NEUBAUERJEVA KOMORA: ZGODOVINA, ZNAČILNOSTI, UPORABE - BIOLOGIJA

Neubauer komora , hematometer ali hemocitometra, ki je na laboratorijski instrument, ki sestoji iz debele steklene plošče. Ta kamera se uporablja za štetje nekaterih vrst celic, na primer rdečih krvnih celic, belih krvnih celic in trombocitov, čeprav se lahko uporablja za štetje sporov, sperme, zajedavcev itd.

Predstavlja nekaj zelo značilnih lastnosti, saj je sestavljen iz 3 con, osrednje za štetje in dveh podpornih con. Vsaka komora ima dve števni coni ali križne vezi, eno na vrhu in eno na dnu.

Neubauerjeva komora. Vir: SantiBadia. Urejena slika.

Ti imajo več oddelkov v obliki mreže. Površine štetja so srednje kvadratki, ki jih najdemo na štirih vogalih obeh mrež, skupaj z osrednjim kvadratom.

Sestavljanje kamere je treba izvesti zelo previdno, saj katera koli podrobnost vpliva na število celic. Obstaja veliko napak, če pa se katera od njih pojavi, je treba kamero razstaviti, očistiti in ponovno sestaviti. Glavne napake vključujejo naslednje:

Prepolna komora ali prepolno polnjenje komore se posuši, poskus odstranjevanja odvečne tekočine z gazo, prekucanje komore pri prevozu, napolnjevanje umazane ali mokre komore, med drugim redčenje ali vzorec ne mešate dobro. Vse te napake bodo povzročile neresnično vrednost.

Zgodovina

Komora Neubauer je natančen instrument, postopek izdelave pa je podvržen strogemu nadzoru kakovosti. Ustvarjen je za natančno štetje delcev ali tvorjenih elementov na mm ³ , kot so celice v različnih tekočinah. Njegova nežna grafika je izklesana z diamantnim svinčnikom.

Značilnosti komore Neubauer

Celotna komora je velikosti običajnega diapozitiva, tako da se lahko postavi na oder mikroskopa.

Komoro sestavljajo tri osrednje pravokotne površine (a, b, c). V coni "b" se nahaja območje R ali štetje, imenovano tudi retikulum. Eno na vsaki strani kamere, ločeno z cono "d".

Grafični diagram Neubauerjeve zbornice. Vir: Praktični vodnik po hematologiji. Šola bioanalize Univerze v Carabobu, Venezuela.

Vsaka mrežica je polirano območje, ki vsebuje vklesano območje štetja. Sestavljen je iz kvadrata s površino 9 mm ² in je notranje razdeljen na 9 kvadratov s površino 1 mm ² . Štirje vogalni kvadratki so razdeljeni na 16 manjših kvadratov ( območje 0,0625 mm ² ).

Te mreže so tvorjene z nizom milimetrskih črt, ki se sekajo med seboj, kar predstavlja popolnoma vgrajene mreže, ki so razmejene na določene meritve. Te črte so bile vrezane z diamantno konico.

Izboljšan Neubauerjev retikulum. Vir: Praktični vodnik hematologije Šole za bioanalizo Univerze v Carabobu, Venezuela.

Štiri strani ustrezajo območju za štetje. Na teh straneh ali vogalih šteje večina celic (rdeče krvne celice in levkociti), trombociti pa se štejejo v osrednjem območju.

Osrednja cona ima več razdelkov, sestavlja jo kvadrat 1 mm ^2, razdeljen na 25 kvadratov s površino 0,04 mm ² . Ti so razdeljeni na 16 mrež s površino 0,0025 mm ² .

Opis izboljšanega Neubauerjevega retikuluma. a) kvadrat vogalov, b) osrednji kvadrat, c) srednji kvadrat osrednjega kvadrata. Vir: Praktični vodnik hematologije Šole za bioanalizo Univerze v Carabobu, Venezuela.

Območji „a“ in „c“ služita kot podpora za namestitev posebnega pokrovnega predmeta, imenovanega hematometrični pokrov ali hematimeter.

Višina med folijo in površino za štetje je 0,1 mm. Podatki, ki so potrebni za končne izračune, so meritve površine površin, pa tudi višine komore in redčenja vzorca.

Prijave

Uporablja se za štetje celic. Posebej je koristen na področju hematologije, saj omogoča štetje treh krvnih celic; to so rdeče krvne celice, bela krvna celica in trombociti.

