VOGEL-JOHNSON AGAR: UTEMELJITEV, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Agar Vogel-Johnson je trdno sredstvo selektivni in razlika kulture, posebej prirejeno za izolacijo Staphylococcus aureus. Ta medij sta leta 1960 ustvarila Vogel in Johnson iz modifikacije telurit glicin agarja, ki so jo leta 1955 oblikovali Zebovitz, Evans in Niven.

Sprememba je obsegala povečanje koncentracije manitola, ki je prisoten v mediju, in vključitev kazalnika pH. Trenutna formula je sestavljena iz tripteina, ekstrakta kvasa, manitola, dikalijevega fosfata, litijevega klorida, glicina, fenolno rdečega, agarja, 1% raztopine kalijevega telurita in vode.

Vir: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr

Treba je opozoriti, da obstajajo tudi drugi mediji, ki so, podobno kot agar Vogel-Johnson, selektivni za izolacijo bakterije S. aureus, kot sta slani manitov agar in agar Baird Parker. V tem smislu bi lahko rekli, da je temelj agarja Vogel-Johnson mešanica med slanim manitolovim agarjem in agarjem Baird Parker.

Prvič, kolonije S. aureus odlikujemo s fermentacijo manitola in spreminjanjem pH indikatorja v rumeno. Po drugi strani je za S. aureus značilna redukcija telurita v telur in tvorba sivih do črnih kolonij. Obe lastnosti opazimo v agaru Vogel-Johnson.

Ta medij je, tako kot njegovi kolegi, uporaben za odkrivanje Staphylococcus aureus v vzorcih hrane, sanitarnem nadzoru industrijskih izdelkov in v kliničnih vzorcih.

Osnove

Dobava hranil

Medij Vogel-Johnson vsebuje izvleček tripteina in kvasa; Obe snovi zagotavljata dolgoverižne aminokisline, ki služijo kot vira ogljika in dušika, potrebna za rast bakterij. Bakterije, ki lahko rastejo v tem mediju, bodo vzele hranljive snovi iz teh snovi.

Izbirna moč

Vogel-Johnson agar lahko zavira rast gram-negativnih bakterij in celo nekaterih gram-pozitivnih bakterij, kar daje prednost razvoju koagulazno pozitivnih stafilokokov. Zaviralne snovi so kalijev telurit, litijev klorid in glicin.

Diferencialna moč

Snovi, ki tvorijo to diferencialno gojišče, so manitol in kalijev telurit. Manitol je ogljikov hidrat in ko se fermentirajo, nastajajo kisline, zaradi katerih se medij spremeni iz rdeče v rumeno, kar se zgodi zahvaljujoč prisotnosti kazalca pH rdečega fenola.

Ker brezbarvni telurit, ko je reduciran na prosti kovinski telur, prevzame temno sivo do črno barvo.

Staphylococcus aureus fermentira manitol in reducira telurit v teluri. Zaradi tega so značilne kolonije S. aureus v tem mediju sive ali črne, obdane z rumenim medijem.

Bakterije, ki rastejo v tem mediju in ne zmanjšujejo telurita ali fermentacijskega manitola, bodo zaradi alkalizacije medija z uporabo peptonov tvorile prozorne kolonije, obdane z rdečim obarvanim medijem, še intenzivnejšim od prvotne barve.

Po drugi strani pa bodo bakterije, ki zmanjšujejo telurit, vendar ne fermentirajo manitola, zrasle kot sive ali črne kolonije, obkrožene z globokim rdečim medijem.

Če bi bil medij pripravljen brez dodatka kalijevega telurita, bi se kolonije S. aureus razvile kot rumene kolonije, obdane z rumenim medijem, kot v slanem manitolnem agarju.

Osmotsko ravnovesje in strjevalno sredstvo

Dikalijev fosfat ohranja osmotsko ravnovesje medija in pH prilagodi nevtralnosti 7,2. Medtem ko agar daje trdno konsistenco gojišču.

Priprava

Raztopina kalijevega telurita 1% m / v

Ta raztopina ni vključena v dehidrirani medij, saj je ni mogoče sterilizirati v avtoklavu. Zaradi tega se pripravi ločeno in doda v že steriliziran medij.

Nekatere komercialne hiše prodajajo pripravljeno 1-odstotno raztopino kalijevega telurita. Če se želite pripraviti v laboratoriju, nadaljujte na naslednji način:

Odtehtamo 1,0 g kalijevega telurita in izmerimo 100 ml destilirane vode. Kalijev telurit raztopimo v delu vode in nato dolijemo količino vode, dokler ne dosežemo 100 ml. Sterilizirajte raztopino s filtracijsko metodo.

Vogel-Johnson Agar osnova srednje

Odtehtamo 60 gr dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru destilirane vode. Zmes segrejemo do vretja, da se pospeši raztapljanje. Med postopkom raztapljanja medij pogosto mešamo.

Sterilizirajte v avtoklaviranju pri 15 kilogramov tlaka in 121 ° C 15 minut. Odstranite iz avtoklava in pustite počivati, dokler medij ne doseže temperature približno 45 do 50 ° C. Dodamo 20 ml predhodno pripravljene 1% raztopine kalijevega telurita.

Premešamo in prelijemo v sterilne Petrijeve posode. Pustite, da se strdi, in obrnite na držala za plošče, da se pozneje shrani v hladilniku do uporabe.

Končni pH pripravljenega medija mora biti 7,2 ± 0,2.

Pred setvijo vzorca počakajte, da plošča doseže sobno temperaturo.

Barva pripravljenega medija je rdeča.

Uporaba

Čeprav se lahko uporablja za izolacijo bakterije S. aureus v kateri koli vrsti vzorcev, se uporablja predvsem za mikrobiološko analizo farmacevtskih izdelkov, kozmetike in hrane.

Priporočljivo je, da je inokulum gost. Seme lahko izvedemo s točkovanjem s platinastim ročajem ali po površini z Drigalski lopatico.

Plošče inkubiramo pri 35-37 ° C 24 do 48 ur aerobioze.

QA

Za nadzor kakovosti na mediju Vogel-Johnson se lahko uporabijo naslednji kontrolni sevi:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ali Proteus mirabilis ATCC 43071.

Pričakovani rezultat je naslednji: pri sevih S. aureus je zadovoljiva rast črnih kolonij, obdanih z rumenim medijem. Za S. epidermidis redna rast s prosojnimi ali črnimi kolonijami, obdanimi z rdečim medijem.

Prav tako se pričakuje popolna inhibicija E. coli in delna ali popolna inhibicija za Proteus mirabilis; če raste, bo to storila zmerno in kolonije bodo črno obdane z rdečo barvo.

Reference

1. BD Laboratoriji. VJ (Vogel in Johnson Agar). 2006.Na voljo na: bd.com
2. Britannia Laboratories. Vogel- Johnson Agar. 2015. Dostopno na: britanialab.com
3. Britannia Laboratories. Kalijev telurit. 2015. Dostopno na: britania.com
4. Himedijski laboratorij. Vogel-Johnson Agar Medium. 2018. Dostopno na: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel-Johnson Agar Base. Merck priročnik za mikrobiologijo. 12. izdaja, str. 502-503. Na voljo na: Uporabniki / Ekipa / Prenosi
6. Sodelavci Wikipedije, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia brezplačna enciklopedija, dostopno na: wikipedia.org.
7. Venezuelski standard Covenin 1292-89. (1989). Živila. Izolacija in naštevanje Staphylococcus aureus. Dostopno na: sencamer.gob.ve