MEDIO MIO: TEMELJ, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2025

MIO medij je biokemični preizkus se uporablja za pomoč pri identifikaciji vrst bakterij iz družine enterobakterije. Je precej hranljiv in ga sestavljajo glukoza, izvleček kvasa, pepton, triptein, L-ornitin hidroklorid, bromokresol vijolična in agar.

Pomen njene kratice (MIO) opisuje vse parametre, ki jih lahko opazimo v tem mediju; gibljivost, indol in ornitin. Mobilnost je sposobnost mikroorganizma, da se premika zaradi prisotnosti flagella. Da bi lahko opazili to lastnost, mora biti konsistenca medija poltrdna, zato pripravek vsebuje manj agarja.

Oris interpretacije rezultatov v mediju MIO. Vir: Pripravil avtor mag. Marielsa gil

Proizvodnja indola kaže na prisotnost encima triptofanaze, ki deluje na aminokislino triptofan, za kar je potrebna uporaba razkrivajočega reagenta, da je proizvodnja indla vidna.

Končno ornitin določa, ali lahko bakterija dekarboksilira aminokislino, torej če ima encim orinitin dekarboksilazo.

Osnove

Pepton, ekstrakt kvasa in triptein

Ti elementi prispevajo k prehranski moči tega medija. Služijo kot vir hranil in esencialnih aminokislin za razvoj bakterij.

Poleg tega je triptein vir triptofana, ki kaže prisotnost encima triptofanaze, ki triptofan razgradi z reduktivnim razkrojevanjem, sproščanjem indola, piruvične kisline, amoniaka in energije.

Indole je brezbarven, zato njegovo prisotnost razkrijemo z dodajanjem petih kapljic Ehrlichovega ali Kovacsovega reagenta, obe s p-dimetilaminobenzaldehidom.

Aldehidna skupina te spojine reagira z indolom, tako da na površini agarja tvori obročno rdeč produkt fuksije.

Vsako barvno sled je treba šteti za pozitiven test. Dokaz je treba prebrati takoj, saj se sčasoma barva poslabša.

Poleg tega je treba ta test razkriti, ko so bili opaženi rezultati gibanja in dekarboksilacije ornitina.

Interpretacija

Pozitiven test: tvorba fuksija rdečega obroča ob dodajanju kapljic Kovacsovega reagenta.

Negativni test: ni tvorbe obroča.

Mobilnost

Sposobnost bakterij za premikanje bo očitna, če opazimo moten medij ali če se okoli začetne inokulacije razširi debela rastna linija.

Negativni test gibljivosti se bo izkazal z opazovanjem tanke črte rasti in vse okoli njega bo brez rasti.

Pomembno je, da se motoričnost odčita pred razkritjem indola, saj dodatek reagenta zamegli ves medij.

Pri mobilnih, a počasi rastočih bakterijah je težko pokazati njihovo gibljivost s tem medijem. V tem primeru je priporočljivo uporabiti druge teste ali metode, na primer srednjo gibalno sposobnost ali metodo padanja v postopku.

Glukoza

Glukoza je fermentirajoči ogljikov hidrat, ki poleg zagotavljanja energije zakisuje okolje, je potreben pogoj za dekarboksilacijo aminokisline ornitin.

Fermentacija glukoze mora vedno potekati, izhajajoč iz načela, da vse bakterije, ki spadajo v družino Enterobacteriaceae, fermentirajo glukozo.

L-Ornitin

V primeru, da bakterije proizvajajo encim ornitin dekarboksilazo, lahko to deluje, ko se medij zakisa s fermentacijo glukoze.

Encim ornitin dekarboksilaza deluje na karboksilno skupino aminokisline, pri čemer tvori amin, imenovan putresin, ki ponovno alkalizira medij.

Ta test je treba prebrati po 24 urah inkubacije, ker če poskusite brati, preden lahko napačno razlagate test z napačno negacijo.

Upoštevati je treba, da je prva reakcija fermentacija glukoze, zato medij postane rumen v začetni fazi (prvih 10 do 12 ur). Če se kasneje pojavi dekarboksilacija ornitina, se medij obarva vijolično.

Pomembno je razložiti test dekarboksilacije ornitina, preden razkrijemo indola, saj dodatek Kovacsovega reagenta spremeni barvo medija.

Interpretacija

Negativni test: medij z rumeno barvo ali z rumenim ozadjem.

Pozitiven test: srednje popolnoma vijoličen.

