LAKTOZIRANA JUHA: TEMELJ, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2025

Brozgo laktoze je sredstvo ne - selektivnem mediju tekočina kulture, ki se uporabljajo predvsem kot na predhodno obogatitev v izolaciji sevov salmonele mikrobiološke analize predelanih živil, mlečne izdelke ali vodo. To priporoča Mednarodna komisija za mikrobiološke specifikacije za živila (ICMPF).

Medij vsebuje encimsko prebavo želatine, mesni ekstrakt in laktozo, snovi, potrebne za rast bakterij. Poleg tega je laktoza fermentacijski ogljikov hidrat, zato jo nekateri koliformi lahko razgradijo s proizvodnjo plina.

Dojene juhe z motnostjo. Vir: Fotografijo avtor mag. Marielsa gil

Zaradi tega laktozno juho priporoča Ameriško združenje za javno zdravje (APHA) za domnevno študijo skupnih in fekalnih koliformnih bakterij, ki jo ocenjujejo kot odlično alternativo za nadomeščanje juhe iz lavril sulfata s triptozo v standardni tehniki Najverjetnejšega števila (MPN). ), ki se uporablja za mikrobiološko analizo vzorcev hrane, mleka in površinske vode, podzemnih, rekreacijskih, gospodinjskih in industrijskih odpadkov.

Osnove

Za mikrobiološko analizo nekaterih vzorcev je bistven predhodni postopek obogatitve, da lahko obnovimo določen mikroorganizem, ki je lahko v zelo majhni količini ali v neugodnih pogojih, ki kršijo ali zmanjšajo njegovo sposobnost preživetja.

Tak primer je posušena in predelana hrana, po možnosti onesnažena s Salmonellas sp. Če so bakterije prisotne, so med postopkom proizvodnje izdelka utrpele fizične in kemične zlorabe.

Tako, da so mikroorganizmi izpostavljeni škodljivim dejavnikom, kot so dehidracija, izpostavljenost zaviralnim ali strupenim produktom ter prekrivanje, ki nastane zaradi prisotnosti drugih bakterij v večji količini.

V tem smislu laktozna juha popravlja učinek na poškodovane strukture mikroorganizma, zaradi česar se obnavlja in razmnožuje na tak način, da ga je mogoče zaznati.

Prav tako ima laktozna juha sposobnost redčenja zaviralnih snovi, ki lahko vplivajo na njeno sposobnost preživetja, kar omogoča njen razvoj. Poleg tega je prehranska sestava laktozne juhe strateško ugodna za rast salmonele sp pred drugimi mikroorganizmi.

Za dokončno identifikacijo ga je treba subkultivirati do drugih dokončnih kulturnih medijev.

Po drugi strani pa sestava medija omogoča tudi odkrivanje mikroorganizmov, ki fermentirajo laktozo, ki proizvajajo plin.

Priprava

Za pripravo litra laktozne juhe je treba 13 gramov dehidriranega medija stehtati in raztopiti v 1000 ml destilirane vode.

Za raztapljanje medija v vodi lahko raztopino nekoliko segrejemo, vendar ne preveč.

Ko je raztopina homogena, se pripravi na naslednji način: če želimo uporabiti brozgo za iskanje koliform, pripravimo posodo za epruvete, v katero vstavimo durhamovo fermentacijsko cev.

Durhamova cev je zelo pomembna podrobnost, saj bo omogočila zaznavanje tvorbe plinov, podatkov velike vrednosti pri iskanju koliform.

Ko so epruvete pripravljene, se v njih raztopi 10 ml laktozne juhe, količina, ki mora zadostovati za pokritje celotne epruvete Durham.

Če želite uporabiti laktozno brozgo kot pred-obogatitveno juho, ni treba postaviti Durhamove fermentacijske cevi. V tem primeru je potrebna večja količina medija (225 ml), ki ga bomo postregli v 500 ml steklenicah, s širokimi usti in s termo odporno vijačno zaporko.

Nato se epruvete ali bučke 15 minut avtoklavirajo pri 121 ° C.

Medij mora ostati pri končnem pH 6,9 ± 0,2 pri 25 ° C.

Bučke hranite do uporabe v hladilniku.

Pred uporabo je treba brozge spraviti na sobno temperaturo.

Po drugi strani lahko laktozno juho pripravimo tudi v dvojni koncentraciji.

