MAJHNI MADEŽ GRÜNWALD-GIEMSA: UTEMELJITEV, TEHNIKA IN UPORABE - BIOLOGIJA - 2025

Maj Grünwald-Giemsa ali Pappenheim madež je razlika tehniko barvanja, ki meša Giemsa maja Grünwald reagenti. Uporablja se za razlikovanje normalnih in nenormalnih krvnih celic v razmazih periferne krvi in ​​kostnega mozga, pa tudi za obarvanje histoloških odsekov in citoloških vzorcev.

Oba reagenta - Giemsa in May Grünwald - izhajata iz barvanja Romanowskega, tehnike, ki temelji na kombinaciji kislih in bazičnih barvil.

Razmaz, ki kaže segmentiran nevtrofil in mileocit v primeru kronične mieloidne levkemije, obarvan z madežem May Grünwald Giemsa. Dr Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) prek Wikipedia.org.

Giemsa je izboljšala tehniko tako, da je z glicerolom stabilizirala mešanico eozina, metilen modrega in njihovih derivatov. Namesto tega May Grünwald uporablja eozin in metilen modro, pri čemer kot topilo uporablja metanol. Ta strateška kombinacija je dala odlične rezultate.

Čeprav v smislu opazovanja celične morfologije deluje podobno kot madeže Giemsa in Wright, ta tehnika izboljšuje prejšnjo z rafiniranjem obarvanja zajedavcev, ki povzročajo malarijo, bolezen Chagasa, lajšmanijo in trihomonijazo.

Poleg tega se je izkazala za zelo uporabno tehniko za citološko preučevanje spermatične tekočine. Izpostavil se je ne le po tem, da je pokazal morfološke značilnosti semenčic, ampak tudi z omogočanjem diferenciacije levkocitov, epitelijskih celic in celic spermatogeneze z veliko učinkovitostjo.

Osnove

Tehnika sledi utemeljevanju Romanowskih madežev, pri katerih imajo kisla barvila selektivno afiniteto do osnovnih celičnih komponent, kisle komponente pa privlačijo osnovne madeže.

Razloženo na drug način, imajo tako celične strukture kot barvila pozitivne ali negativne električne naboje; kot odbojki, različni naboji pritegnejo.

Na primer, osnovna barvila, kot je metilen modro, so pozitivno nabita in privlačijo negativno nabiti strukturi. Zato to barvilo obarva jedra, bogata z DNK in RNK, ki imajo negativno nabiti fosfatne skupine.

Tudi zrnca segmentiranih bazofilcev in citoplazme mononuklearnih belih krvnih celic, ki vsebujejo RNA.

Prav tako kislinsko barvilo nosi negativen naboj, zato se veže na pozitivno nabite strukture, kot so eritrociti in zrnca segmentiranih eozinofilcev. Kar zadeva zrnca segmentiranih nevtrofilcev, ta fiksirajo oba barvila.

Raznolikost barvil

V tej tehniki obstaja kombinacija reakcij med ortohromatskimi in metahromatskimi barvili. Ortohromatike (eozin in metilen modro) se vežejo na celično strukturo, s katero so povezane, in zagotavljajo stabilno barvo, ki se ne spreminja.

Po drugi strani pa metahromati (derivati ​​metilen modre azure A in azurne B) spreminjajo svojo prvotno barvo, ko se pritrdijo na določeno strukturo, celo odtenki so lahko celo različni.

Nazadnje korak, ki ga je sprejela raztopina May Grünwald, zahteva prisotnost vode, saj bo brez tega barvilo prodrlo v strukture, vendar se ne bo pritrdilo. Da se to zgodi, mora barvilo postati polarno ali ionizirano in se tako lahko oboriti in vezati na sorodne strukture.

Tehnika

materiali

- drsni diapozitivi.

- Mostovi za barvanje.

- rešitev maj-Grünwald.

- madež Giemsa.

- Destilirana voda.

Maj Grünwald barva koncentrirano raztopino

0,25 g eozin-metilensko modrega (madež po May Grünwald) je treba stehtati in raztopiti v 100 ml metanola. Nato pripravek mešamo 1 uro in pustimo počivati ​​24 ur. Ko čas mine, ga filtriramo.

Za uporabo tehnike je treba barvilo May Grünwald razredčiti na naslednji način: za 200 ml razredčenega barvila izmerite 30 ml koncentrirane raztopine, dodajte 20 ml puferne raztopine in 150 ml destilirane vode, prilagojene na pH 7,2-7,3 . Kasneje ga mešamo in filtriramo.

Koncentrat za barvanje Giemsa

0,5 g azure-eozin-metilen modrega (madež po Giemsa) je treba stehtati, raztopiti v 50 ml metanola in 50 ml glicerina, ki je dodan mešanici.

Za izvedbo tehnike razredčite 1:10 z pufersko raztopino in pustite počivati ​​10 minut. Po potrebi ga lahko filtriramo.

Priprava puferske raztopine pri pH 7,2

Odtehtati jih je treba:

- 40 mg kalijevega di-hidrogenfosfata (KH2PO4).

