OBARVANJE S HEMATOKSILINOM-EOZINOM: ZNAČILNOSTI, UPORABE, TEHNIKE - KEMIJA - 2026

Hematoksilin - eozin je tehniko barvanja z uporabo kombinacije barvil hematoksilinom in eozinom. Ta par barvil naredi popoln duo, saj hematokslin deluje kot osnovno barvilo, eozin pa je kislo barvilo.

Oznaka bazičnih ali kislih barvil se ne nanaša na pH, dobljen v raztopini, temveč govori o prevladujočem deležu glede na anionske ali kationske naboje, ki jih imajo, ali glede na lokacijo kromoforske skupine.

Virus: Todd Straus in Vladimir Osipov obarvan s hematoksilinom - eozinom (HE), ciliated columnar columnar epitel

V tem smislu se hematoksilin šteje za osnovno (kationsko) barvilo in ima zato afiniteto do kislih struktur, kot je jedro celic. Medtem ko je eozin, ki je kislo (anionsko) barvilo, naklonjen alkalnim ali bazičnim strukturam, kot je citoplazma celic.

Zaradi tega se ta kombinacija barvil široko uporablja za obarvanje tkiv, saj omogoča jasno razlikovanje jeder in citoplazem. Jedra obarvajo temno modro ali vijolično, citoplazma pa je roza.

Obarvanje s hematoksilinom-eozinom je enostavna tehnika obarvanja na področju histologije in citologije zaradi lahkega ravnanja in nizkih stroškov. Uporablja se za vizualizacijo celic, debelih živčnih vlaken in prisotnost nekaterih mikroorganizmov v tkivih, kot so: paraziti, glive in bakterije.

značilnosti

Hematoksilin

Hematoksilin je nevtralno barvilo. Vendar se komponenta, ki zagotavlja barvo (kromofor), nahaja v kationskem ali osnovnem središču molekule. Od tod njegova pripadnost kislim strukturam. Njegova kemijska formula je C ₁₆ H ₁₄ O ₆ in njeno znanstveno ime je 7,11b-dihidroindeno kromen-3, 4,6a, 9,10 (6H) -pentol.

V glavnem obarva jedra celic, saj so zelo bogate z nukleinskimi kislinami. Lahko obarva tudi citoplazemske vključke virusnega izvora.

Da se hematokslin lahko obarva, mora biti v oksidiranem stanju in vezan na kovino. Slednji bo služil pritrditvi na tkivo, torej bo deloval kot mordant.

Ko se hematoksilin oksidira, se imenuje hematein. Oksidacija se doseže z izpostavljenostjo reagenta kisiku (staranju) ali s snovmi, ki pomagajo pri njegovi oksidaciji (kemični oksidaciji).

Eozin

Eosin je barvilo, ki obarva rdeče ali roza. V vodi ni topen, čeprav obstaja v vodi topna različica. Na splošno se eozin pripravi z raztapljanjem v alkoholu (95 ° etanol).

Obarva citoplazme, mišična vlakna, citoplazemske organele in kolagen, vendar ne obarva celičnih jeder. To je zato, ker je negativno nabit, zato ima naklonjenost pozitivno nabitim strukturam.

Obstajata dve vrsti eozina "Y" in "B". Eosin "Y" je znan kot rumen eozin. Njegovo znanstveno ime je tetrabromo-uorescein, njegova kemijska formula pa je C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

Po drugi strani pa se eozin "B" včasih imenuje modrikast eritrosin B. Njegovo znanstveno ime je dibromodynitro fl uorescein in formula C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ . Obe sta si zelo podobni in razlika med uporabo enega ali drugega v resnici ni opazna. Vendar je najbolj priljubljen eozin "Y".

Eosin ima lastnost razlikovanja med živo celico in mrtvo, saj je sposoben prečkati membrano, da obarva svojo citoplazmo, ko so celice odmrle, citoplazmo celice pa pusti brezbarvno, če ostane živa.

Prijave

Obarvanje živčnih vlaken

Debela živčna vlakna lahko obarvamo in prepoznamo s hematoksilinom-eozinom. Vendar pa ni uporabno za obarvanje tankih živčnih vlaken, saj je za vizualizacijo slednjih potrebno obarvanje s srebrom.

Histološki madeži kože

Pri obarvanju pohotne plasti kože je barvilo, ki deluje, eozin, saj na tej ravni celice nimajo jedra.

V granulirani plasti kože hematokslin močno obarva keratohijalinske zrnce znotraj celic zrnc. Nasprotno je spiralna plast kože šibko obarvana s hematoksilinom, medtem ko je bazalna ali zarodna plast precej obarvana.

Eosin obarva citoplazmo vseh celic, intenzivnost barve pa se lahko spreminja od plasti do sloja.

Obarvanje vzorcev blata s hematoksilin-eozinom

Gómez in sod., So leta 2005 dokazali, da je obarvanje hematoksilin-eozina učinkoviteje pri prepoznavanju primerov amebijaze zaradi Entamoeba histolytica in Entamoebe dispar kot metoda svežega vizualizacije (fiziološka raztopina in lugol) pri bolnikih z akutno drisko.