Nekateri laboratoriji dodajo bromokresol vijolično v laktozno juho kot pH indikator, da prikažejo epruvete, v katerih je zaradi spremembe barve fermentirala laktoza. V tem primeru brozga prevre vijolično barvo, če fermentacija postane rumena.

Prijave

V mikrobioloških laboratorijih laktozno juho pogosto uporabljajo, saj je razmeroma poceni medij, ki nudi zanesljive in hitre rezultate (24-48 ur).

Uporablja se lahko za analizo skupnih in fekalnih koliform v hrani in vodi ali kot pred-obogatitvena juha za salmonelo.

Predbogatenje

Predbogatenje je korak pred obogatitvijo vzorcev, ki močno izboljša obnovo bakterij iz roda Salmonella v predelani hrani.

V ta namen vzamemo trden vzorec hrane (25 gramov) ali tekočine (25 ml) v 225 ml laktozne juhe, inkubiramo 24 do 48 ur. Nato se bo subkultiviral v obogatenem mediju, kot je sestitna cistinska juha ali tetrationatirana juha. Nato nadaljujte na XLD in SS selektivne medije.

Totalna in fekalna koliformna analiza

Je odličen medij kot pokazatelj onesnaženosti z blagom.

Zaradi tega je laktozna juha idealna za domnevno fazo študije koliform po metodi Najverjetnejše število.

Za vzorce, pri katerih obstaja sum večje količine koliform, se bo cepilo manjše količine (1 ml), medtem ko se za vzorce, pri katerih obstaja sum na manjšo količino koliform, odvzame večja količina vzorcev (10 ml).

Za analizo naredimo 10 ^-1 , 10 ^-2 , 10 ^-3 razredčitve, ki tvorijo baterijo s 3-5 epruvet za vsako uporabljeno koncentracijo.

Po vsakem redčenju se v laktozne juhe seme enak volumen.

Epruvete se inkubirajo 24 ur. Negativne juhe inkubiramo nadaljnjih 24 ur.

Razlaga rezultatov je narejena z opazovanjem dveh značilnosti: prva je prisotnost ali odsotnost motnosti in ker ta medij ne vsebuje kazalnika pH, barvne spremembe ne bo spremenjene.

Drugi je proizvodnja plina ali ne. Plin se v cevi Durham zlahka opazi s pojavom enega ali več zračnih mehurčkov v njem.

Šteje se za pozitivno, če opazimo obe značilnosti, to je motnost pri proizvodnji plina. Pozitivne epruvete je treba ponovno posaditi v potrditvene medije (2% briljantno zeleno juho in brozgo ES).

Nadzor kakovosti medija

- Pri pripravi gojišča je pomembno, da ne pozabite postaviti epruvete Durhams, če je namen istega proučevanje koliform.

- Ne sterilizirajte medija pred sterilizacijo.

- Razporedite po epruvetah pred sterilizacijo, nikoli po njej.

- Ne uporabljajte, če je medij star več kot 3 mesece.

- Ne uporabljajte, če opazite kakršno koli spremembo običajnih lastnosti medija.

- Pri pripravi šarže laktozne juhe preizkusite njeno kakovost s setvijo znanih sevov, kot so Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii in Klebsiella pneumoniae. Zelo dobro uspevajo, s proizvodnjo plina (pozitiven nadzor).

- Vključuje lahko tudi Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium ali Enterococcus faecalis, ki dobro rastejo, vendar brez proizvodnje plina (negativni nadzor).

- Upoštevati je treba, da je prvotna barva dehidriranega medija bež, barva pripravljenega medija pa zelo lahka in prozorno rumena. Če opazimo spremembo barve ali videza, se lahko poslabša.

Reference

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Okoljska biologija in mikrobiologija. (2013) 1. izdaja. University of Cartagenas, Kolumbija.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B in Velázquez O. (2009). Tehnike mikrobiološke analize živil. 2. izd. Fakulteta za kemijo, UNAM. Mehika.
3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Laktozna juha z dvojno koncentracijo (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Primerjava tehnik črpanja koliformnih bakterij iz usedlin jezera Xochimilco, Mehika. Spoštovani argent. mikrobiol. 2013; 45 (3): 180–184. Dostopno na: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Določitev mikrobiološke kakovosti artezijskih vodnjakov v okrožjih oddelkov Central, Cordillera in Capital Municipality. Mem. Znanost. Zdravje 2013; 11 (1): 5–14. Na voljo pri: scielo.iics.