VODA IZ PEPTONA: UTEMELJITEV, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Pepton voda je tekočina obogatitev medij, neselektivna, večinoma uporabljajo kot razredčilo vzorcev živil ali drugih materialov. S kemijskega vidika je ta medij zelo preprost, vsebuje mesni pepton, natrijev klorid in vodo.

Ima določeno hranilno vrednost, ki omogoča obogatitev vzorca. Če obstajajo zlorabljene bakterije, ima ta medij moč, da popravi sposobnost preživetja. Posebej je koristen pri obnavljanju bakterij iz družine Enterobacteriaceae.

Peptone voda v steklenicah. Vir: mag. Marielsa gil

V primeru okrevanja salmonele se priporoča uporaba variante vode z napihnjenim peptonom; Ta služi kot predbogatelno sredstvo za vzorec, v tem primeru vsebuje druge elemente, kot sta dinatrijev fosfat in dikalijev fosfat.

Običajno je voda peptona pripravljena pri nevtralnem pH, vendar obstajajo tudi druge različice, pri katerih mora biti pH 8,5 ± 0,2 (alkalna), ker so bakterije, ki jih je treba izolirati, alkalne, kot je npr. Vibrio kolere.

Poleg tega se lahko ta medij uporablja kot osnovni medij za teste fermentacije ogljikovih hidratov.

Osnove

Peptoni zagotavljajo hranila, potrebna za rast bakterij, zlasti dušik in kratke verige aminokislin, natrijev klorid pa ohranja osmotsko ravnovesje.

Poleg tega medij omogoča razprševanje, homogenizacijo in popravilo bakterijskih celic, ki so bile poškodovane zaradi industrijskih procesov.

Kot razredčilo je idealna, saj učinkovito nadomešča fiziološko raztopino (SSF) ali raztopino fosfatnega pufra (PBS).

Rast bakterij je razvidna z opazovanjem njegove motnosti.

Priprava

Domača priprava (nekomercialna)

Odtehtamo 1 g peptona in 8,5 g natrijevega klorida, raztopimo v 1 litru destilirane vode. PH je treba prilagoditi na 7,0. Za to lahko uporabimo 1N natrijev klorid.

Priprava s komercialnim medijem

Odtehtamo 15 g dehidriranega medija in raztopimo v litru destilirane vode. Mešanico homogeniziramo. Po potrebi mešanico vremo 1 minuto, da se pomaga raztapljanje. Postrezite v 100 ml steklenicah ali 10 ml epruvetah po potrebi. Avtoklavirajte pri 121 ° C 15 minut.

Ohladite in uporabite ali shranite v hladilniku. Končni pH medija je 7,2 ± 0,2.

Barva dehidriranega medija je svetlo bež, pripravljen medij pa svetlo rumen.

Priprava na fermentacijske teste

V prejšnji pripravek - pred sterilizacijo - je treba dodati ogljikove hidrate v končni koncentraciji 1%, plus indikator Andrade (kisli fuksin) ali fenol rdeč (0,018 g / L). Cevi morajo biti opremljene z zvoncem Durham, da opazujejo tvorbo plina.

Druge različice vode iz peptona

Puferirana ali puferirana peptonska voda

Vsebuje encimski hidrolizat kazeina, natrijevega klorida, dihidrogen kalijevega fosfata in natrijevega hidrogen fosfata dodekahidrata. Končni pH je 7,0 ± 0,2.

Za njegovo pripravo odtehtamo 20 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru destilirane vode. Pustite počivati ​​približno 5 minut. Segrevajte 1 minuto, dokler se popolnoma ne raztopi.

Po potrebi nalijte v primerne kozarce. Sterilizirajte z avtoklavom pri 121 ° C 15 minut.

-Alkalna peptonska voda

Odtehtamo 25 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru vode. Nadaljujte, kot je opisano zgoraj. PH se giblje od 8,3 do 8,7.

