XLD AGAR: UTEMELJITEV, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Agar XLD ali ksiloza lizina desoxycholate agar medija je selektiven in razlika trdna kulture za izolacijo enteropatogenov. Taylor je zasnovala formulo agla XL (Xylose, Lysine), da bi izboljšala izolacijo rodu Shigella.

Opazil je, da je ta rod zaviral v večini medijev, namenjenih izolaciji enteropatogenov. Nato smo dodali natrijev deoksilat, natrijev tiosulfat in železov amonijev citrat, da smo povečali njegovo selektivnost. Ta formula se je izkazala za koristno za izolacijo šigele in salmonele.

Razlike kolonij Shigella, Salmonella in koliform v XAR agarju. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Viri: A. Avtor: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, dr. Audra Marsh, Courtesy: Knjižnica slik javnega zdravja B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Avtor: CDC / Dr. JJ kmet, dovoljenje: Knjižnica slik javnega zdravja

XLD agar je sestavljen iz ekstrakta kvasa, natrijevega deoksiholata, ksiloze, lizina, laktoze, saharoze, natrijevega tiosulfata, železovega amonijevega citrata, natrijevega klorida, fenolnega rdečega in agarja. XLD Agar in SS Agar duo uporabljata v večini bakterioloških laboratorijev za preučevanje fekalnih vzorcev Shigella in Salmonella.

Drugi laboratoriji med drugimi razpoložljivimi možnostmi raje kombinirajo CHROMagar Salmonella in XLD agar. Te dvojčke lahko pripravite v dvojnih Petrijevih jedeh. Na eni strani namestijo XLD agar, na drugi strani pa izbrani medij.

Osnove

-Hranilna moč

XLD agar ima izvleček kvasa, ki služi kot vir hranil za mikroorganizme, ki rastejo na tem agarju. Poleg tega prisotnost ogljikovih hidratov (ksiloza, saharoza in laktoza) zagotavlja energijo bakterijam, ki jih lahko fermentirajo.

-Selektivnost medija

Kot zaviralna snov predstavlja natrijev deoksiholat; S tem preprečimo rast gram-pozitivnih bakterij, ki dajejo mediju selektiven značaj.

-Diferencialna moč

Tipične kolonije Shigella

Kot smo že omenili, XLD agar vsebuje ksilozo; Ta ogljikov hidrat fermentira vse bakterije, ki rastejo v tem mediju, razen rodu Shigella.

To je ena od značilnosti, ki ji daje razlikovalni značaj, saj se kolonije Shigella od ostalih razlikujejo po razvijanju rdečih kolonij, ostale bakterije pa tvorijo rumene kolonije.

Tipične kolonije salmonele

Tudi rod Salmonella fermentira ksilozo, ki sprva ustvari rumene kolonije. Po izčrpanju ogljikohidratne ksiloze pa napade lizin na encim lizin dekarboksilazo. Dekarboksilacija lizina ustvarja alkalije, ki obarvajo barvo kolonije in okoliškega medija v prvotno rdečo.

To vedenje izvaja samo salmonela, saj koliformi, ki dekarboksilatijo lizin, ne morejo alkalizirati medija. To je zato, ker koliformne snovi tudi fermentirajo prisotno laktozo in saharozo; zato je proizvodnja kislin zelo visoka, pri teh bakterijah pušča rumeno kolonijo.

Treba je opozoriti, da rod Salmonella ne fermentira saharozo ali laktozo.

Proizvodnja H

XLD omogoča agar tudi odkrivanje H ₂ S- proizvodnjo Salmonella vrste ; Za to se opira na vir žvepla, ki ga predstavlja natrijev tiosulfat, in reaktor, ki je železov amonijev citrat.

Slednji reagira s H ₂ S (brezbarvni plin) in tvori viden netopne črna oborina železovega sulfata. V tem smislu bodo značilnosti kolonij salmonele rdeče s črnim središčem.

Treba je pripomniti, da je: H ₂ S , da pride do tvorbe reakcija , je potrebno alkalnem pH. Zato je drugi enterobakterije, da tvorita H ₂ S ne more storiti ali naredi slabo v tem mediju, saj visoka kislost proizvedene s fermentacijo ogljikovih hidratov prisotne zavira ali ovira reakcije.

-Natrijev klorid, agar in fenol rdeč

Končno natrijev klorid ohranja osmotsko ravnovesje; agar je strjevalno sredstvo, fenol rdeča pa zazna spremembe pH in spremeni barvo kolonij in gojišča.

