KAJ JE PREPROSTO OBARVANJE? IZJEMNE LASTNOSTI - BIOLOGIJA - 2026

Enotni obarvanje je obarvanje postopek hiter in preprost, v katerih se uporablja eno barvilo, tako se imenuje preprosto. Uporablja se predvsem za določanje morfologije in organizacije celic v vzorcu.

Celice so naravno brezbarvne, zato jih je treba na nek način narediti vidne, če jih gledamo pod mikroskopom.

Človeške obrazne celice, obarvane s preprostim metilensko modrim obarvanjem.

Pomembno je poudariti, da morajo biti barvila, uporabljena pri preprostem obarvanju, bazična s pozitivnim nabojem (kationskim), da se lahko spontano vežejo na celično steno in citoplazmo.

Te celične strukture so negativno nabiti. Zato pozitivno nabit barvilo privlači celice in se nanje spontano veže. Tako se vse celice v vzorcu hitro obarvajo.

Barve, ki se uporabljajo pri preprostem obarvanju

V mikrobiološkem laboratoriju lahko uporabimo več osnovnih madežev. Najbolj uporabljeni so:

- Metilen modro.

- Kristalno vijolična.

- Malahitno zelena.

- Osnovni fuksin.

Vsa ta barvila dobro delujejo v bakterijah, ker imajo pozitivno nabite (kationske) barvne ione (kromofore).

Časi obarvanja za večino teh madežev so razmeroma kratki. Običajno znašajo od 30 sekund do 2 minut, odvisno od pripadnosti barvila.

Pomembno je upoštevati, da ga je treba pred obarvanjem vzorca s preprostim obarvanjem razširiti in pritrditi na stekleni drsnik (drsnik); podaljšani in fiksni vzorec imenujemo razmaz.

Šest korakov do preprostega obarvanja

Korak 1

Drsnik položite na stojalo za obarvanje in nanesite želeni madež. Naj deluje ustrezni čas.

Preprosto obarvanje običajno traja od nekaj sekund do nekaj minut, odvisno od uporabljenega madeža.

Opazovanje

V tem koraku je pomembno, da ne uporabite daljšega priporočenega časa za uporabljeno barvilo, saj bi se na lističu lahko oblikovali kristali, kar bi povzročilo tako imenovane "artefakte", ki izkrivljajo morfologijo celic.

2. korak

Razmaz s tobogana temeljito sperite z destilirano vodo iz steklenice ali tudi počasi tekočo vodo iz pipe, dokler odtok ne postane jasen. To običajno traja 5-10 sekund.

Opazovanje

Ne nanašajte toka vode neposredno na razmazo, da ne bi poškodovali vzorca.

Če nimate destilirane vode, lahko brez težav uporabljate vodo iz pipe, saj to ne bo vplivalo na rezultat obarvanja.

3. korak

Drsnik zdrsnite z vpojnimi papirnatimi brisačami v eno smer in brez drgnjenja. Prepričajte se, da je spodnja stran diapozitiva čista.

4. korak

Opazite madež pod mikroskopom. Začnite z najbolj oddaljenimi cilji, da pravilno najdete območje, ki ga želite opazovati, podrobneje. Spremenite cilj, da se približate vzorcu.

Opazovanje

Za uporabo cilja z večjo povečavo (običajno 100X) je treba uporabiti potopno olje, saj to pomaga svetlobi, da bolje prodira, slika pa je bolj ostra. Uporabiti pokrovček ni potrebno.

5. korak

Končno vse vzorce odložite v ustrezen zabojnik, ki je pravilno označen z "biološka nevarnost".

Reference

1. (2001). Mikrobiološke Prijave: Laboratory Manual v General Microbiology (8 ^th ed.). Podjetja McGraw-Hill.
2. Harisha, S. (2006). Uvod v praktično biotehnologijo (1. ^st. ) Mediji požarnega zidu.
3. Moyes, RB, Reynolds, J., in Breakwell, DP (2009). Predhodno obarvanje bakterij: Enostavni madeži. Trenutni protokoli v mikrobiologiji (SUPPL. 15), 1–5.
4. Pommerville, J. (2013). Osnove ALCAMO je za mikrobiologijo laboratorija (10 ^th ). Učenje Jonesa in Bartletta.
5. Prescott, H. (2002). Laboratorijske vaje iz mikrobiologije (5 ^th ). Podjetja McGraw-Hill.
6. Sumbali, G. & Mehrotra, R. (2009). Načela mikrobiologije (1. ^st. ) Tata McGraw-Hill izobraževanje.