Uporaba

Inokulum se izvede tako, da se vzorec da neposredno.

Uporablja se za redčenje vzorcev, zlasti kadar obstaja sum, da lahko pride do poškodovanih bakterij. Običajno so razredčitve 1:10 in 1: 100.

Inkubirajte 24 ur v aerobiozi pri 35-37 ° C.

Vzorci blata

Za vzorce blatu za salmonelo se priporoča uporaba pufrane ali puferirane vode kot pred-obogatitvenega medija.

To storite tako:

Če se tvori blato, vzemite 1 g vzorca. Če so tekoče, vzemite 1 ml zalege in suspendirajte v epruveti z 10 ml vode nabodanega peptona. Če gre za rektalne brise, material, ki je v brisu, odcedite v epruveto z vodno peptonsko vodo.

V vseh primerih vzorec zelo dobro premešamo in homogeniziramo.

Inkubirajte 18 do 24 ur pri 37 ° C. Kasneje subkultivirajte v juhu za obogatitev, kot je sestinska cistinska juha ali tetrationatirana juha pri 37 ° C 18-24 ur več. Končno gojimo v selektivnih medijih za salmonelo, kot so SS agar, XLD agar, Hektoen agar.

Vzorci hrane

Voda Peptone se uporablja kot sredstvo za obogatitev ali kot preprosto topilo, vendar če iščete vrste salmonele, se uporablja kot predobogatenje, kot je že opisano.

V hrani se nadaljuje na naslednji način:

Za trdo hrano tehtamo 25 g vzorca, za tekočo hrano pa 25 ml. Omenjeni delež dajte v bučke, ki vsebujejo 225 ml vode peptona. Vzorec premešamo in homogeniziramo.

Če obstaja sum, da je obremenitev z mikrobi velika, se lahko za lažje štetje enot, ki tvorijo kolonije (CFU), opravijo serijska ali decimalna redčenja.

Število razredčenj je odvisno od vrste vzorca in izkušenj analitika.

Če nasprotno sumimo, da je obremenitev z mikrobi zelo majhna, ni treba izvajati redčenj. Kasneje subkultura na selektivnih medijih.

V primeru morske hrane, kot so školjke, ribe, med drugim v iskanju kolere Vibrio ali drugih vrst Vibrio, je treba uporabiti vodo iz peptona, prilagojeno na pH 8,5 (alkalna peptonska voda).

QA

Iz vsake pripravljene serije je treba eno uro do dve epruveti inkubirati 24 ur v aerobiozi pri 37 ° C. Ob koncu časa ne smete opaziti motnosti ali spremembe barve.

Za oceno njihove učinkovitosti se lahko uporabljajo tudi znani kontrolni sevi:

Za to lahko uporabimo naslednje bakterijske seve: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

V vseh primerih se pričakuje zadovoljiv razvoj mikrobov, kar opazimo z motnostjo medija.

Omejitve

-Dehidrirani medij je zelo higroskopen, zato ga je treba hraniti proč od vlage.

-Ležišča se ne sme uporabljati, če je opaziti kakršno koli poslabšanje.

- Dehidrirano gojišče je treba hraniti med 10 - 35 ° C

- Pripravljen medij je treba hraniti v hladilniku (2-8 ° C).

Reference

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B in Velázquez O. Tehnike mikrobiološke analize živil. 2009, 2. izd. Fakulteta za kemijo, UNAM. Mehika. Različica za skrbnika priročnikov in dokumentov (AMyD) Kemijske fakultete, UNAM 1. Dostopno na naslovu: http://depa.fquim.unam.mx
2. Britannia Laboratories. Voda iz peptona. 2015. Dostopno na: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Peptone voda. Dostopno na: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Peptone voda. 2015. Dostopno na: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Puferirana peptonska voda. Dostopno na: merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratories. Alkalna peptonska voda. Dostopno na: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.