KRVNI BRIS: ZNAČILNOSTI, VRSTE, TEHNIKE IN HISTOLOGIJA - BIOLOGIJA - 2025

Brisa krvi je razmaz periferne krvi , ki se uporablja za analizo komponent, prisotnih v krvni obtok. Z opazovanjem krvnega razmaza dobimo hematološke podatke, ki so zelo koristni za diagnozo in spremljanje številnih patologij.

Krvni bris omogoča količinsko določitev števila različnih vrst belih krvnih celic (levkocitna formula), pa tudi analizo morfologije in oblike eritrocitov, levkocitov in trombocitov.

Priprava krvnega razmaza. Vir: Kri v laboratorijskem kozarcu. Public DomainPictures.net

V njej je mogoče zaznati nepravilnosti v številu celic, kot so: levkocitoza ali levkopenije, limfocitoza ali limfopenija, nevtrofilija ali nevtropenija, trombocitoza ali trombocitopenije in eozinofilija. Prav tako je mogoče opaziti nepravilnosti velikosti in oblike celic.

Poleg tega je mogoče odkriti različne vrste anemij, levkemije in bakterijskih ali krvnih parazitov.

Za to obstajajo različne vrste razmazov, ki se izvajajo, odvisno od namena študije. Obstajajo tanki razmazi in debeli razmazi. Ti razmazi se razlikujejo v izvedbeni tehniki in namenu študije.

Tiste s finimi kapljicami se uporabljajo kot dodatek k popolni hematologiji. To zagotavlja podatke o formuli levkocitov, poleg analize oblike in morfologije treh celičnih serij, ki sestavljajo kri: rdeča serija, bela serija in trombociti. Čeprav služijo tudi kot dopolnilo k preučevanju debelega krvnega filma.

Debel film se uporablja za diagnostiko bolezni, ki jih povzročajo hemoparaziti, kot so malarija ali malarija, toksoplazmoza, lešmanijoza, Chagasova bolezen, babesioza in mikrofilarijaza.

Značilnosti krvnega razmaza

Dober razmaz krvi mora izpolnjevati določene značilnosti. Med njimi lahko omenimo:

-Vzorec mora izpolnjevati minimalne zahteve glede kakovosti, da je reprezentativen.

-Vzorčenje mora biti dobro izvedeno.

- Pravočasno izvedbo razmaza.

-Če izvajate z vensko krvjo, uporabite antikoagulant, ki ne deformira celic, in mešajte epruveto, preden razmažete.

-Če se naredi s kapilarno krvjo, prvo kapljico zavrzite.

- Namaz mora biti homogen. To zagotavlja enakomerno porazdelitev celic in krvne celice, ki jih je mogoče dobro analizirati glede na obliko in število.

-Strane razmaza morajo biti gladke od začetka do konca.

- Razmaz mora biti oddaljen od 1 do 2 mm na straneh diapozitiva.

- Plast razmaza se mora postopoma zmanjševati v debelini od začetka do konca (mazite s finim kapljicam po diapozitivu).

-To mora biti pravilno označeno, da se prepreči zmeda vzorcev.

-Podrobno pritrdite in obarvajte za jasno opazovanje krvnih elementov.

-Predenico pripravite pod mikroskop, zelo dobro posušite. Če potopite potopno olje na vlažen razmaz, boste povzročili nastanek micelov, ki preprečujejo, da bi se celice videle.

Vrste razmaza krvi

Periferne razmaze krvi lahko razvrstimo v tanke in debele razmaze. Tisti s tanko plastjo se uporabljajo za preučevanje formule levkocitov in morfološko opazovanje krvnih celic. Med drugim lahko opazimo tudi zunajcelične bakterije, kot so borelija in medcelični hemoparaziti, kot je plazmodij.

Pri drobnem mehku je mogoče prepoznati vrste zajedavca, torej gre za bolj specifično tehniko kot debela pega, vendar je debela pega bolj občutljiva, saj gre za tehniko koncentracije, ki se uporablja za izčrpno iskanje zunajceličnih hemoparazitov.

Obstajata dve vrsti mazav s fino kapljico: tisti, ki se izvajajo na diapozitivih in tisti, ki se izvajajo na pokrovih. Gosti razmazi se izvajajo na diapozitivih.

Tehnike odvzema vzorcev krvi

Krvni madeži se lahko naredijo s kapilarno punkcijo ali venskim vzorcem, odvzetim z antikoagulantom. Če se iz krvi opravi antikoagulant, se lahko razmaz pripravi do 2 uri po odvzemu vzorca.

Previdno je treba uporabljati antikoagulante, ki ne deformirajo krvnih celic. Najboljša možnost je EDTA. Nasprotno, izogibati se je treba uporabi antikoagulantov, kot je triatrijev citrat.

