SAFRANIN: ZNAČILNOSTI, UPORABA, TEHNIKE, STRUPENOST - KEMIJA - 2025

Safranina je meriquinoide barvilo, imenovan po svoji kemijski sestavi z dvema benzenoidnih obroče in 2 quinoid plošč, slednja takšni, ki dajejo rdečo barvo.

To se imenuje tudi dimetil safranina ali osnovna rdeče 2 v svoji kratki obliki, saj njegova znanstveno ime je 3,7-diamino-2,8-dimetil-5-fenil-phenaziniumchloro dimetil safranina in kemijsko formulo C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

Kemična zgradba safranina, ki označuje benzenoidne in kinoidne obroče / Vodna raztopina safranina. Vir: NEUROtiker uredil mag. Marielsa Gil / LHcheM

Obstaja različica, imenovana trimetil-safranin, vendar med dvema snovma ni bistvene razlike.

Safranin je monokromatsko barvilo in je, odvisno od značilnosti kemijske formule, pozitivno nabit snov. Zato ima afiniteto do negativno nabitih struktur. Te strukture bodo obarvane rdeče.

Ta lastnost mu daje uporabnost v mnogih histoloških tehnikah za obarvanje različnih celičnih struktur, tako evkariontskih kot prokariotskih organizmov.

Safranin se uporablja kot kontrastno barvilo v pomembnih in dobro znanih tehnikah za rutinsko uporabo v bakteriologiji. Te tehnike so: Gram-Huckerjev madež, Schaeffer Fulton madež za spore ali obarvanje bakterijskih kapsul, med drugim.

značilnosti

Barva žafrana (začimba, pridobljena iz stigme rože Crocus sativus) je bila navdih za to barvilo. Iz izraza žafran izvira ime safranin. To je posledica velike podobnosti barve žafrana in barvila, ki ga nudi to barvilo.

Safranin je na voljo v obliki kristalov ali praška, pri čemer sta obe predstavitvi topni v vodi. Barvilo safranin je brez vonja. Strukture madežev rdeče. Strukture, ki privlačijo barvo safranina, imenujemo safranofili.

Strukturno je safranin kompleksen, na koncih ima dva benzenoidna obroča, v sredini pa sta dva kvinoidna obroča, kjer najdemo kation N ⁺ . Središče strukture je sistem, ki je odgovoren za zagotavljanje barve. Zaradi te lastnosti je to barvilo uvrščeno v kategorijo II.

Uporaba

Safranin se uporablja za obarvanje različnih struktur. Posebej poudarja Kulchitske celice, ki so prisotne v prebavilih, imenovane tudi enterokromaffine celice.

Sposoben je obarvati mikroorganizme iz družine Rickettsiaceae. Prav tako se uporablja v različnih tehnikah, kot je metoda Koster, modificirana za obarvanje bakterij iz rodu Brucella.

Po drugi strani se safranin uporablja v tehniki obarvanja spore Schaeffer Fulton in v barvanju po Gramu-Huckerju. V obeh tehnikah safranin deluje kot kontrastno barvilo.

V prvi vrsti spori prevzamejo barvo malahitne zelene, ostale strukture pa rdeče od safranina. V drugem primeru Gram negativne bakterije v fazi razbarvanja izgubijo barvo vijoličnega kristala, zato je safranin tisti, ki Gram negativne bakterije obarva rdeče.

Poleg tega se safranin uporablja v bakteriologiji za pripravo Brucella agar medija z razredčitvijo safranina 1: 5000. Ta medij služi za razlikovanje vrst Brucella suis od ostalih vrst. Na tem gojišču rasteta Brucella melitensis in Brucella abortus, vendar B. suis zavira.

Na agroindustrijskem polju smo uporabili safranin v višini 2,25% in razredčili 1:10 za obarvanje vzorcev stebel iz rastline sladkornega trsa.

Na to rastlino pogosto prizadenejo bakterije Leifsonia xyli subsp. ksili, ki poškoduje ksilem rastline. Obarvana stebla se ocenjujejo, da se določi delovanje posod ksilema.

Tehnike s področja bakteriologije

Castañedin madež za r obarvanje

Krv ali tkivo se namesti v pufersko raztopino (fosfatni pufer pH 7,6). Pustimo, da se spontano posuši, nato pa 3 minute pokrijemo z metilen modro in naravnamo s safraninom. Rickettsiae so obarvani modro, v nasprotju z rdečim ozadjem.

Koster madež spremenjen za

V fiksirju se naredi razmaz in vžge v vžigalniku za fiksacijo. Nato jo 1 minuto prekrijemo z mešanico 2 delov nasičenega vodnega safranina s 3 deli 1 mol / L raztopine KOH. Izperemo z destilirano vodo in obarvamo z 1% karboličnim metilen modrim.

Če vzorec vsebuje bakterije iz rodu Brucella, se bodo na modrem ozadju pojavile oranžne barve.

Obarvanje bakterijske kapsule

Naredimo mešanico bakterijske suspenzije z indijskim črnilom in dodamo safranin. Pod mikroskopom se bo okoli vsake bakterijske kapsule pojavil rdečkast halo s črnim ozadjem.