Izkazalo se je tudi, da je zelo občutljiv pri odkrivanju eritrofagocitoze (amebe, ki so zajele eritrocite).

Obarvanje histoloških odsekov za diagnozo okužbe

Walwyn in sod. So leta 2004 predlagali uporabo histoloških madežev za odkrivanje mikroorganizmov, ki povzročajo okužbo.

Z obarvanjem s hematoksilinom in eozinom so lahko vizualizirali okužbe, ki jih povzročajo Clostridium, Actinomyces, spirillae ali Candida. Prav tako so lahko opazovali prisotnost parazita Sarcoptes escabiei na kožnih odsekih in virusnih vključkov citomegalovirusa in herpesa v odsekih različnih tkiv.

Tehnike

Za histološke vzorce

Histološko obarvanje odseka poteka skozi vrsto korakov. Prva stvar je pridobiti histološki odsek. To je potrebno voskati, da kasneje z mikrotomom dobimo koščke (ultra fine). Tehnika je sestavljena iz naslednjih korakov:

1-Odprava presežka parafina : za to lahko uporabite ksilol ali Heme-D, potopite ga za 3-5 minut.

2-Rehidracija vzorca: to dosežemo s potopitvijo vzorca v različne koncentracije alkoholov (etanola) v padajočem vrstnem redu (100 °, 90 °, 70 °). V vseh primerih 7 minut.

3-Odprava odvečnega alkohola: za to ga potopimo v vodo 7 minut.

4-Obarvanje s hematoksilinom: vzorec je 6-10 minut potopljen v pladenj, ki vsebuje hematokslin. Čas izpostavljenosti je odvisen od velikosti in debeline vzorca.

5-Odprava presežka hematoksilina: speremo ga z vodo 5 minut, nato pa skozi kisli alkohol opravimo hiter prehod (10-20 sekund). Kasneje ga ponovno speremo z vodo 5 minut. Nato jo 1 min potopimo v etanol pri 96 °.

6-Obarvanje z eozinom: za to je vzorec 5 minut potopljen v pladenj z eozinom.

7-dehidracija vzorca : za to gre skozi pladnje z alkoholom (etanol), vendar tokrat v naraščajočem vrstnem redu. (70 °, 90 °, 100 °). (5 sekund, 5 sekund, 1 minuta).

8 - Pojasnitev vzorca : za to se 5-10 minut izpostavimo ksilolu in posušimo, da se trajno zapre z kanadskim balzamom ali drugim podobnim materialom.

Za vzorce stolčkov, ki iščejo

Na diapozitivu s pacientovim blagom naredimo razmaz in ga 5 minut fiksiramo z 80% alkoholom. List za 5 minut potopimo v hematokslin in ga takoj speremo z vodo.

Kasneje ga hitro potopimo v kisli alkohol in nato v vodo z amoniakom. Izpere se z vodo. V eozinu se obarva 5 minut. Vzorec se dehidrira, kot je razloženo v stanju tehnike in na koncu se spere s ksilenom.

Priprava reagentov

- Hematoksilin

V enem litru destilirane vode raztopite 50 gramov kalijevega ali amonijevega aluminijevega sulfata. Ko se popolnoma raztopi, dodamo 1 gram kristaliziranega hematoksilina. Po popolnem raztapljanju dodamo 1 g citronske kisline skupaj s 50 g kloral hidrata in 0,2 g natrijevega jodata.

Zmes vremo 5 minut, nato jo pustimo, da se ohladi in filtriramo, da odstranimo vse trdne delce. Tako pripravljen reagent lahko takoj uporabimo.

- Eozin

Pripravimo ga lahko z alkoholno osnovo ali z vodno osnovo.

Alkoholni eozin

V 100 ml etanola pri 95 ° raztopimo 0,5 grama eozina "Y". Nato dodajte nekaj kapljic ledene ocetne kisline.

2% vodni eozin

V 1250 ml destilirane vode raztopimo 25 gramov vodotopnega eozina "Y". Nato dodajte nekaj kapljic ledene ocetne kisline.

Kisli alkohol

Izmerite 0,5 ml koncentrirane klorovodikove kisline in dopolnite do 100 ml absolutnega alkohola.

Amonijska voda

Izmerimo 0,5 ml koncentriranega amoniaka in dopolnimo z destilirano vodo do 100 ml.

Reference

1. Navarrete, G. Histologija kože. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130–133. Dostopno na: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Identifikacija Entamoeba histolytica / E. Razdaljite se po tehniki sveže amebe in njenem obarvanju s hematoksilinom-eozinom pri akutni driski. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Dostopno na: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Uporabnost histoloških tehnik za diagnosticiranje okužbe na anatomskih vzorcih. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Dostopno na: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW reagenti. Hematoksilin-eozinski madež. 2017, Španija. Dostopno na: itwreagents.com
6. Eozin. Wikipedija, prosta enciklopedija. 7. november 2018, 08:18 UTC 4. avgust 2019, 22:13 en.wikipedia.org
7. "Hematoksilin." Wikipedija, prosta enciklopedija. 3. maj 2019, 11:23 UTC 4. avgust 2019, 22:48 wikipedia.org