OBARVANJE S KINYOUNOM: UTEMELJITEV IN TEHNIKE - BIOLOGIJA - 2026

Kinyoun obarvanje je obarvanje tehnika za madežev bakterijami in paraziti kislinsko odporna na alkohol. Izhajalo je iz modifikacije Ziehl-Neelsenove obarvanosti; Obe tehniki sta razlagani na enak način, vendar se razlikujeta v dveh elementih: pri pripravi glavnega reagenta in v tem, da tehnika Kinyoun ne uporablja toplote.

Zaradi tega je znan tudi kot hladno modificiran hladni madež Ziehl-Neelsen ali Kinyoun. Indiciran je za obarvanje Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atipičnih mikobakterij, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris in Cyclosporas cayetanensis.

Cryptosporidium parvum obarvan z Kinyoun madežem. Punlop Anusonpornperm, z Wikimedia Commons

Omeniti velja, da se Nocardia ob tej tehniki slabo obarva, saj so delno odporni na kislino in alkohol, zato je za ta rod spremenjena metodologija.

Hladno tehniko Kinyoun je kombiniralo s tehniko trihroma, ki jo je Didier prilagodil za odkrivanje kokcidije (Cryptosporidium parvum in Isospora belli) in sporov mikrosporidije (Enterocytozoon bieneusi in Encephalitozoon intestinalis).

Osnove

Glavni reagent za obarvanje je karbolfuksin ali karbolni fuksin, ki se ima lastnost vezave na karbolične kisline, ki obstajajo znotraj lipidno bogate celične stene (mikolične kisline) mikobakterij in nekaterih zajedavcev.

Te vezi ne preprečuje kisla belila; zato so mikroorganizmi opredeljeni kot hitro-kisli.

Za razliko od tehnike Ziehl-Neelsen, ki barvo fiksira s toploto, v tehniki Kinyoun ta korak ni potreben, saj raztopina karbolične fuksine, pripravljena za to tehniko, vsebuje visoko koncentracijo fenola.

Fenol raztopi lipidni material v celični steni in tako dovoli vstop barvila karbolfuksin. Potem ko barvilo prodira, ostane fiksirano kljub spiranju s kislim alkoholom.

Na ta način mikroorganizmi, ki hitro delujejo na kislini, poprimejo značilno rdečo barvo, medtem ko se vse, kar ni kislo hitro, obarva in obarva modro.

Tehnika

materiali

- Spremenjen karbolni fuksin.

- Alkohol-kislina.

- Metilen modro.

Priprava Kinyoun karbolnega fuksina

- Osnovni fuksin: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Destilirana voda: 100 ml.

Osnovni fuksin je treba počasi raztopiti v alkoholu in nenehno mešati. Kristalizirani fenol se nato stopi v vodni kopeli pri 56 ° C. Ko se raztopi, dodamo 8 ml raztopini fuksina, pripravljeni zgoraj.

Priprava kislega alkohola

- Koncentrirana klorovodikova kislina: 3 ml.

- etanol (95%): 97 ml.

Izmeriti ga je treba, združiti in mešati.

Priprava kontrastnega barvila metilen modre barve

- metilen modra: 0,3 g.

- Destilirana voda: 100 ml.

Odtehta se in raztopi.

Tehnika obarvanja Kinyoun

1- Pripravite razmaz neposredno iz vzorca, ki je lahko med drugim sputum, pljučna tekočina, usedlina urina, cerebrospinalna tekočina ali iztrebki; ali iz suspenzije mikroorganizmov, dobljenih iz čistih kolonij, razvitih v primarnih gojiščih.

2- Maza pritrdite s toploto.

3- Položite razmaz na most za obarvanje in pokrijte s pripravljenim reagentom Kinyoun karbol fuksin. Pustite počivati ​​3 do 5 minut.

4- Operite z destilirano vodo.

5- 3 minute beli s kislim alkoholom in ponovno speremo z destilirano vodo.

6- Zmešajte 1 ali 2 minuti s kislim alkoholom, dokler se ne odnese več barvil.

