SREDNJA SIM: OSNOVA, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Medij SIM je trdna snov in razlika agar, posebej zasnovana za pomoč pri identifikaciji nekatere bakterije, še posebej enterobakterij. Sestavljen je iz tripteina, peptona, železovega sulfata, amonijevega sulfata, natrijevega tiosulfata in agarja.

Ta medij omogoča izvedbo treh pomembnih testov: proizvodnjo vodikovega sulfida (H ₂ S), tvorbo indola in gibljivost, torej akronim SIM. Zaradi svoje velike uporabnosti v bakteriološkem laboratoriju ne more biti odsoten.

A. Komercialni medij SIM B. B. H2S (-), Indole (-) in gibljivost (+) in SIM H2S (+), Indole (-), test gibljivosti (+). Vir: A. Fotografijo avtor mag. Marielsa Gil B. Mfloayza

Za razliko od drugih medijev mora biti poltrden, da je mogoče zaznati gibljivost nekaterih bakterij. V tem smislu ta test deluje zelo dobro za Enterobacteriaceae, ne pa pri ne-fermentirajočih gram-negativnih palicah, kjer so prednostne druge metode, na primer viseča kaplja.

Medij SIM omogoča razlikovanje nekaterih specifičnih lastnosti, ki so značilne za nekatere bakterije v primerjavi z drugimi. Na primer je Escherichia coli odlikuje s tem, da H ₂ S (-) indola (+) in motiliteto (+), medtem ko Proteus mirabilis H ₂ S (+), indol (-), motiliteto (+).

Osnove

Gre za gojišče, ki se šteje za diferencialno, saj njegova uporaba razlikuje mikroorganizme, ki so sposobni proizvajati vodikov sulfid, in tiste, ki tega ne storijo; poudarja tudi tiste, ki tvorijo indola iz triptofana, od tistih, ki ga ne, in na koncu razlikuje gibljive bakterije od nepokretnih.

Vir energije

Kot vsak kulturni medij ima tudi elemente, ki zagotavljajo potrebna hranila, da se lahko razvijejo nezahtevni mikroorganizmi. Te elemente predstavljajo peptoni in triptein.

Razvoj mikroorganizma v mediju je ključnega pomena, da lahko opazimo prisotnost ali odsotnost lastnosti, ki jih ta medij ocenjuje.

Proizvodnja vodikovega sulfida

Črka S kratice SIM se nanaša na proizvodnjo vodikovega sulfida (H ₂ S). Bakterije, ki lahko tvorijo vodikov sulfid, bodo žveplo prevzele iz natrijevega tiosulfata.

Po H ₂ tvorjena S -colourless plinasti, reagira s trenutno železove soli v mediju, ki tvori železov sulfid, jasno vidna (črna oborina). Bakterije, ki ne tvorijo H ₂ S, zapusti medij prvotne barve (bež).

Prisotnost črne oborine lahko ovira razlago gibanja. Vendar je večina H ₂ S- proizvodnjo enterobakterije znano, da so pozitivno Pokretljiv, kot so Salmonella, Proteus in Citrobacter. Poleg tega črna oborina, ki pokriva skoraj celoten medij, kaže na pozitivno motoriko.

Indola tvorba

Druga črka kratice SIM je "I", kar predstavlja tvorbo indola.

V tem smislu triptein poleg tega, da je vir hranilnih snovi, opravlja še eno temeljno funkcijo. Ta pepton je bogat z aminokislino, imenovano triptofan, zato lahko pokaže bakterije, ki proizvajajo triptofanazo.

Ta encim je odgovoren za cepljenje aminokisline triptofan s posledičnim tvorjenjem indola (brezbarvna snov), piruvične kisline in amonijaka.

Zato je za prikaz te reakcije potrebno dodati razkrivajočo snov (Ehrlichov reagent ali Kovačev reagent). Bodisi reagira z indolom, tako da na površini agarja tvori obroč v obliki rdeče fuksije. Če se pojavi obroč fuksije, se preskus indola razlaga kot pozitiven.

Bakterije, ki nimajo tega encima, ne bodo tvorile obroča in se razlagajo kot negativni indol test.

Pomembno je upoštevati, da mora biti indolov test zadnji, ki ga je treba razlagati, saj ko dodamo reagent, medij postane moten, kar otežuje vizualizacijo gibljivosti.

Mobilnost

Nazadnje črka M pomeni besedo mobilnost. Za ocenjevanje gibljivosti je ta medij strateško poltrden, saj je ta lastnost bistvena, da lahko opazujemo, ali obstaja gibanje bakterij ali ne. Bakterije, ki imajo flagele, so tiste, ki dajejo ta pozitiven test.

