KOAGULAZNI TEST: UTEMELJITEV, POSTOPEK IN UPORABE - BIOLOGIJA - 2026

Preskus koagulaza je laboratorijska metoda se uporablja za ugotavljanje prisotnosti encima koagulaza. Ta encim ima lastnost koagulacijske plazme. Loeb leta 1903 je prvi opisal ta encim.

Ta test se izvaja na gram-pozitivnih, katalazno pozitivnih kokah, kar omogoča razlikovanje sevov Staphylococcus aureus od ostalih stafilokokov, saj je edini mikroorganizem kliničnega pomena, ki ga proizvaja.

Obe sliki razkrivata pozitiven test koagulaze. Vir: Leva slika: Philippinjl. Desna slika: Fotografija avtorja mag. Marielsa Gil.

V tem smislu se člani družine Staphylococaceae, ki negativno testirajo, pogosto imenujejo koagulazno negativni stafilokok.

Razen S. aureus, ki proizvajajo koagulazo, obstajajo tudi nekateri sevi, na primer Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius in S. delphini.

Vendar so prvi trije klinični pomen na veterinarski ravni in jih je zelo redko mogoče najti kot povzročitelja okužb pri ljudeh, medtem ko S. delphini najdemo le v morskih okoljih.

Poleg tega jih je enostavno razlikovati, ker S. hyicus in S. intermedius ne fermentirata manitola, S. schleiferi spp coagulans pa ne fermentira maltoze ali trehaloze, medtem ko S. aureus fermentira te ogljikove hidrate.

Prisotnost encima koagulaze je bila povezana z virulentnostjo sevov. Vendar pa ta teorija propada, saj opažamo druge virulentne vrste koagulaze, ki lahko povzročijo pomembne okužbe.

Osnove

Interpretacija

Aglutinacija v 5-20 sek (močan pozitiven test).

Spremenljiva aglutinacija med 20 sekundami in eno minuto (pozni pozitivni test).

Nekaj ​​stopnje aglutinacije po eni minuti (dvomljivi dokazi). Priporočljivo je, da test ponovite ali potrdite po cevi.

Aglutinacija ni (negativni test).

Rezultat s SSF. Vedno mora dati negativno, če samodejno daje pozitiven rezultat, je rezultat testa razveljavljen.

-Tube koagulazni test

materiali

-Sterilne epruvete

-Plazma

-Barnica Marije pri 37 ° C.

Tehnika

S sterilno pipeto pipetirajte 0,5 ml plazme v epruveto velikosti 12 x 75. Naložite platinasto zanko z 2 do 4 čistimi kolonijami, da se 18 do 24 ur pregleduje iz trdne kulture in se raztopi v plazmi previdno premešamo in inkubiramo 4 ure pri 37 ° C.

Prvo uro pregledajte cev, ne da bi jo treseli, le rahlo jo nagnite. Če strdek še vedno ni viden, ga lahko opazimo vsakih 30 minut, dokler ne mine 4 ure. Če je po 4 urah še vedno negativen, ga lahko pustimo do 24 ur, vendar pri sobni temperaturi. Opazujte in prijavite rezultat.

Na podlagi izkušenj nekateri mikrobiologi priporočajo uporabo 500 µl bakterijske suspenzije iz 18-urne kulture v tekočem mediju za izvedbo testa.

Kaže, da nudi hitrejše in zanesljivejše rezultate kot pri emulgiranju kolonij iz trdnih medijev, zlasti če je bila uporabljena človeška plazma, pridobljena iz krvne banke.

Uporaba sevov iz juhe pomaga razredčiti možno prisotnost človeških protiteles proti stafilokoku v plazmi, ki lahko zavirajo delovanje koagulaze.

Interpretacija

Če je viden strdek, ki zajema vso tekočino (popolno strjevanje) ali strdek brez ničesar v preostali tekočini (delno strjevanje), je treba šteti za pozitiven test.

Če ne nastane strdka, to pomeni, da suspenzija ostane homogena, je test negativen.

-Koagulazni test z uporabo fibrinogena

Fibrinogen se uporablja enako kot plazma in se uporablja tako za drsne kot tudi za epruvete. Nadaljujte tako, kot je opisano za plazmo in razlagajte na enak način.

Uporaba

Uporablja se za razlikovanje Staphylococcus aureus od koagulazno negativnih stafilokokov.

QA

Na voljo naj bodo sveže kulture seva S. aureus, ki se bodo uporabljale kot pozitiven nadzor. Sev S. epidermidis je na voljo tudi kot negativna kontrola.

Omejitve

- Pozitivnega testa ne smemo pustiti v inkubaciji 24 ur, saj S. aureus proizvaja fibrinolizin, ki strdi strdek.

-Za zanesljiv test je treba uporabiti svežo ali na novo rekonstituirano plazmo, poleg tega pa je treba uporabiti tudi sveže bakterijske kulture (18 do 24 h). Tako se izognemo lažnim negativnostim.

- Preskus je treba opraviti skupaj z negativno in pozitivno kontrolo.

-Nekateri trdni medij lahko moti preskus koagulaze. Ni priporočljivo uporabljati kolonij iz slanega manitolnega agarja.

-Če se uporablja citirana plazma, je priporočljivo, da se da 5 enot heparina na ml plazme, da se izognete lažnim pozitivnim rezultatom. To je zato, ker lahko nekateri mikroorganizmi razen S. aureus razgradijo citrat in povzročijo strjevanje plazme. V tem primeru je priporočljivo narediti Gram in katalazni test.

-V preskusu z epruveto je pomembno spremljati reakcijo vsakih 30 minut, saj obstajajo sevi bakterije S. aureus, ki proizvajajo visoke koncentracije fibrinolizina in hitro razredčijo novo nastali strdk. Izogibajte se lažnih negativnosti.

-Ko spremljate test, ne izogibajte se stresanju cevi, to lahko uniči začetek tvorbe strdka, ki se pozneje ne bo obnovil, kar povzroči napačne negativnosti.

Reference

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testi za identifikacijo bakterij kliničnega pomena. 3. izd. Uredništvo Panamericana. Buenos Aires Argentina.
4. Pro-Lab Laboratories. Zajec koagulira plazmo. Dostopno na: pro-lab.com
5. "Koagulaza." Wikipedija, prosta enciklopedija. 12. februar 2019, 04:23 UTC 22. april 2019, 15:50 wikipedia.org.