so sposobne uporabiti natrijev malonat kot edini vir ogljika in amonijev sulfat kot vir dušika.

Večina enterobakterij, ki ne uživajo malonata, lahko raste v tem mediju, pri čemer jemljejo dekstrozo in ekstrakt kvasa kot hranila.

V tem primeru bo vsak poskus alkalizacije z uporabo peptonov preprečil proizvodnjo kislin, ki nastanejo s fermentacijo dekstroze. Tudi kalijev in mono kalijev fosfat delujeta kot pufer in ohranjata pH na 6,7.

Zato, če je test negativen, ostane juha iste prvotne barve (zelena). V redkih primerih lahko medij postane kisel zaradi fermentacije dekstroze; brez uporabe peptonov in indikatorja pH barvo medija spremeni v rumeno. Za to se mora pH znižati na 6.

Če pa je ta test pozitiven, je navedeno, da je mikroorganizem uporabil malonat in amonijev sulfat kot vira ogljika in dušika, ne da bi pri tem uporabil druge sestavine.

V tem primeru medij postane alkalen zaradi sproščanja natrija in posledične tvorbe NaOH. V tem smislu indikator pH (bromotimol modra) obarva barvo medija iz zelene v modro, ko je pH enak ali večji od 7,6. Modra je lahko svetla ali intenzivna (pruska modra).

Končno natrijev klorid ohranja osmolarnost medija, voda pa razredči vse sestavine.

Interpretacija

Ena barvna juha (zelena) - negativni test

Rumena juha: negativni test

Svetlo ali globoko modra juha: test pozitiven

Obstaja različica, imenovana juha iz fenilalanin malonata, imenovana tudi medij Shaw in Clarke. V tem primeru je mogoče analizirati dva testa, uporabo malonata kot vira ogljika in proizvodnjo pirvične kisline iz fenilalanina.

Priprava

Malenkost juha

Število gramov, ki jih določa vložek izbranega trgovskega podjetja, se stehta (lahko se med seboj razlikuje). Odtehtani grami se suspendirajo v enem litru destilirane vode. Segrejte rahlo, dokler se popolnoma ne raztopi. Z bombažnimi pokrovčki razdelite 3 ml gojišča v epruvete 13/100.

Sterilizirajte v avtoklaviranju pri 121 ° C 15 do 20 minut.

Ohladite pred uporabo. Če jih ne boste takoj uporabili, hranite do uporabe v hladilniku. Preden inokuliramo juhe na sobno temperaturo.

PH medija mora biti 6,7 ± 0,2. Barva pripravljenega medija je steklenička zelena.

Phenylalanine Malonate broth

Odtehtamo 11 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru destilirane vode. Preostali del pripravka je enak predhodnemu opisu.

Pripravimo ga lahko tudi tako, da dodamo 2 g / L fenilalanina v gojišče malonatne juhe, preden se sterilizira.

Uporaba

Uporablja se kot del baterijskih biokemijskih testov, ki so sestavljeni za identifikacijo bakterij iz družine Enterobacteriaceae.

Pomaga razlikovati med:

-V rodu Klebsiella in Enterobacter (+) iz rodov Escherichia in Serratia (-).

-Vrste Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame in Salmonella enterica ssp diarizonae (+), vrste Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Od rodu Klebsiella na splošno (+) iz rodu Actinobacillus (-).

-Včasih lahko pomaga razlikovati rodove in vrste bakterij, ki ne spadajo v družino Enterobacteriaceae, na primer med ne-fermentirajoči gram negativni bacili Alcaligenes faecalis (+) in Acinetobacter sp (-).

Vir: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.

Proces

Pod vžigalnikom se vzame por čistega kolonjskega vodila s pravilno steriliziranim in ohlajenim ročajem iz platine. Odvzeti vzorec (lahki inokulum) se raztopi v malonatni juhi. V aerobiozi pri 35 ° C ± 0,2 v 24 do 48 urah inkubirajte s pokrovom.

Malonatna juha se lahko cepi tudi iz 18-24 urne kulture v sojini brozgi triptikaze. V tem primeru se vzame 0,01 ml s sterilno pipeto in malonat juha se cepi. V aerobiozi pri 35 ° C ± 0,2 v 24 do 48 urah inkubirajte s pokrovom.

Na koncu časa se rezultati interpretirajo. Vsako sled modre barve po 48 urah inkubacije je treba šteti za pozitivno. Testa ne smemo razlagati kot negativnega, dokler ne preteče 48-urnega inkubacijskega časa.

V primeru uporabe variante juhe iz fenilalanin malonate najprej razlagamo malonat in nato dodamo 5 kapljic 1N HCl in 3-5 kapljic 8% železovega klorida. Temno zelena barva se razlaga kot pozitiven test za fenilalanin. Če se na drugi strani medij obarva bledo modro, je test za fenilalanin negativen.

QA

Za izvajanje nadzora sterilnosti medija je treba 24 ur inkubacije inkubirati eno ali dve juhi pri 35 ° C ± 0,2. Po tem času ne sme biti oblačnosti ali spremembe barve.

Za nadzor kakovosti se lahko uporabljajo znani ali certificirani sevi, kot so: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 in Escherichia coli ATCC 25922.

Pričakovani rezultati so:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae in Salmonella enterica ssp arizonae dajejo pozitivno reakcijo (srednje modra barva).
• Pri Escherichia coli bi moral biti rezultat negativen, torej pričakujemo, da ne bo prišlo do spremembe barve (zelena) ali da bo zaradi fermentacije glukoze postala rumena.

Omejitve

Ne uporabljajte juhe, ki kaže motnost, oborine, spremembo barve ali kakršne koli znake poslabšanja.

Reference

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiološka izolacija Salmonella spp. in molekularna orodja za njegovo odkrivanje. Uninorte Health. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73–94. Dostopno na: scielo.org.co
2. BBL. Juha iz Malonate, Ewing spremenjena. 2007. Dostopno na: bd.com
3. Senna Laboratories. Juha Malonato. Dostopno na: cientificasenna.com
4. RenyLab. Juha Malonato. 2013.Dostopno na: es.renylab.ind.br
5. Mbiolog Diagnostika. Juha Malonato. Dostopno na: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
7. Conda Pronadisa Laboratories. Fenilalanin malonat juha. Dostopno na: condalab.com