Vendar se lahko uporablja na drugih območjih, na primer za štetje semenčic, spore, bakterij ali drugih pomembnih predmetov, odvisno od vrste vzorca.

Kako uporabiti?

Priprava vzorcev

Za izvajanje števila celic se običajno začne iz prejšnjega redčenja. Primer: za preštevanje belih krvnih celic pripravimo razredčitev 1:20 s Turkovo tekočino. Redčenje dobro premešamo pred nalaganjem pipete in namestitvijo Neubauerjeve komore.

Obstajajo časi, ko razredčitev 1:20 ni dovolj za štetje. Na primer, pri bolnikih, ki trpijo za določenimi vrstami kronične levkemije. V teh primerih je treba narediti večje razredčitve, kot je 1: 100.

Če je na drugi strani število zelo majhno, kot pri hudih levkopenijah, lahko za koncentracijo vzorca naredimo manjša redčenja. Primer: naredite lahko razredčitev 1:10.

Spremenjene spremembe vplivajo na izračune.

Montaža Neubauerjeve komore

Komora Neubauer je sestavljena tako, da v osrednji prostor postavi hematometrični drsnik. Oba morata biti zelo čista in suha. Za postavitev lamele jo primemo za robove in nežno spustimo na kamero.

To se napolni tako, da se konica samodejne pipete ali pipete Thoma postavi pod kotom 35 ° na rob območja nakladanja. Tekočina se gladko odvaja, nakladalno območje pa napolni s kapilarnostjo. To se naredi z obeh strani, da se naložijo obe križi.

Očesnih mrežic ne bi smeli preobremeniti, prav tako jih ne smete zaužiti tekočine. Obremenitev mora biti natančna. Pomembno je, da polnjenje poteka homogeno, torej ne sme biti mehurčkov.

Ko je komora sestavljena, jo pustimo počivati 2 minuti, da celice padejo na dno in je njihovo vizualizacijo in štetje lažje.

Po času počitka se namesti na oder svetlobnega mikroskopa za opazovanje. Najprej je osredotočen z 10X ciljem in po potrebi preide na 40X.

Za izboljšanje njegove vizualizacije se prehod svetlobe iz mikroskopa zmanjša. Če želite to narediti, se kondenzator spusti in membrana se rahlo zapre.

Štetje

Za število belih krvnih celic ali levkocitov je treba upoštevati celotno površino štirih srednjih vogalnih kvadratov in osrednji kvadrat vsakega retikuluma.

Štetje se začne na kvadratu v zgornjem levem kotu. Začnete od prvega kvadrata prve vrstice, torej od leve proti desni, dokler ne pridete do nasprotnega konca.

Tam se spustiš in pogledaš nazaj od desne proti levi, dokler ne prideš do drugega konca, in tako naprej, se celice znotraj vsake mreže štejejo cikcak. Šteje se 16 mrež na vsakem srednjem kvadratku.

Da se izognete štetju celic dvakrat, obstajajo pravila o celicah, ki se nahajajo na mejnih črtah vsake mreže. Celice v levi in zgornji vrstici se štejejo, celice v desni in spodnji vrstici pa se ne upoštevajo.

Na voljo mora biti ročni števec celic, da upravljavec pritisne tipko naprave tolikokrat, kolikor opazuje celice. Z uporabo števca lahko operater šteje, ne da bi moral pogledati gor z mikroskopskega polja. Na koncu štetja boste videli skupno število preštetih celic.

Izračuni

Za izračune lahko nadaljujete na več načinov. Eno rešetko je mogoče šteti ali oboje šteti in oboje povprečiti. V teh dveh situacijah je treba preštete celice pomnožiti s faktorjem, kar bi bilo v tem primeru 40. In tako ^dobimo skupno število na mm ³ .

Če pa se dve rešetki štejeta in povprečje ne vzame, ga je treba pomnožiti z različnim faktorjem, v tem primeru z 20.

- Faktor množenja

Tukaj je izračunan faktor množenja.

Pri izračunih se upoštevajo različni podatki, vključno s titrom redčenja, višino komore in prešteto površino.

Redčenje

Uporabljeno običajno redčenje je 1:20 za število levkocitov.

Višina komore

Višina med prekatom in listom krvnih celic je 0,1 mm.