Če vzorec odvzamemo s kapilarno punkcijo, je treba razmaz podaljšati takoj, preden se krvni strdki strdijo.

Prvo kapljico je treba zavreči in tako omogočiti, da naslednja kapljica spontano uhaja, da se prepreči redčenje vzorca s tkivno tekočino. Je najbolj priporočljiva tehnika za opazovanje celične morfologije, saj kri nima dodatkov.

Za opazovanje hemoparazitov so Solari et al. V svojem raziskovalnem delu ugotovili, da sta obe tehniki (venipunktura in kapilara) enako učinkoviti.

Vrste vzorčenja krvi: A. Kapilarna punkcija. B. venska punkcija. Vir: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Tehnike priprave krvnega razmaza

Krvni bris lahko izvedemo ročno na diapozitivih mikroskopa ali na pokrovčku ali drsniku. Možno je tudi z avtomatizirano opremo.

-Drsi razmazi

To je tehnika, ki jo večina laboratorijev priporoča zaradi enostavnega upravljanja.

S pipeto Paster postavite ne preveč debelo ali zelo fino kapljico krvi na sredino enega konca čistega diapozitiva.

Razmaz je narejen s pomočjo drugega diapozitiva s tlemi. Drsno steklo je postavljeno pravokotno na nasprotni konec mesta, kjer se nahaja kap.

Nagiba se pod kotom med 30 - 45 ° in drsi proti padcu; Ko se dotakne, se linearno razširi čez rob drsnega drsnika in se s stalnim in definiranim premikom list vrne; preden dosežemo konec, drsnik dvignemo.

Na ta način se homogena plast razprostira po površini sprejemnega tobogana.

Maza pustimo, da se posuši. Nato je pritrjen in obarvan z želenim madežem. Pred ogledom pod mikroskopom pustite, da se dobro posuši. Kapljica olja nanese na obraz, ki prikazuje razmaz in opazuje pod svetlobnim mikroskopom.

Krv razmaza po diapozitivu. Zgornja slika: nezadržen razmaz. Spodnja slika: obarvan razmaz. Vir: Coinmac

Deli razmaza, narejeni na diapozitivih

Pri tej vrsti razmaza lahko ločimo tri definirana območja: glava, telo in rep. Glava ustreza predelu, kjer se razmaz začne, je najdebelejši predel in ga ni dobro opazovati.

Telo je osrednji ali vmesni del razmaza, je pod mikroskopom najbolje opazovati območje, saj so tam celice enakomerno razporejene in njihova morfologija je ohranjena.

Rep ustreza končnemu delu razmaza; tu porazdelitev ni več enotna in morfologija eritrocitov se ponavadi izgubi.

Kontrola kakovosti v tehniki diapozitiva

V tej tehniki igra temeljno vlogo:

-Čiščenje in razmaščevanje diapozitiva: zagotavlja dobro drsenje vzorca.

-Velikost kapljice: z zelo velikimi kapljicami bomo dobili debelejši in daljši razmaz, z zelo majhno kapljico bo namaz krajši in izjemno lep.

-Hitrost, uporabljena v podaljšku: čim manjša je hitrost razmaza, tista višja hitrost bo debelejša.

-Konut izvedbe: manjši kot je lepši razmaz, večji kot je debelejši.

-Postopite na pokrovčku

Ne uporablja se široko, ker je ravnanje s krhkimi pokrovčki okorno, vendar nudi velike prednosti, saj je boljša porazdelitev celic po celotnem razmazu.

Ne zelo debela niti zelo drobna kapljica je postavljena na sredino pokrova. Takoj je nad njim nameščen še en pokrov, tako da konice obeh pokrovov štrlijo in tvorijo zvezdo.

Kap se bo spontano razširil po površini obeh pokrovov. Na koncu podaljška se vsak drsnik hitro pomakne na nasprotni strani (eden na desno in drugi na levi).

Tehnika zagotavlja dva razmaza namesto enega.

Postavimo jih, da se posušijo s širjeno stranjo navzgor. Ko se posuši, ga pritrdimo in obarvamo s tehniko izbire. Pustite, da se posuši. Kapljica potopnega olja se položi na diapozitiv, razmaz položimo s stranjo razmaza in gledamo pod mikroskop.

Kontrola kakovosti v tehniki prekrivanja

Za dobro uporabo te tehnike je pomembno:

-Čiščenje pokrovov (pomaga, da vzorec gladko drsi).

-Velikost kapljice (vpliva na debelino razmaza).

-Hitrost, s katero ločimo pokrovčke (vpliva na homogenost namaza).

