Rose Bengal je laboratorijski test, ki temelji na reakciji antigen-protitelo za diagnozo bruceloze. Tehnika omogoča odkrivanje specifičnih protiteles proti bakteriji Brucella abortus v vzorcih človeškega seruma. Rezultat je mogoče poročati kvalitativno ali delno kvantitativno.
Kakovostna oblika izraža, ali je bolnik za test pozitiven ali negativen, torej ali obstajajo protitelesa ali ne. Medtem se poroča o polkvantitativnem poročilu v ie / ml in navede približno količino prisotnih protiteles. Upoštevati je treba, da bodo protitelesa nastala le, če je bolnik bil v stiku z mikroorganizmom.
Rose Bengal reakcija v aglutinacijski plošči. Vir: vzeto iz videoposnetka https://youtu.be/igAVQ-GiyGY
Zaradi svoje velike preprostosti, visoke občutljivosti in specifičnosti je ena od seroaglutinacijskih tehnik, ki se v medicini najbolj uporablja kot začetni test za diagnozo te bolezni.
Nekateri raziskovalci so primerjali učinkovitost testa Rose Bengal z drugimi tehnikami, kot je seroaglutinacija (febrilni antigeni), in opazili, da so, čeprav obstaja dobra korelacija, videli osamljene primere, v katerih je bil test febrilnega antigena negativen in Rose de Pozitivno bleščanje.
Razlika je bila posledica dejstva, da so imeli ti bolniki podrazred protiteles IgG proti Brucella abortus z boljšo sposobnost vezave pri kislem pH, zato so lahko reagirali z reagentom Rose Bengal, vendar ne z vročimi antigeni.
V tem smislu so predlagali, da se reagenti tehnike vročinskega antigena spremenijo v kisli pH, da bodo lahko zaznali to vrsto primera.
Osnove
Rose Bengal reagent sestoji iz antigene suspenzije. Sestavljen je iz seva S99 Brucella abortus, razredčenega v kislem laktatnem puferju (pH 3,6), plus fenola in barvila Rose Bengal.
V vzorcu so torej protitelesa proti Brucella, če so ta prisotna, bodo reagirala z reagenom antigena in opazili makroskopsko vidno aglutinacijsko reakcijo. Test zazna bodisi protitelesa IgM bodisi protitelesa IgG.
To pomeni, da lahko zazna bolezen tako v akutni fazi, kjer prevladujejo protitelesa IgM bodisi v kronični fazi, kjer prevladujejo protitelesa IgG.
To predstavlja prednost, saj povečuje občutljivost testa, hkrati pa je tudi pomanjkljivost, saj ne razlikuje med eno stopnjo in drugo, saj so reakcije s protitelesi IgM in IgG identične.
Preskus mora biti vedno izveden skupaj z negativno kontrolo in pozitivno kontrolo. Negativna kontrola vsebuje živalski serum brez protiteles, pozitivna kontrola pa vsebuje serum živalskega izvora s 50 ie / ml protiteles proti Brucella.
Uporaba
Bruceloza je resna bolezen, ki se nagiba k kronični in nevarni, zato je zelo pomembno, da se diagnosticira zgodaj. To je zoonoza in človek se lahko okuži z neposrednim stikom z onesnaženim materialom, najbolj ranljivi ljudje pa so veterinarji in skrbniki živali.
Do okužbe lahko pride tudi z uživanjem okuženega surovega mesa, med drugimi oblikami okužbe.
Ta bolezen napada lokalno ali sistemsko. Sistemska oblika je najresnejša, saj lahko prizadene različne organe, vključno z endotelnim sistemom retikuluma (jetra, vranica, kostni mozeg), kožo (celulitis in limfadenopatijo), dihalnim sistemom (pljučnica), mišično-skeletnim sistemom (artritisom oz. med drugim tudi sakroiliitis in spondilitis).
Rose Bengal test je zelo uporabna tehnika za izvedbo začetnega presejanja, saj je zelo poceni, enostaven za uporabo in ima veliko posebnosti in občutljivosti.
Primeri lažnih negativnosti in lažno pozitivnih reakcij so zelo redki in se lahko pojavijo pri ljudeh z zelo nizkimi titri protiteles (<25 IU / ml) ali izredno visokimi (> 1000 IU / ml).
Proces
materiali
-Razen bengalski komplet
-Aglutinacijska plošča bela podlaga
-50 µl pipete
-Rotator (neobvezno)
-Vortex
Tehnika (kvalitativna metoda)
Komercialni kompleti Rose Bengal so pripravljeni z reagenti.