- 151 mg di-natrijevega hidrogenfosfata 12-hidrata (Na2HPO4).

Obe spojini raztopimo v 100 ml vode.

Postopek obarvanja razmaza krvi ali kostnega mozga

Obstajata dva načina: klasični in hitri.

Klasični način

1. Razmage pokrijemo od 2 do 3 minute z razredčeno raztopino May-Grünwald.
2. Operite z vodno destilirano vodo, da odstranite prejšnjo raztopino.
3. Pokrijte z isto puferirano raztopino za pranje in pustite 1 minuto. Ideja je, da se predhodno barvilo pritrdi na strukture in da so celice hkrati hidrirane.
4. V pufrano vodo dodajte 12 kapljic razredčene tinkture Giemsa in pihajte, da se meša in homogenizira. Pustite počivati ​​15 do 20 minut.
5. Mazite sperite z vodno destilirano vodo in posušite na zraku.
6. Osredotočite se in si obarvajte krvne celice pod svetlobnim mikroskopom z uporabo cilja 40X. Po potrebi lahko uporabimo 100X.

Hiter način

1. Maza pokrijemo z razredčenim majem Grünwald madež 1 minuto.
2. Operite z vodno destilirano vodo.
3. Pokrijte z vodno vodo in pustite počivati ​​1 minuto.
4. Dodamo razredčen madež Giemsa in pustimo 5 minut.
5. Izperite z vodno destilirano vodo in pustite, da se posuši na zraku.

Tu opisane tehnike so smernice, vendar je treba upoštevati, da se postopki in čas obarvanja razlikujejo glede na trgovsko podjetje, ki distribuira reagente. Priporočljivo je slediti korakom, ki jih vsaka trgovska hiša strogo navaja.

Tehnika barvanja razmazov spermatične tekočine

1- Mazilo pokrijte s tanko plastjo raztopine majske Grünwald 4 minute.

2- Odstranite barvilo in sperite z destilirano vodo.

3- Postavite plast razredčene Giemse (1:10) v destilirano vodo za 15 minut.

4- Odstranite barvilo in sperite z destilirano vodo.

5- Pustite, da se posuši in opazite pod mikroskopom.

Pričakovane barve z majem Grünwald Giemsa

Pomembne specifikacije

Tehnika zahteva, da imajo reagenti in pralne raztopine pH prilagojen na 7,2 -7,3, tako da afiniteta barvil za celične strukture ne bo izkrivljena in pričakovana končna barva se ne spreminja.

Prijave

Klinični laboratoriji to tehniko uporabljajo za obarvanje razmikov periferne krvi in ​​kostnega mozga, odsekov tkiv in citologij.

Na hematološkem področju je ta tehnika življenjskega pomena pri preučevanju nepravilnosti celic glede na obliko, velikost in število. Je zelo dragoceno orodje za diagnosticiranje nekaterih bolezni, kot so levkemije in anemije.

Poleg tega ima izjemno koristnost pri iskanju zajedavcev na hematološkem (Plasmodium sp in Trypanosoma cruzi) ali histološkem (Leishmanias sp) območjih.

Vaginalna citologija

Glede vaginalne citologije je ta tehnika še posebej ugodna pri opazovanju Trichomonas vaginalis. To je pomembna ugotovitev, saj njegova prisotnost simulira slike karcinoma in situ, ki kasneje izginejo, ko se parazit izloči.

Vzorec sperme

Je idealno orodje za preučevanje vzorcev semenčic, saj ponuja dragocene informacije o kakovosti semenčic.

Podatki, ki jih ponuja, se nanašajo predvsem na število in morfologijo, pa tudi na sočasne celice, ki so lahko prisotne in so življenjsko pomembne, kot so zarodne celice, levkociti in epitelijske celice.

S to analizo je mogoče opisati nepravilnosti, ki so jih opazili pri spermi v glavi, vratu, srednjem delu in glavnem kosu.

Poleg tega lahko pomagajo tudi pri prikazu primerov hemospermije (prisotnost rdečih krvnih celic v semenu) in levkospermije ali piospermije (povečano število levkocitov v semenu).

Reference

1. Costamagna S, Prado M. Validacija svežega testa, majev Grünwald-Giemsa in Grama in kulturnih medijev za diagnozo Trichomonas vaginalis. Parazitol. 2001; 25 (1–2): 60–64. Na voljo v: scielo.
2. Merck laboratorij KGaA. Lahko Grünwald eozin metilen modro za mikroskopijo.
3. "Obarvanje maj-Grünwald-Giemsa." Wikipedija, prosta enciklopedija. 15. november 2018, 14:37 UTC 8. januar 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Panreac Laboratorij za steklene kemikalije. Reagenti za histološke tehnike, hematologijo in mikrobiologijo. Dostopno na: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Priporočilo za obarvanje krvnih madežev za odčitavanje hemograma. Nacionalni in referenčni biomedicinski laboratorij. Inštitut za javno zdravje Čila.
6. Sarabia L. Spermiogram po merilih WHO. Razvojni program anatomije in biologije. Medicinska šola. Univerza v Čilu. Dostopno na: pp.centramerica.com