- Osnove
- značilnosti
- Sestava
- Uporaba
- Proces
- Obarvanje glivičnih struktur kultur
- Neposredno obarvanje biološkega vzorca
- Obarvanje zarodne cevi pri identifikaciji
- Varnostni list laktofenola
- Zdravje
- Vnetljivost
- Nestabilnost
- Posebne nevarnosti
- Reference
Lactophenol modra ali modra bombažna pripravimo z lastnostmi enojnih barvanje las. V kliničnih laboratorijih se uporablja predvsem za barvanje glivičnih struktur, kot so hife, zarodne cevi in spore.
Pomaga pri domnevni ali predhodni diagnozi nekaterih gliv, vendar je vedno priporočljivo, da diagnozo okrepite z natančnejšimi testi, kot so biokemični ali serološki testi.
Grafična predstavitev laktofensko modrega madeža, razmazani z laktofenolovo modrim pripravkom, nameščenim na mikroskopu. Vir: javna domena Pictures.net/https://www.youtube.com/watch?v=P-kiFFZ7NvU /https://www.youtube.com/watch?v=wSZ77T5L6e8
Laktofenol modro sestavljajo mlečna kislina, anilin modra, glicerin, fenol in deionizirana voda. Pripravimo ga lahko v laboratoriju ali pa ga kupimo že pripravljenega za uporabo. Ko je pripravljen, ga je mogoče uporabiti, v nobenem primeru ga ne smete redčiti, saj bo to dejanje dalo grozne rezultate.
Koncentracija njegovih komponent je idealna za obarvanje glivičnih struktur, saj fenol izloča spremljajočo bakterijsko mikrobioto, mlečna kislina pa ustvari zaščitni film okoli glivične strukture. Nazadnje, anilin modra ima afiniteto, da se oprime struktur glive.
Osnove
Z laktofenolovo modro barvo se izvaja preprosto obarvanje glivičnih struktur določene mikološke kulture. Imenuje se preprosto, ker uporablja samo eno barvilo.
Laktofenol modro poleg obarvanja deluje tudi kot razsvetljevalec vzorca, zahvaljujoč skupnemu delovanju mlečne kisline in fenola, poleg tega se fenol obnaša kot mordant in hkrati preprečuje lizo mikroorganizma z zaviranjem hidroliznih encimov, ki so lahko prisotni.
Medtem ko mlečna kislina ohranja morfologijo struktur glive.
Po drugi strani ima anilin modra lastnost lepljenja ali vezave na strukture, ki vsebujejo hitin. Strukture so obarvane svetlo modro.
Treba je opozoriti, da celična stena glivičnih mikroorganizmov, zlasti plesni, vsebuje hitin, zato je to barvilo idealno za obarvanje teh mikroorganizmov.
značilnosti
Raztopina laktofenol modre barve je močno kislo, rahlo motno vodno barvilo s svetlo modro barvo. Obstojno ostane, če ga hranimo med 15 ° C in 25 ° C. Steklenico je treba hraniti pravilno zaprto. Draži in jedko za kožo in sluznico.
Sestava
Formula za pripravo enega litra laktofenol modre je naslednja:
-250 g / L mlečne kisline
-1,0 g / L anilin modre ali metilno modre
-500 g / L glicerina
-250 g / L fenola
-250 ml deionizirane ali destilirane vode.
Fenol raztopimo v prej ogreti vodi. Dodata se mlečna kislina in glicerin in zelo dobro premešata. Končno se anilinsko modro raztopi. Ponovno se zmeša in je pripravljen za uporabo.
Porcije za pripravo 80 ml raztopine laktofenol modre so:
-20 g kristalov fenola
-20 ml mlečne kisline
-40 ml glicerina ali glicerola
-20 ml destilirane vode.
Uporaba
Uporablja se za obarvanje glivičnih struktur in s pomočjo morfoloških značilnosti, opaženih na mikroskopski ravni, za postavitev domnevne diagnoze glive.
Proces
Obarvanje glivičnih struktur kultur
- Vzemite čisto kulturo glive, katere strukture je treba opazovati.
- Prednostno delajte v pokrovu z laminarnim tokom ali pod vžigalnikom z masko in rokavicami, saj je treba upoštevati standarde biološke varnosti, saj se večina plesni enostavno širi v okolju in zato predstavlja nevarnost za operaterja.
- Kapljica laktofenolovo modre barve je nameščena na diapozitivu.
- Izrežite majhen kvadrat kakovostnega lepilnega traku in ga zelo previdno lepite na konec hladno steriliziranega ročaja iz platine.
- Platinast ročaj se približa najbolj površinskemu delu glivične kolonije in kulture se zelo previdno dotakne, točno tam, kjer se nahaja lepilni trak.