Indikator PH

V tem primeru se uporablja bromokresol vijolična; tista, ki je zadolžena za razkrivanje sprememb pH v mediju. Po zakisanju indikator postane rumen, po alkalizaciji pa vijoličen.

Seme in razvoj tehnike

Za setev MIO gojišča se uporablja ravna zanka ali igla, z njim pa se nabere del kolonije, ki jo je treba preučiti.

V sredini MIO se v ravni črti naredi globok preboj. Izvajanja dvojne punkcije ni priporočljivo, saj lahko daje lažno podobo gibljivosti, če prebijanja ne izvajamo na istem mestu.

V aerobiozi inkubirajte 24 do 48 ur pri 37 ° C. Rezultate poglejte v tem zaporedju: gibljivost, dekarboksilacija ornitina in na koncu razkrijte indola.

Priporočljivo je, da aseptično odstranite 2 ml gojišča, ga prestavite v sterilno epruveto in tam opravite test za indole, tako da lahko, če je negativen, preostanek originalne epruvete še naprej 24 ur inkubiramo, da se indol ponovno razkrije.

Razvoj indola poteka na naslednji način: 3 do 5 kapljic Kovacsovega reagenta dodamo v medij MIO in ga močno pretresemo. Opazimo, ali se pojavi obroč rdeče fuksije ali ne.

Priprava

MIO medij

Odtehtamo 31 g MIO medija in raztopimo v enem litru destilirane vode.

Segrevamo, dokler mešanica ne vre eno minuto, pri čemer pogosto tresemo, dokler se agar popolnoma ne raztopi. Z bombažnimi pokrovčki razdelite 4 ml gojišča v epruvete 13/100.

Sterilizirajte v avtoklaviranju pri 121 ° C 15 minut. Odstranite iz avtoklava in pustite stati naravnost v stojalu, tako da nastane poltrdni blok.

Shranjujte v hladilniku 2-8 ° C. Pred setvijo bakterijskega seva pustite, da se ogreje.

Barva dehidriranega medija je bež, barva pripravljenega medija pa rahlo opalescentno vijolična.

Končni pH pripravljenega medija je 6,5 ± 0,2

Medij postane rumen pri kislem pH in je vijoličen pri alkalnem pH.

Kovacs reagent (Indole test razvijalec)

Ta reagent je pripravljen na naslednji način:

Izmeri se 150 ml amilnega, izoamilnega ali butilnega alkohola (katerega koli od treh). V njej raztopimo 10 g p-dimetilaminobenzaldehida. Nato počasi dodamo 50 ml koncentrirane klorovodikove kisline.

Pripravljen reagent je brezbarven ali svetlo rumen. Hranite ga v jantarni steklenici in hranite v hladilniku. Temno rjava barva kaže njeno poslabšanje.

Kovačsov reagent lahko nadomestimo tudi z reagentom Ehrlich. Slednji, ki so bolj občutljivi, raje razkriva indola v bakterijah, ki ga proizvajajo v majhnih količinah, na primer v nekaterih ne fermentirajočih gram-negativnih palicah in nekaterih anaerobih.

Uporaba

Ta medij je test, ki dopolnjuje baterijo biokemijskih testov za identifikacijo bakterij iz družine Enterobacteriaceae.

Podatki o dekarboksilaciji ornitina služijo za razlikovanje Shigella sonnei, ki preizkuša pozitivno, od Shigella boydii, Shigella flexneri in S. dysenterieae, ki testirajo negativno.

Razlikuje tudi rod Klebsiella, ki preizkuša negativno, od rodu Enterobacter, kjer večina njegovih vrst testira pozitivno.

Vir: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.

QA

Vsakič, ko se pripravi serija MIO medija, se lahko izvede kontrolni preskus. Za to se uporabljajo znani ali certificirani sevi za opazovanje vedenja medija.

Sevi, ki jih je mogoče uporabiti, so Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes in Proteus mirabilis.

Pričakovani rezultati so E. coli in M. morganii. Dan M: +, I: + in O: +.

Klebsiella pneumoniae je vsa negativna (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis in Enterobacter aerogeni dajejo M: + I: - in O: +.

Reference

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testi za identifikacijo bakterij kliničnega pomena. 3. izd. Uredništvo Panamericana. Buenos Aires Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015. Dostopno na: britanialab.com
5. BD Laboratoriji. Medij BBL Mobility Indole Ornithin (MIO). 2007. Dostopno na: bd.com
6. Valtek Laboratories. Srednja MIO mobilnost, Indole, Ornitin. 2010.Dostopno na: andinamedica.com