7- Izperite z destilirano vodo in pustite, da se odteče, tako da drsnik postavite v navpični položaj.

8- Pripravek prekrijte z metilen modro in pustite delovati 4 minute.

9- Operite z destilirano vodo in pustite, da se posuši na zraku.

10 - Preučite pri 40X in nato pri 100X.

Za izboljšanje in pospešitev obarvanja hitro kislinskih mikroorganizmov dodajte 1 kapljico vlažilnega sredstva (na primer Tergitol št. 7) 30 do 40 ml Kinyoun Carbol Fuchsin.

Nekateri laboratoriji spremenijo metilensko modro kontrastno barvo v svetlo zeleno ali pikarsko kislino; prva daje zeleno barvo ozadju, druga pa rumeno barvo.

Posebna tehnika Kinyoun za nokardije

Za izboljšanje obarvanja bakterij iz rodu Nocardia uporabljamo modifikacijo madeža Kinyoun. Tehnika je naslednja:

1- Maza pokrijemo 3 minute s Kinyoun karbol fuksinom.

2- Operite z destilirano vodo.

3- Kratko obarvajte s kislim alkoholom, pripravljenim v 3%, dokler se več ne obarva.

4- Speremo z destilirano vodo.

5- Priprava pokrijte z metilen modro in pustite delovati 30 sekund.

6- Izperite z destilirano vodo in pustite, da se posuši na zraku.

Kombinirana tehnika karbolnega fuksina in trihroma, ki jo je prilagodil Didier

Ta tehnika se priporoča za analizo vzorcev blata na spore kokcidije in Microsporidium sp hkrati. Ta postopek je naslednji:

1- Mazi pokrijemo 10 minut s Kinyoun karbol fuksinom.

2- Odstranite barvilo in sperite z destilirano vodo.

3- Beli 30 sekund z alkoholom klorovodikove kisline.

4- Speremo z destilirano vodo.

5- Maza pokrijemo z raztopino trihroma 30 minut pri 37 ° C.

6- Izperite z destilirano vodo.

7- 10 sekund belite z alkoholom iz ocetne kisline.

8- Mazilo sperite 30 sekund z uporabo 95% etanola.

QA

Kot pozitiven nadzor se pripravijo razmazi s sevi Mycobacterium tuberculosis in obarvajo z reagenti, pripravljenimi za preverjanje, ali bakterije dobijo ustrezno barvo (rdeča-fuksija).

Negativne kontrole je mogoče uporabiti tudi tako, da hitro pripravimo razmaze s katerim koli sevom, razen kislega alkohola, s čimer preverimo, ali celoten vzorec prevzame kontrastno barvo.

Kinyoun tehnika v primerjavi s tehniko Ziehl-Neelsen

Tehnika Kinyoun je preprostejša, saj odpravlja korak segrevanja, vendar je njena glavna prednost ta, da se dolgoročno izogne ​​izpuščanju hlapov, zelo strupenih in povzročajo raka. Zato je madež Kinyoun varnejši za obarvanje osebja.

Pomembno je upoštevati, da je treba paziti, da reagenti ne pridejo v neposreden stik s kožo, saj so jedki in belilo je vnetljivo.

Kar zadeva slabosti, negativni razmaz ne pomeni nujno, da organizem ni prisoten. Poleg tega lahko prisotnost celičnih naplavin povzroči napačne pozitivne učinke, kar vodi v zmedo pri diagnozi.

Referenca

1. Uporabna klinična kemija. (2016). BK Kinyoun Kit.Na voljo na: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun madež in dve kokcidiji pri virusu HIV. Medicinski vestnik dr. 2011; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA
5. Sodelavci Wikipedije. "Kinyoun madež." Wikipedija, prosta enciklopedija. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8. februar 2018. Splet. 5. januar 2019.
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Izvajanje tehnike obarvanja za sočasno diagnozo Coccidia in Microsporidia. Inštitut za higieno Univerze v Republiki. Montevideo. Urugvaj Dostopno na: higiena.edu.uy