- Pred začetkom dela operite reagente.
-Aglutinacijske plošče imajo narisane kroge, vsaka za drugačen vzorec. Uporabite 3 kroge, prvi za negativno kontrolo, drugi za vzorec in tretji za pozitivno kontrolo.
-Postavi kapljico ali 50 µl kontrol in vzorec v ustrezen krog.
-Zmešajte vrtinski reagent z vrtincem. Zraven prej postavljenih kapljic položite kapljico.
- Mešajte z lesenimi zobotrebci (uporabite enega za vsak vzorec ali kontrolo). Naredite krožne gibe in jih razširite tako, da pokrijete celoten krog.
Vir: slike, posnete iz Video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Urejena postavitev slike.
-Predstavite ploščo na samodejni rotator pri 80 do 100 vrtljajev na minuto ali ročno zavrtite 4 minute. Preberite dokaz ob koncu tega časa.
-Preverite, ali so kontrole dajale po pričakovanjih. Primerjajte reakcijo preskusnega vzorca s kontrolo. Poročajte kot pozitivno, če opazite aglutinacijo in kot negativno, če aglutinacije ni.
Pozitiven test kaže, da ima bolnik količino, enako ali večjo od 25 ie / ml protiteles proti bruceli.
Interpretacija pozitivne (z aglutinacijo) in negativne (brez aglutinacije) reakcije. Vir: Citrulin. Urejena slika.
Tehnika (polkvantitativno)
Če je vzorec v kvalitativni reakciji močno pozitiven, ga je mogoče kvantificirati. V ta namen naredimo serijska dvojna redčenja vzorca s fiziološko fiziološko raztopino. Predhodno opisani postopek se izvaja z vsakim redčenjem.
Razlaga se tudi z opazovanjem aglutinacije makroskopsko. Rezultat bo titer najvišje razredčitve, pri katerem je bil opažen pozitiven rezultat.
Za izračun približne vrednosti protiteles proti Brucella se uporablja naslednja formula:
25 ie / ml x reakcijski titer = IU / ml
Na primer, če je bolnik v polkvantitativnih testih pozitiven pri razredčitvi ½, ¼ in 1/8 in začne od razredčenja 1/16 naprej negativno, to pomeni, da ima bolnik titer 8 .
Uporaba formule:
25 ie / ml x 8 = 200 ie / ml
QA
-Kit ima rok uporabnosti in ga je treba spoštovati. Ne smete ga uporabljati, če je reagent potekel.
-Pri uporabi pazite, da reagent ne vsebuje trdnih delcev, saj je to znak poslabšanja.
-Držajte med 2 in 8 ° C.
-Ne zamrznite, s tem dejanjem se škodljivo realizira škoda.
-Teden vedno opravite test skupaj z negativnimi in pozitivnimi kontrolami.
-Tehnika prenaša vzorce seruma z določeno stopnjo lipemije in hemolize, vendar ni priporočljivo uporabljati pretirano lipemičnih in hemoliziranih serumov, oba pogoja spreminjata rezultate testa.
- Pred začetkom analize reagente vedno segrejte na sobno temperaturo.
-Ne razlagajte reakcij, ki trajajo dlje od priporočenega časa, saj s tem ustvarite poročilo o napačnih pozitivnih reakcijah, saj se po določenem času reagent obori, simulira pozitivno reakcijo.
-Tehnika je 100% občutljiva in ima 98% specifičnost.
-Po polkvantificiranju 1000 ie / ml obstaja možnost opazovanja učinka prozona (lažno negativen zaradi presežka protiteles v primerjavi s količino antigenov).
Reference
- Rubio M, Barrio B in Díaz R. Vrednost testov Rosa de Bengala, Coombs in protitimunoelektroforeze za diagnosticiranje primerov človeške bruceloze, pri kateri je serumska aglutinacija negativna. Oddelek za mikrobiologijo. Služba za klinično mikrobiologijo. Univerzitetna klinika. Univerza v Navarri. 406-407. Dostopno na: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "Bruceloza." Wikipedija, prosta enciklopedija. 6. december 2019, 14:37 UTC 18. december 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
- Monlab Laboratories. Monlab Bengal Rose - test. 2016.Dostopno na: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Rev. Peru. Med. Javno zdravje 1997; 14 (1): 63–66. Dostopno na: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Nadaljnje klinično, serološko in polimerazno verižno reakcijo družine z brucelozo. Rev. chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425–433. Dostopno na: scielo.conicyt.