Šteje se površina

Če štejemo 5 kvadratov površine 1 mm ² , to pomeni, da je skupno število števcev 5 mm ² . Te podatke je treba pomnožiti z višino komore, da dobimo skupno prebrano prostornino. To je 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³ .

Formule in izračuni

Glede na podatke, ki jih imamo, je rečeno:

Če je v 0,5 mm ^{3 - se} šteje --- število celic

V 1 mm ³ --- bo - X n ° celic

X št. Celic = (število celic šteje x 1) / 0,5 mm ³

Vendar je treba upoštevati tudi redčenje. Zato je formula naslednja:

(število preštetih celic x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Na koncu, če povzamem, lahko število preštetih celic pomnožimo s 40. Tako ^dobimo vrednost levkocitov na mm ³ .

Če štejemo dve mrežnici, se podatki za prešteto območje spremenijo, kar bi bilo v tem primeru 10 kvadratov, to je 10 mm ² . In skupno prešteto prostornino 1 mm3. Formula bi bila:

(število preštetih celic x 1) x 20/1 mm ³

V tem primeru bi bil faktor množenja 20.

Napake

-Če je pri nalaganju kamere presežena ali presežena s tekočino, se višina fotoaparata razlikuje. Posledica tega je, da je število višje od pravega. Če poskušate odstraniti presežek z gazo ali bombažem, je to velika napaka. To dejanje bo povzročilo koncentracijo celic, kar bo povečalo število.

-Če je slabo naloženo, bo število manjše od pravega.

-Če je kamera nameščena in se pusti sušiti, ni več mogoče šteti, ker bo dala napačne rezultate.

-Če redčenja vzorca pred nalaganjem komore ne pomešamo dobro, obstaja nevarnost napake pri odčitku, saj celice ne bodo homogeno razporejene. Zato bo prišlo do nižje ali višje koncentracije celic, odvisno od tega, ali vzorec odvzamemo s površine tekočine oziroma z dna epruvete.

-Za prisotnost mehurčkov se zmanjša količina tekočine, ki mora vstopiti v retikulum, kar ovira pravilno vizualizacijo in porazdelitev celic. Vse to pomembno vpliva na rezultate.

- Med štetjem ne glejte z mikroskopa, dokler ni končan vsak velik kvadrat, da se ne bi izgubili.

-Eden razlog za napako je nagibanje kamere po namestitvi. Zaradi tega je treba temeljito dvigniti stopnjo mikroskopa.

Priporočilo

Če iz kakršnega koli razloga zaznate nepravilnosti pri polnjenju komore, priporočamo, da ta pripravek razstavite, očistite komoro in ponovno sestavite iz nič.

Pri čiščenju fotoaparata bodite zelo previdni, da ne boste praskali prečnih las. Po drugi strani pa bodite pozorni, da je hematometrični drsnik občutljiv in lomljiv. Nepravilno ravnanje ga lahko zlomi.

Preden začnete šteti, se prepričajte, da so celice dobro razporejene. Neenakomerna porazdelitev celic nastane zaradi slabega mešanja vzorcev ali redčenja. Če se to zgodi, je treba sklop ponoviti.

Eden od načinov vedeti, ali so celice dobro razporejene, je s primerjanjem števila vsakega velikega kvadrata, število celic, preštetih za vsak kvadrat, ne sme biti pretirano različno od ene do druge.

-Če je število belih krvnih celic nad 50.000 mm ^3, je priporočljivo, da se število ponovi, s čimer se razredči več.

-Če spremenite redčenje, morate preračunati faktor množenja, saj to vpliva na formulo.

Reference

Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Primerjava koncentracije sperme s pomočjo Maklerjeve komore in Neubauerjeve komore. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443–445. Na voljo v: scielo.
Neubauerjeva komora. (2018, 27. marec). Wikipedija, prosta enciklopedija. Datum posvetovanja: 04:10, 23. junij 2019 z es.wikipedia.org
Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Uporaba alternativne metode štetja komore Neubauer za določitev koncentracije Trichomonas vaginalis. Rev. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180–8. Dostopno na: researchgate.net
Gómez-Pérez Roald E. Analiza Spermograma. Vel. Venez. Endokrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19–20. Dostopno na: ve.scielo
Hematološki praktični vodnik Šole za bioanalizo Univerze v Karabobu. Venezuela, 1998

NEUBAUERJEVA KOMORA: ZGODOVINA, ZNAČILNOSTI, UPORABE - BIOLOGIJA - 2026