EC JUHA: TEMELJ, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

ES brozgo ali brozge Escherichia coli je selektivni tekoče gojišče kulture. Ta medij priporočajo Standardne metode za štetje skupnih in fekalnih koliform, z najverjetnejšo tehniko števila (MPN) v vzorcih vode in hrane, kjer je glavno sredstvo Escherichia coli.

ES juha je sestavljena iz tripteina, laktoze, žolčnih soli, dikalijevega fosfata, monokalijevega fosfata, natrijevega klorida in vode. Njegova formula je strateško zasnovana tako, da spodbuja rast skupnih in fekalnih koliform ter preprečuje razvoj drugih spremljajočih mikroorganizmov.

Slika v obliki pripravka brozge ES. Vir: Pixabay.com

Bakterija Escherichia coli je glavni fekalni koliform, ki je prisoten kot onesnaževalec v vodi in živilih, saj je povzročitelj pomembnih prebavnih motenj.

Treba je opozoriti, da obstaja veliko serotipov bakterije Escherchia coli; Med njimi lahko omenimo enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopatogeni (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) in enteroaggregativ (EAEC).

Ta medij lahko omogoči razvoj vseh, vendar ne da bi jih lahko ločeval drug od drugega. Za to so potrebna dodatna testiranja.

Mikrobiološka študija vode in hrane po najverjetnejšem številu (MPN) za iskanje skupnih in fekalnih koliform je protokol, ki je sestavljen iz več faz; domnevna faza, potrditvena in zaključna faza. EC brozga se uporablja v potrditveni fazi.

Osnove

EC brozga

Medij ES temelji na zagotavljanju prehranskih elementov, potrebnih za optimalen razvoj skupnih in fekalnih koliform, v katere so vključene bakterije Escherichia coli.

Te prehranske elemente zagotavlja triptein, saj je odličen vir peptidov in aminokislin. Poleg tega vsebuje tudi laktozo, fermentiran ogljikov hidrat, ki zagotavlja energijo in omogoča, da pokažejo, ali bakterije proizvajajo plin.

Po drugi strani medij vsebuje žolčne soli, ki dajejo selektiven značaj, saj zavira rast gram-pozitivnih mikroorganizmov, ki so lahko prisotni v vzorcu.

Prav tako dikalijevega fosfata in monokalijevega fosfata delujeta kot sistem za uravnavanje pH. Ta sistem je nujen, ker laktoza, ki jo vsebuje juha, nagiba medij, ko fermentira mikroorganizme, vendar to nadomestijo fosfatne soli.

Zato so ti elementi bistveni, saj lahko nekontrolirana kislost vpliva na pravilen razvoj iskanih mikroorganizmov.

Natrijev klorid osmotsko stabilizira medij, medtem ko je voda topilo za prisotne solute in daje tekoči konsistenci medij.

Novobiocin modificirana EC brozga

Okrend in Rose sta ustvarila raznovrstno brozgo ES, imenovano novobiocin spremenjena brozura ES. Modifikacija je bila sestavljena iz zmanjšanja koncentracije žolčnih soli in dodajanja 20 mg / dl novobiocina.

Ta sprememba favorizira okrevanje enterohemoragičnih sevov Escherichia coli (O157: H7).

Ta bakterijski serotip povzroča hud hemoragični kolitis, ki lahko privede do hemolitičnega uremičnega sindroma (HUS); kar lahko povzroči akutno odpoved ledvic, z visoko stopnjo umrljivosti, ki lahko pri starejših doseže do 50%.

Zaradi obolevnosti in umrljivosti, ki jo vsako leto povzroča ta bakterija zaradi uživanja onesnažene hrane, Ministrstvo za kmetijstvo ZDA (USDA) močno priporoča uporabo tega medija.

Priprava

EC brozga

Natehtamo 37,4 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru destilirane vode. Mešanico je treba pustiti stati 5 minut. Nato se v toplotnem viru konča raztapljanje s pogostim mešanjem.

Po raztapljanju se porazdeli v predhodno kondicionirane epruvete z Durhamovo epruveto. Sterilizirajte v avtoklaviranju pri 121 ° C 15 minut.

PH medija mora biti 6,9 ± 0,2. Barva dehidriranega medija je bež, pripravljen medij pa svetlo rumen.

Bučke hranite do uporabe v hladilniku. V času uporabe morajo biti juhe pri sobni temperaturi.

Po drugi strani pa lahko brozgo ES pripravimo tudi v dvojni koncentraciji.

Novobiocin modificirana EC brozga

Odtehtamo 36,7 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru vode. Preostali del pripravka je enak zgoraj opisanemu.

Uporaba

Totalna in fekalna koliformna analiza

EC broz je idealen za potrditveno fazo preučevanja koliform z metodo NMP, tako v vzorcih vode, kot tudi v farmacevtskih izdelkih in živilih.

Motne, plinske laktozne juhe, ki jih dobimo v domnevni fazi, je treba posejati v 2% žolčne svetle zelene juhe in EC brozgo.

Za skupne kolilike se EC brozge inkubirajo aerobno 24 do 48 ur pri 37 ° C, za fekalne kolilike pa aerobno inkubirajo 24 do 48 ur pri 44 ° C.

V obeh primerih se to razlaga tako: motne cevi s proizvodnjo plina veljajo za pozitivne. Če v 24 urah ne pride do plina, se inkubacija nadaljuje do 48 ur.

ES pozitivne juhe preidejo v popolno potrditveno fazo, ki jo sestavljajo ponovni posegi na selektivne medije, kot so agar Mac Conkey, EMB agar ali Endo agar.

Če je uporabljena juha EC, ki je spremenjena z novobiocinom, je priporočljivo, da se pozitivne epruvete sesedejo na agar Mac Conkey s sorbitolom.

QA

Vsaka serija pripravljenega gojišča mora biti nadzorovana s kakovostjo. Najprej je treba oceniti sterilnost medija. V tem smislu eno ali dve juhi inkubiramo v aerobiozi 24 ur pri 37 ° C brez inokulacije. Pričakovani rezultat je prozorna juha, brez motnosti ali spremembe barve.

Drugič, ovrednotiti moramo rast znanih sevov, za to pa lahko uporabimo naslednje bakterije: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

V vseh primerih je pričakovati zadovoljiv razvoj mikrobov ob opazovanju motne juhe s proizvodnjo plina za E. coli in brez plina za salmonelo.

Drugi sevi, ki jih je mogoče vključiti v kontrolo, so: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Ti sevi morajo biti v celoti zavirani.

priporočila

-Predmestitev Durhamovih cevi je bistvenega pomena za preučevanje koliform.

-Predelite medij v epruvete pred sterilizacijo, nikoli po njej.

-Ne uporabljajte, če je medij star več kot 3 mesece.

-Ne uporabljajte, če opazite kakršno koli spremembo običajnih lastnosti medija.

Reference

1. Britannia Laboratories. ES srednje. 2015. Dostopno na: britanialab.com
2. Enterohemoragična E. coli. Center za varnost preskrbe s hrano in javno zdravje. 2010.Dostopno na: cfsph.iastate.edu
3. Korporacija Neogen. Medij ES. Dostopno na: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Novobiocin spremenjen medij ES. Dostopno na: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Zaznavanje, izoliranje in karakterizacija Escherichia coli, ki proizvaja toksin Shiga iz svežega mletega mesa mesarjev v pokrajini Concepción iz Tucumána. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284–287. Dostopno na: www.scielo.org.