Brisa je diagnostično orodje za aktivno pljučno tuberkulozo. Gre za laboratorijsko tehniko, ki omogoča odkrivanje in merjenje hitro kislinskih bacilov, kot je Mycobacterium tuberculosis. Je najbolj razširjena metoda po vsem svetu za postavitev diagnoze aktivne pljučne tuberkuloze v skupnosti in za oceno prednosti zdravljenja.
Pljučna tuberkuloza je nalezljiva bolezen, ki jo povzroča Mycobacterium tuberculosis, ki okuži pljuča, vendar lahko prizadene druge organe in sisteme. Po vsem svetu več kot 6 milijonov ljudi trpi za pljučno tuberkulozo (TB).
M. tuberculosis celice v razmazu sputuma (Vir: Microrao / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0) via Wikimedia Commons)
Mycobacterium tuberculosis in druge ne-tuberkulozne vrste Mycobacterium imajo na celični steni lipidni premaz, ki je bogat z mikolično kislino, ki je odporna na razbarvanje kislega alkohola po obarvanju z osnovnimi barvili.
Zato se uporabljajo posebne metode obarvanja, kot je metoda Ziehl-Neelsen. Te preproste in poceni metode omogočajo, da stena ob izpiranju vzorca s kislo raztopino obdrži madež, stena Mycobacterium pa postane rdeča v nasprotju z drugimi bakterijami, ki obarvajo modro.
Za brisanje z mikroskopijo je potreben vzorec sputuma, po možnosti vzet zjutraj, ko vstanete. Uporabljajo se lahko tudi vzorci tkiva ali vzorci telesne tekočine.
Proces
Vzorci, ki jih je treba obdelati za mikroskopijo, so vzorci sputuma, vzorci tkiva ali vzorci telesnih tekočin. Vzorce tkiv lahko odvzamemo z bronhoskopijo ali biopsijo bezgavk ali drugih tkiv.
Ker lahko tuberkuloza prizadene kateri koli organ ali sistem, so lahko vzorci zelo raznoliki, vključno z: vzorci urina, cerebrospinalno tekočino, plevralno tekočino, ascitno tekočino, kri, gnoj iz odprtih votlin, biopsije itd.
Za kulturo je treba obdelati tudi ekstrapulmonalne lezijske vzorce. Vzorci sputuma se zbirajo v jutranjih urah po vstajanju.
Lahko se zbere več vzorcev v vrsti ali zaporednih dni. Vzorce je treba označiti v zaprtih steklenicah s širokim usti. Vključiti morajo podatke o bolniku, vrsto vzorca in datum odvzema vzorca.
Tehnični postopek
- Ko dobimo vzorec, ga lahko centrifugiramo, da se koncentriramo ali uporabimo neposredno. Začetni postopek je sestavljen iz tega, da se nekaj kapljic vzorca položi na stekelce.
- Vzorec je prekrit s filtriranim fuksinom (raztopina za obarvanje).
- Nato se segreva, dokler ne dobimo približno treh emisij belkaste pare.
- Počakajte pet minut, da se vzorec ohladi, in ga sperite z vodo.
- Za 2 minuti je prekrit z raztopino za beljenje (kisli alkohol).
- Spet se spere z vodo.
- Vzorec je prekrit z metilen modro in pustimo stati eno minuto.
- Izpere z vodo.
- Pustite, da se posuši na zraku in nadaljujte z opazovanjem pod mikroskopom.
Fotografija iz mikroskopa (Slika Konstantina Kolosova na www.pixabay.com)
Ta postopek je hiter, preprost, poceni in omogoča, da se celice Mycobacterium tuberculosis obarvajo rdeče. Ta tehnika se imenuje tehnika barvanja Ziehl-Neelsen.
Mikroskopsko opazovanje sestoji iz prepoznavanja prisotnosti kislih hitrih bacilov in njihove količinske določitve po poljih.
Celice Mycobacterium tuberculosis izgledajo kot rdeče, zrnate, ukrivljene palice na modrem ozadju. Lahko so izolirani, seznanjeni ali združeni. Opazovanje je treba opraviti po polju in pregledati vsaj 100 polj za vsak bris.
Rezultat se šteje za pozitiven, če je na vsakem polju več kot 10 M. tuberkuloznih celic. To ustreza 5000 do 100.000 bacilov na vsak mililiter vzorca.
V teh primerih velja za pozitivno na Mycobacterium tuberculosis, saj imajo nettuberkulozne mikobakterije ali druge kislinsko odporne bakterije različne oblike in na splošno je opažena količina na polju manj kot 10.