-Z avtomatizirano opremo

To lahko storite s katero koli od teh ekip: Spinner in Autoslide.

Spinner je sestavljen iz postavitve diapozitiva s kapljico krvi na posebno ploščo za centrifugo. Vzorec se centrifugira pri velikih hitrostih; na ta način nastane homogen in fin razmaz vzorca. Slabost ima možnost hemolize vzorca.

Autoslide je instrument, ki mehansko izvaja premike za izvedbo razmaza na diapozitivih. Maza lahko tudi popravite in obarvate. Lahko se prilagodi celo nekaterim avtomatskim števcem hematologije.

Tehnika debelih razmazov

Za iskanje hemoparazitov priporočamo dva razmaza: enega s fino kapljico in enega z debelo kapljico.

Izvedite kapilarno punkcijo, očistite prvo kapljico. Na diapozitiv položite drobno kapljico in jo razmažite, kot je predhodno razloženo. Za debelo kroglico postavite veliko kroglico na drug drsnik in ga razmažite v 1,55 mm kvadrat. Pustite, da se dva mazila posušijo.

Obarvanje z razmazilom

Med drobnimi kapljicami lahko med drugim uporabljate madeže Giemsa ali Wright. Pri debelih razmazah se priporoča madež Giemsa ali May-Grunwald Giemsa.

Madež Giemsa

Maza pritrdimo 3 minute z metanolom, odcedimo in pustimo, da se ponovno posuši. Razmaz nato 10-15 minut prekrijemo z madežem Giemsa. Izperemo z destilirano vodo in pustimo, da se posuši. Za opazovanje pod mikroskopom damo kapljico potopnega olja.

Wright madež

Razmaz je 5 minut prekrit z Wright-jevim madežem. Zavrzite in postavite raztopino pufra na pH 6,8 za 6 minut. Pripravo pretlačite, da se homogenizira. Operite z destilirano vodo in pustite, da se posuši. Opazujte pod mikroskopom.

Vrste okvarjenih razmazov

Pojavlja se pri pripravnikih v tehniki fine kapljice z diapozitivi.

Razmazi z območji različnih debelin (tanki in debeli prepleteni)

Zato, ker izvedeno gibanje med širjenjem ni bilo konstantno, zaustavitve in ponovni zagoni.

Zelo kratek razmaz

Imata dva vzroka: eden je posledica dejstva, da je bil talni drsnik dvignjen, preden je prišel do drugega konca drsnika. V tem primeru je izjemno debel in kratek.

Če je razmaz kratek, vendar tanek, je to zato, ker je bila velikost kapljice zelo majhna.

Razmažite z grabljenim območjem proti koncu razmaza

Vzroki imajo več razlogov: eden je, da je rob tal pokvarjen, da se pritisk na sprejemnem toboganu v času širjenja poveča ali da se obrabi talni rob drsnika.

Razmažite s tvorbo vakuole ali jasno zaobljenimi ali eliptičnimi območji

Nastanejo zaradi uporabe mastnih razmazov (slabo izpranih in razmaščenih).

Zelo debeli ali zelo tanki razmazi

Kapljice, ki so prevelike, bodo od začetka do konca ustvarile zelo debele razmaze in zelo majhne kapljice bodo ustvarile zelo fine razmaze.

Histologija

V krvnem razmazu je mogoče opaziti krvne celice. Med njimi so:

-Eritrociti ali rdeče krvne celice

Človeška kri, eritrociti ali rdeče krvne celice in dve beli krvni celici. Vzeto in urejeno iz: Viascos. Vaše opazovanje je izrednega pomena. Na tej ravni lahko odkrijemo anemijo, talasemijo, bolezen kostnega mozga itd.

Število eritrocitov ali rdečih krvnih celic je približno 5 x 10 ⁶ mm3 pri moških in 4,5 x 10 ⁶ pri ženskah. Rdeče krvne celice so oblikovane kot bikonkavni diski, z osrednjo fiziološko bledico. Lahko jih opazimo ločeno (normalno) ali tvorijo zvite rolaux (nenormalno).

V razmazu se kažejo tudi poikilocitoza (rdeče krvne celice različnih oblik), anizocitoza (rdeče krvne celice različnih velikosti), anisopoikilocitoza (različnih oblik in velikosti), anisokromija (različnih barv), eritroblasti (nezrele rdeče krvne celice), mikrocitoza (manjše rdeče krvne celice) ) in makrociti (večji eritrociti).

Ko predstavljajo pomanjkanje količine hemoglobina in se poveča osrednja bledica, govorimo o hipokromiji. Če opazimo normalno rdečo serijo, se bo ta poročala kot normocitna in normokromna.