- Nato ga odpeljemo na tobogan in ga namestimo desno na kapljico laktofenol modre, pri čemer pazimo, da se trak popolnoma podaljša in namaže z barvilom. Platinast ročaj je zelo nežno odstranjen.
- Na trak je nameščena še ena kapljica laktofensko modre barve, na vrhu pa pokrovček. Ne izvajajte prevelikega pritiska, da ne bi uničili struktur glive, saj so izredno krhke. Barvilo naj deluje približno 3 do 4 minute.
- Po tem času je pripravek pripravljen za ogled pod mikroskopom v 10-ali 40-kratni povečavi. Če je potrebno opazovanje 100X, je treba uporabiti potopno olje.
- Strukture glive so na splošno obarvane modro, z izjemo gnojnih gliv, ki bodo obdržale svojo značilno rjavo barvo te vrste gliv.
Neposredno obarvanje biološkega vzorca
Če je potrebno preučiti neposredni biološki vzorec, kot so sputum, gnoj, eksudati, izločki, med njimi, je treba predhodno opraviti postopek za dekontaminacijo vzorca. Za to se uporablja raztopina NaOH.
V primeru vzorcev las jih je mogoče barvati neposredno.
Več prizadetih dlačic (skupaj 10) odvzamemo z domnevnimi lezijami tinea capitis (alopečne predele) in jih postavimo na diapozitiv (3 do 4 dlake na diapozitiv). Nekaj kapljic laktofensko modre barve se postavi na vrh in takoj pokrije s pokrovko.
Z oprsnikom primite drsnik in ga nežno segrejte nad gorilnikom. Če želite to narediti, naredite 3 do 4 hitre prehode skozi plamen. Opazujte mikroskop pri 40X in poiščite spore zunaj ali znotraj las (ektotrix ali endotrix). Po potrebi dodajte potopno olje in opazujte pri 100X.
Obarvanje zarodne cevi pri identifikaciji
Po inkubiranju domnevne kulture Candida albicans v humanem serumu 2 do 4 ure pri 37 ° C odvzamemo del raztopine in obarvamo z laktofenol modro. Priprava opazimo pod mikroskopom pri 40X. Prisotna je zarodna cev in blastospore obarvajo svetlo modro.
Varnostni list laktofenola
Nacionalno združenje za zaščito pred požarom (NFPA) vzpostavi varnostni list za kemične snovi glede na tveganje, ki ga predstavlja glede na različne vidike, ki jih simbolizira barvni romb in število, ki sega od 0- Štiri.
Nevarnosti za zdravje so opredeljene v modri barvi, vnetljivost v rdeči barvi, nestabilnost ali reaktivnost v rumeni barvi, posebna nevarnost pa v beli barvi.
Zdravje
Tveganje za zdravje, ki ga predstavlja laktofenol modro v skladu z NFPA, je raven 3. To pomeni, da je snov izjemno nevarna, če jo zaužijemo ali v neposrednem stiku s kožo ali sluznico.
Je zelo jedko in dražilno snov.
V stiku s kožo in sluznico povzroči hude opekline.
Če ga zaužijete, lahko povzroči glavobol, zmedenost, letargijo, nezavest, zastoj dihanja in celo smrt.
Vnetljivost
Po podatkih NFPA je laktofenol modro ocenjen na ravni 1 za vnetljivost. To pomeni, da gori samo, če se segreje nad 94 ° C.
Nestabilnost
Navedeno glede na NFPA na nivoju 0 (nič) glede na reaktivnost. To pomeni, da nima nevarnosti reaktivnosti, torej je kemično stabilna snov.
Posebne nevarnosti
Ne nudi dodatnih posebnih nevarnosti.
Reference
- Laboratorij SAR. Laktofenol modro. 2010. Dostopno na: labsar.com.
- Uporabni laboratorij klinične kemije. Laktofenol modro. 2015.Dostopno na: cromakit.es
- Merck Laboratories. Mikroskopija laktofenol modre v raztopini. 2017. Dostopno na: Uporabniki / Equipo / Downloads
- Kartica za nujne primere. Laktofenol modra raztopina za glivično obarvanje. Universidad Pontificia Javeriana, Bogota, Kolumbija. 2014.Dostopno na: javeriana.edu.co
- González M, Diamont D, Gutiérrez B. Tehnika obarvanja glivičnih struktur z rastlinskimi barvili kot alternativno neškodljivo alternativo. Bioagro, 2011; 23 (1): 65–68. Dostopno na: Redalyc.
- Laboratorijski Himedia. Laktofenol bombažno modra. 2017. Dostopno od: himedialabs.com
- Wanger A, Chavez V, Huang R, Wahed A, Actor J, Dasgupta A. Biokemijski testi in tehnike obarvanja za identifikacijo mikrobov. Science Direct, 2017; 61–73. Na voljo pri: Elsevier