Pozitiven test bo viden, ko opazimo motnost, tako v začetnem inokulumu kot okoli njega. Medtem ko se negibne bakterije razvijejo le na poti začetnega inokula.

Priprava

Srednja SIM

Odtehtamo 30 g dehidriranega medija in ga raztopimo v litru destilirane vode. Mešanico pustimo stati 5 minut in nato segrevamo do vrenja, pogosto mešamo, dokler se popolnoma ne raztopi.

Zmes porazdelite po epruvetah z bombažnimi pokrovčki in avtoklavirajte pri 121 ° C 15 minut. Iz avtoklava odstranite cevko in pustite, da se strdi v navpičnem položaju, tako da je medij v obliki bloka.

Za njegovo ohranjanje ga hranimo v hladilniku do njegove uporabe. Končni pH mora imeti končni pH 7,3 ± 0,2.

V času inokulacije medija mora biti na sobni temperaturi. Srednja barva je bež.

Kovačev reagent

Izmerite 150 ml amilnega ali izoamilnega ali butilnega alkohola. (Uporabite enega od omenjenih treh).

Raztopimo 10 g p-dimetilaminobenzaldehida. Nato počasi dodajte 50 ml koncentrirane klorovodikove kisline.

Pripravljen reagent je brezbarven ali svetlo rumen. Hraniti ga je treba v jantarni steklenici in hraniti v hladilniku. Ne uporabljajte, če postane temno rjava; kar pomeni, da je poškodovan. Ta reagent je najprimernejši, kadar gre za Enterobacteriaceae.

Erlichov reagent

Odtehtamo 2 g p-dimetilaminobenzaldehida in raztopimo v 190 ml absolutnega etilnega alkohola ter počasi zmešamo s 40 ml koncentrirane klorovodikove kisline. Na enak način shranite Kovačev reagent. Ehrlichov reagent se največ uporablja za ne fermentirajoče in anaerobne bakterije.

Prijave

Medij SIM se zelo uporablja v bakterioloških laboratorijih. Njegova prednost je, da lahko pri identifikaciji Enterobacteriaceae v isti epruveti opazimo tri bistvene značilnosti.

Posejano

Pravilen način sejanja tega gojišča je uporaba igle, s katero se odvzame del čiste kolonije, ki jo je treba preučiti, in jo navpično vstavite v sredino gojišča. Izvesti je treba en sam kos. Prebijanje ne sme doseči dna cevi, pravilna stvar je, da pokrijete le dve tretjini globine.

Ponavljanja inokuluma ni priporočljivo, saj lahko to povzroči napačne razlage pozitivne motorike. Inokuliran medij se 24 ur aerobno inkubira pri 37 ° C.

Ko se čas zaključi, opazimo, ali je prišlo do proizvodnje H ₂ S ali je bila odčitana gibljivost. Na koncu se razkrije indol, ki mu dodamo 3 do 4 kapljice reagenta Ehrlicha ali Kovača, premešamo in razložimo.

Vir: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.

QA

Za kontrolo sterilnosti eno ali dve epruveti inkubiramo 24 ur v pečici pri 37 ° C v pečici. Pričakuje se, da po tem času ne pride do rasti ali spremembe barve.

Kot nadzor kakovosti se lahko uporabljajo znani certificirani sevi, kot so: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Pričakovani rezultati so: Escherichia coli H ₂ S negativen, indol in pozitivno gibljivost, Enterobacter aerogenes le pozitivne gibljivost, Salmonella typhimurium H ₂ S in pozitivno gibljivost, z negativnim indola. Proteus vulgaris je pozitiven, Klebsiella pneumoniae in Shigella pa negativna.

Omejitve

- Nekateri sevi Morganella morganii lahko med drugim tvorijo rjavkast pigment v tem mediju zaradi proizvodnje melanina, česar ne smemo zamenjati z oborino železovega sulfida. V neizkušene strokovnjakov lahko te razmere ustvarjajo napačen v razlago H ₂ S testom .

-Strerobne aerobne bakterije bodo rasle le na površini cevi, kar bo otežilo razlago gibanja.

Reference

1. BD Laboratoriji. BBL SIM srednje. 2008. Dostopno na: bd.com
2. Neogen Laboratories. SIM Medium. Dostopno na: varnost hrane
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Medium. 2009. Dostopno na naslovu: http://f-soria.es
4. Brizuela-laboratorij. Srednja SIM. Dostopno na: .brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratories. Srednja SIM. 2015.Dostopno na: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.