-Bele krvne celice ali levkociti

bele krvničke

Normalna količina znaša od 5.000 do 10.000 mm ³ . Spreminjajo se pri nalezljivih procesih, alergijah in levkemiji. V razmazu krvi lahko razlikujemo več vrst, ki so razložene spodaj.

Segmentirani nevtrofili

Predstavljajo 55-65% vseh levkocitov. Izmerijo med 10-15 μm. Imajo segmentirano ali lobato jedro, ki sprejme različne morfologije, zato se imenuje polimorfonuklearno.

V citoplazmi imajo obilo nevtrofilnih granul in nekaj azurofilov. Povečajo se bakterijske okužbe (nevtrofilija), zmanjšujejo virusne okužbe (nevtropenija).

Opazimo lahko morfološke nepravilnosti, kot so pleokariocitoza (hipersegmentirana jedra), obokana (nezrele celice) ali makropoliti (ovalne oblike in velike).

Druge spremembe:

-Toksične granulacije

-Pseudo Pelger nevtrofili (jedro ne predstavlja lobulacij ali pa so obobed).

-Döhle telesa: temno modri citoplazemski vključki.

-Povečano citoplazemsko bazofilijo.

-Iciratoplazmatske vakuole.

-Celična picnoza (izguba medjedrskih mostov).

Segmentirani eozinofili

Predstavljajo 1-3% celotnih belih krvnih celic. Izmerijo 9-10 µm. Zanje je značilna prisotnost obilnih acidofilnih citoplazemskih zrnc in malo azurofilov. Njegovo jedro ima dve lobulaciji. Njihovo število se poveča pri alergijah in boleznih parazitskega izvora.

Segmentirani bazofili

So izredno redki, predstavljajo 0-1% levkocitov. Izmerijo 10-12µm. Jedro je ponavadi nepravilnih robov in je lahko obojestransko, vendar ga ne opazimo zaradi velikega števila bazofilnih grobih granulacij v svoji citoplazmi. Zelo redko lahko opazimo bazofilijo.

Limfociti

So majhne celice z bazofilno citoplazmo, z jedrom, dobro definirano, okroglo, s kondenziranim kromatinom. Jedro obsega skoraj celotno celico. Predstavljajo 26-40% levkocitov v krvi. Povečajo se virusne okužbe (limfocitoza). Vidimo lahko reaktivne limfocite.

Monociti

Celice večje od limfocitov, z večjimi citoplazmi in ohlapnejšimi, ovalnimi kromatinskimi jedri. Izmerijo 9-12µm. Citoplazma je obilna in se ponavadi zdi bledo sivkasto modra s standardnimi tehnikami obarvanja. Med spremembami lahko opazimo vakuolizirane monocite in monocitozo.

-Plateti

Izmerijo med 1,5-3 µm. Njegova oblika je okrogla ali ovalna. Normalna vrednost se giblje od 150 000 do 350 000 trombocitov / mm3. Lahko se zmanjšajo pri nekaterih virusnih okužbah. Nimajo jedra in so obarvani vijolično. V tej seriji je mogoče opaziti nepravilnosti, kot so makro ali mikro trombociti, trombocitoza ali trombocitopenija in drobci trombocitov.

Patološki elementi

Krvni zajedavci

Hemoparaziti, kot je povzročitelj malarije ali malarije (paraziti iz rodu Plasmodium), lahko opazimo v krvnih mazah. Zaradi tega je pomembno, da se raztopina analizira ročno, saj avtomatizirana oprema pogreša to ugotovitev.

Bakterije

Pri patologijah, kot sta recidivna vročina ali lajmska bolezen, lahko opazimo njen povzročitelj. V tem primeru ustreza Borrolia recurrenti spirochetes in Borrelia burgdorferi v razmazu krvi.

Nezrele celice

Med levkemijami, leukemoidnimi reakcijami in levkoeritroblastično reakcijo so med drugimi resni primeri. Pri bakterijskih okužbah lahko pride do manjših odstopanj v levo (prisotnost lopov). Eritroblasti so lahko opaženi tudi pri nekaterih anemijah.

Reference

1. Krvno in hematopoetsko tkivo. Dostopno na: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Angel. Klinična laboratorijska interpretacija. 8. izdaja Uredništvo Médica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos računi A. Primerjava gostote parazitov v debeli venski kapljici krvi in ​​akupresure pri diagnozi malarije vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140–143. Dostopno na: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Pomen študije razmaza periferne krvi pri starejših. Medisur 2017; 15 (3): 362–382. Dostopno na: scielo.sld
5. Grinspan S. Študija razmaza periferne krvi. Nenehno medicinsko izobraževanje. Dostopno na: bvs.hn/RMH