Oseba, ki pregleduje vzorec, mora imeti izkušnje ali strokovno znanje o odkrivanju in prepoznavanju teh mikroorganizmov, saj lahko v rezultatih obstajajo lažni negativi ali lažni pozitivni rezultati.
Obstajajo tudi druge fluoroskopske tehnike, ki so občutljivejše, vendar veliko dražje. Ena izmed teh tehnik uporablja obarvanje z Auramine-O za pridobivanje zelene fluorescence ali obarvanje z Auramine O / Rhodamin B za opazovanje rumeno / oranžne fluorescence.
Pozitivni primeri se na splošno izvajajo za kulturo in antibiogram za potrditev diagnoze in ustrezen izbor zdravljenja.
Za kaj je namenjena mikroskopija?
Tuberkuloza je nalezljiva bolezen, ki prizadene pljuča in druge organe in organske sisteme telesa. Gre za nalezljivo bolezen, ki povzroči resne poškodbe dihal, ki lahko, če se ne zdravijo pravilno, povzročijo smrt bolnika.
Tuberkuloza se prenaša skoraj izključno skozi kapljice, suspendirane v zraku iz izkašljevanja pacienta, okuženega s pljučno tuberkulozo. Te majhne kapljice lahko ostanejo v zraku in imajo možnost okužbe osebe, ki jih vdihuje.
M. tuberculosis celice (Vir: NIAID / CC BY (https://creativecommons.org/licenses/by/2.0) prek Wikimedia Commons)
Okužba zahteva daljši čas stika z okuženim bolnikom, ki nenehno izbljuva bacile v slabo prezračevanem okolju. Ljudje z imunsko pomanjkljivostjo se pogosteje okužijo.
Bolniki z virusom HIV so bolj verjetno kot ostali prebivalci, da razvijejo resne respiratorne okužbe, vključno s pljučno tuberkulozo. Od tod pomembnost mikroskopije razmaza kot hitre in poceni diagnostične metode za tuberkulozo.
Zmožna mikroskopija omogoča postavitev bakteriološke diagnoze tuberkuloze, vendar je treba z drugimi študijami potrditi pozitiven rezultat.
Študije, ki potrjujejo diagnozo tuberkuloze, vključujejo radiološke preiskave, ki prikazujejo značilne slike v zgornjih režnjah pljuč, pozitivne teste za tuberkuline in pozitivne vzorčne kulture.
Smeh negativen
Mikroskopija z negativnim razmazom nujno ne izključuje diagnoze tuberkuloze, saj zlasti kadar je vzorec sputum, izločanje bacilov ni konstantno. Zato so v teh primerih ob sumu na diagnozo potrebni serijski vzorci.
Pozitiven razmaz
Pozitivna mikroskopija razmaza kaže na tuberkulozo in jo je treba potrditi z drugimi dopolnilnimi študijami. Kadar koli je rezultat pozitiven, je treba narediti kulturo in antibiogram.
Ko je zdravljenje vzpostavljeno, lahko trajno znižanje lestvice pozitivnosti mikroskopije razmaza do pridobitve negativnih rezultatov omogoča nadzorovanje prednosti zdravljenja.
Reference
- Aziz, MA (2002). Zunanja ocena kakovosti za mikroskopijo razmaza AFB.
- Desikan, P. (2013). Mikroskopija razmaza iz sputuma pri tuberkulozi: je še vedno pomembna ?. Indijska revija medicinskih raziskav, 137 (3), 442.
- Fauci, AS, Kasper, DL, Hauser, SL, Jameson, JL, & Loscalzo, J. (2012). Harrisonova načela interne medicine (Vol. 2012). DL Longo (ur.). New York: Mcgraw-hrib.
- Ngabonziza, JCS, Ssengooba, W., Mutua, F., Torrea, G., Dushime, A., Gasana, M.,… & Muvunyi, CM (2016). Diagnostična uspešnost brisa mikroskopije in inkrementalni izkoristek zdravila Xpert pri odkrivanju pljučne tuberkuloze v Ruandi. Nalezljive bolezni BMC, 16 (1), 660.
- Sardiñas, M., García, G., Rosarys, MM, Díaz, R., & Mederos, LM (2016). Pomen nadzora kakovosti baciloskopije v laboratorijih, ki izvajajo diagnozo tuberkuloze. Čileanski časopis za infektologijo: Uradni organ čilske družbe za infektologijo, 33 (3), 282-286.
- Dr. Sequeira de Latini, dr.med., In Barrera, L. (2008). Priročnik za bakteriološko diagnozo tuberkuloze: standardi in tehnični priročnik: mikroskopija 1. V Priročniku za bakteriološko diagnozo tuberkuloze: standardi in tehnični priročnik: 1. del razmazane mikroskopije (str. 64-64).