Priprava

Odtehtamo 55 g dehidriranega medija XLD in raztopimo v 1 litru vode. Mešanico segrejemo in mešamo, dokler ne dosežemo vrelišča. Ne pregrevajte, saj toplota škoduje mediju in ustvarja oborino, ki spremeni morfologijo značilnih kolonij.

Ta medij ne sme biti samodejno klaviran. Ko se raztopi, ga je treba prenesti v vodno kopel pri 50 ° C. Ko se ohladi, ga postrežemo neposredno na sterilnih petrijevih posodah. Lahko jih vlijemo v enojne plošče ali dvojne plošče. Pustijo, da se strdijo, in jih hranite v hladilniku do uporabe.

Pred uporabo temperirajte. Ker gre za nesterilni medij, ga priporočamo, da ga pripravite blizu datuma uporabe.

Končni pH medija mora biti 7,4 ± 0,2. Barva pripravljenega medija je oranžno-rdeča, prosojna, brez oborine.

Če imate osnovni agar Xylose Lysine (XL), lahko dodate natrijev deoksilat, natrijev tiosulfat in železov amonijev citrat. Na ta način dobimo XLD agar formulo.

Prijave

XLD agar se uporablja za obnovo enteropatogenov, večinoma iz rodu Shigella in sekundarno iz roda Salmonella. Koristno je za ocenjevanje vzorcev blata, vode in hrane.

Vrste vzorcev

Izmet

Vzorce blatu je mogoče posejati neposredno na XLD agar, kar omogoča dobro porazdelitev materiala, da dobimo izolirane kolonije.

Za izboljšanje obnovitve salmonele lahko agar XLD črtamo iz medijev za obogatitev s salmonelo.

Hrana

V primeru hrane lahko uporabimo obogatitvene juhe za salmonelo in šigelo. Za salmonelo lahko med drugim uporabite juho selenitnega cistina, svetlo zeleno tetraionatno juho.

V primeru Shigelle jo lahko obogatimo z juho Shigella z 0,5 µ / ml novobiocina, inkubiramo 16-20 ur pri 42 ° ± 1 ° C.

Voda

Med analizo vode sta med drugim priporočljiva tudi membranska filtracijska tehnika in uporaba XLD agarja.

Pogoji zasaditve in identifikacije

Semeni medij se 24 do 48 ur aerobno inkubira pri 35 ° C.

Opazimo značilne kolonije vsakega roda, sumljive kolonije bi morale biti opravljene z biokemijskimi testi za njihovo identifikacijo.

QA

Za oceno nadzora kakovosti gojišča lahko uporabimo naslednje bakterijske seve: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Za rod Salmonella je značilna predstavitev rdečih kolonij s črnim središčem ali popolnoma črnimi kolonijami na tem mediju. Medtem ko morajo biti v rodu Shigella kolonije rdeče, torej barve medija.

V primeru Escherichia coli naj bi bilo v celoti ali delno zavirano; če raste, so kolonije rumene. Za Proteus mirabilis pričakujemo slabo rast z rožnatimi kolonijami s črnim središčem ali brez njega. Sčasoma bo rod Klebsiella zrasel kot rumene kolonije.

Končne misli

XLD agar se v laboratorijih bakteriologije pogosto uporablja za njegovo visoko učinkovitost pri obnavljanju Shigella, poleg tega pa dobro obnavlja rod Salmonella.

Rall et al. (2005) so v svojem delu z naslovom "Ocenjevanje treh obogatenih juh in petih trdnih medijev za odkrivanje salmonele pri perutnini" pokazali, da so bili testirani trije klasični mediji (svetlo zelen agar, SS agar in XLD agar) , XLD agar je imel najboljšo stopnjo okrevanja.

Odstotek obnovitve je bil naslednji: 13,8% za svetlo zeleni agar, 27,6% za SS in 34,5% za XLD. Rambach agar z 48-odstotno rekuperacijo in CHROMagar s 79,3% sta presegla le kromogeni medij.

Reference

1. Bolezni, ki se prenašajo s hrano. Šigelloza. Dostopno na: anmat.gov.ar
2. "XLD agar." Wikipedija, prosta enciklopedija. 9. februar 2019, 11:46 UTC 10. april 2019, 19:25 wikipedia.org
3. Laboratoriji BBL. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate). 2013 Dostopno na: bd.com
4. Laboratorij Neogen. XLD agar. Dostopno na naslovu: foodsafety.neogen
5. Francisco Soria Melguizo Laboratorij. XLD Agar. Dostopno na: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Ocena treh obogatitvenih bujnic in petih podstavkov za odkrivanje salmonele pri perutnini. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147–150. Dostopno od: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.