Obarvanje s spori

Z bakterijsko suspenzijo naredimo namaz. Nato se pritrdi na ogrevanje. Prekriven je s 5% malahit zelene barve, ki pogosto gori, dokler ne izpušča hlapov. Postopek se ponovi 6-10 minut. Na koncu jo speremo z vodo in 30 sekund nasprotujemo 0,5% safraninu. Bacili obarvajo rdeče, spore pa zeleno.

Gram-Huckerjev madež

Razmaz naredimo z bakterijsko suspenzijo in pritrdimo na vročini. Drsnik pokrijte s kristalno vijolično 1 minuto. Nato se lugol postavi kot mordantna raztopina za 1 minuto. Nato se beli z acetonskim alkoholom in na koncu 30 sekund na koncu protisne s safraninom.

Gram pozitivne bakterije obarvajo modrikasto vijolično, Gram negativne bakterije pa rdeče.

Nekateri laboratoriji so prenehali uporabljati tehniko Gram-Hucker, da bi sprejeli spremenjeno tehniko Gram-Kopeloff. V slednjem safranin nadomesti osnovni fuksin. To je zato, ker safranin šibko obarva vrste rodov Legionella, Campylobacter in Brucella.

Tehnike s področja histologije

Obarvanje celic Kulchitskega (enterohromaffini)

Odseki tkiv iz prebavil so obarvani s srebrovim kloridom. Nato je razbarvan z natrijevim tiosulfatom in na koncu protitasten s safraninom.

Kulchitske celice odlikuje prisotnost črno-rjavih zrnc.

Osteoartritis madež

Ker ima safranin pozitiven naboj, se zelo dobro veže na karboksilne in sulfatne skupine glikozaminoglikanov. To so del proteoglikanov, ki sestavljajo artikularni hrustanec. V tem smislu je mogoče ob obarvanju s safraninom O ugotoviti, ali pride do izgube hrustanca ali ne.

Izgubo hrustančnega tkiva lahko merimo z Mankinovo lestvico ali imenujemo tudi lestvica osteoartritisa.

Tehnika je razložena spodaj: histološki odsek je potopljen v pladenj z Weigertovo raztopino železovega hematoksilina, nato pa skozi kisli alkohol in speran z vodo.

Nadaljujemo postopek barvanja tako, da drsnik potopimo v hitro zeleno barvo, operemo z ocetno kislino in zdaj potopimo v safranin O. Za zaključek postopka ga dehidriramo z uporabo alkoholov v različnih koncentracijah v naraščajočem vrstnem redu. Zadnji korak zahteva, da se ksilen ali ksilen v vzorcu razjasni.

Diapozitivi so pogojeni s kanadskim balzamom ali podobnim, ki ga opazujemo pod mikroskopom.

S to tehniko so jedra obarvana črno, kost je zelena in hrustanec, kjer so proteoglikani rdeči.

Barva za identifikacijo makroalg

Pérez et al. So leta 2003 predlagali enostavno in poceni tehniko barvanja makroalg. Vzorci so pripravljeni v parafinskih histoloških odsekih. Odseke pritrdimo z 1% glicerina, kar jim omogoča, da se popolnoma posušijo. Nato se postavi v ksilol, da odstrani parafin.

Odsek rehidriramo tako, da ga prestavimo skozi vrsto pladnjev, ki vsebujejo etanol v različnih stopnjah koncentracije (padajoči vrstni red), v vsaki 2 minuti.

Nato ga 5 minut obarvamo z 3: 1 mešanico 1% safranina z 1% toluidin modro, oba pripravimo s 50% etanolom. Mešanici dodamo tri kapljice pikarske kisline, ki deluje kot mordant.

Potem ga dehidriramo tako, da spet preidemo skozi pladnje z alkoholom, vendar tokrat na naraščajoč način. Na koncu ga izperemo s ksilolom, vzorec pa pripravimo s kanadskim balzamom, ki ga bomo opazili.

Toksičnost

Na srečo je safranin barvilo, ki ne predstavlja nevarnosti za tiste, ki z njim ravnajo. Je neškodljivo barvilo, ni rakotvorno in ni vnetljivo.

Neposreden stik s kožo ali sluznico lahko povzroči rahlo pordelost na tem območju, brez večjih zapletov. Za to je priporočljivo, da prizadeto območje sperete z veliko vode.

Reference

1. García H. Colorante safranina O. Tehnik zdravja, 2012; 1 (2): 83–85. Dostopno na: medigraphic.com
2. Gil M. Gram madež: temelj, materiali, tehnika in uporabe. 2019.Na voljo na: lifeder.com
3. Gil M. Barvanje s spori: utemeljitev, tehnike in uporabe. 2019.Na voljo na: lifeder.com
4. Safranina. " Wikipedija, prosta enciklopedija. 7. mar 2017, 10:39 UTC. 3. avgust 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Koristna tehnika obarvanja v anatomski interpretaciji Gracilariopsis tenuifrons in Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Act Bot. Venezuela. 2003; 26 (2): 237–244. Dostopno na: scielo.org.
6. Cerkev Aleika, Peralta Ester Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Povezava funkcionalnosti postelj ksilema in prisotnost Leifsonia xyli subsp. ksili. Zaščita pred vegami. 2007; 22 (1): 65–65. Dostopno na: scielo.sld