SVETLO ZELEN AGAR: UTEMELJITEV, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Briljantno zelen agar je trdno gojišče z visoko stopnjo selektivnosti. Uporablja se izključno za izolacijo sevov iz roda Salmonella, vendar obstajajo nekatere izjeme, na primer vrste tifusa in paratifi, ki ne rastejo na tem mediju.

Iskanje rodu Salmonella je pogosto v vzorcih blata, vode ali hrane. V tem smislu je ta medij lahko zelo koristen. Ta agar so leta 1925 ustvarili Kristensen, Lester in Jurgens, kasneje ga je prilagodil Kauffmann.

Svetlo zelen agar. Kolonije fermentacije in ne fermentacije. Vir: Razstava MJ Richardson / Nevidni svetovi - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Licenca Creative Commons.

Sestavljen je iz pluripeptonov iz peptičnega prebavljanja živalskega tkiva in trebušne slinavke iz kazeina, vsebuje tudi izvleček kvasa, natrijev klorid, laktozo, saharozo, fenol rdeč, svetlo zelen in agar-agar.

Zanjo je značilno, da je za večino bakterij dokaj neprijetno okolje, ki daje prednost salmoneli, vendar so nekatere kolilike v njem sposobne obstati in se širijo šibko.

Pomembno je opozoriti, da rod Shigella ne raste na tem gojišču, prav tako ne Salmonella typhimurium ali Salmonella paratyphi. Če želite izolirati te mikroorganizme, je treba med drugim uporabiti druge medije, na primer XLD agar.

Osnove

Svetlo zelen agar

Vsaka komponenta, ki sestavlja medij, izpolni določeno funkcijo, ki določa lastnosti in lastnosti agarja.

Pluripeptoni in ekstrakt kvasa so vir hranilnih snovi, iz katerih mikroorganizmi jemljejo dušik in minerale, potrebne za njihov razvoj. Laktoza in saharoza sta vir energije za mikroorganizme, ki jih lahko fermentirajo.

Svetlo zelena je zaviralna snov, ki preprečuje rast gram-pozitivnih bakterij in velikega števila gram negativnih mikroorganizmov.

Natrijev klorid daje osmotski stabilnosti mediju. Medtem ko je fenol rdeča indikator pH, ob zaznavanju nastajanja kisline iz fermentacije ogljikovih hidratov postane barva.

Kolodije laktoze in saharoze, ki ne fermentirajo, rastejo na tem mediju v rožnato ali prozorno belo barvo, na rdečem ozadju. Na primer bakterije iz roda Salmonella.

Medtem ko bakterije, ki fermentirajo laktozo ali saharozo, sposobne rasti na tem mediju, razvijejo rumeno-zelene ali rumeno-zelene kolonije na zelenkasto rumeni podlagi. Na primer, Escherichia coli in Klebsiella pneumoniae.

Različice svetlega agarja (BGA)

Obstajajo tudi druge različice svetlo zelenega agarja; Novogecin Briljantna zelena glukoza (NBG) Agar in Novobiocin Briljantna zelena glicerol laktoza (NBGL) Agar.

Novobiocin svetel zeleni glukozni agar

Vsebuje soptin sojin agrik, citronski amonijev citrat, natrijev tiosulfat pentahidrat, fenol rdeče, glukozo, svetlo zeleno, novobiocin in destilirano vodo.

Uporablja se za izolacijo kolonij salmonele iz vzorcev blata.

V tem primeru sta svetlo zelena in novobiocin zaviralne snovi, ki preprečujejo rast gram-pozitivnih bakterij in nekaterih gram-negativnih mikroorganizmov.

Natrijev tiosulfat je vir sulfida in železov citrat je vir železa, oba potrebna za razkritje vodikovega sulfida s tvorbo črne oborine železovega sulfida.

Glukoza je fermentirajoči ogljikov hidrat, fenol rdeča pa indikator pH.

Na tem mediju se razvijejo kolonije salmonele velike s črnim središčem, obdanim z rdečkasto halo, ki mu sledi jasno vidno območje. Nekateri sevi Citrobacter freundii proizvajajo kolonije, identične kot Salmonella.

Novobiocin Briljantni zeleni glicerol laktoza Agar (NBGL)

To gojišče vsebuje sojin agar tripptikaze, železov amonijev citrat, natrijev tiosulfat, laktozo, glicerol, svetlo zeleno, novobiocin in destilirano vodo.

Razlika med tem medijem in prejšnjim je v tem, da je glukoza substituirana z laktozo, glicerol in da se ne uporablja fenol rdeča.

Medij se uporablja tudi za izolacijo vrst salmonele, kolonije se razvijejo črno, zaradi proizvodnje vodikovega sulfida.

Samo kolonije, ki ne proizvajajo kisline iz glicerola ali laktoze doseganje zadostne H ₂ S proizvodnjo , ker nizek pH moti H ₂ S postavitev . Posledica tega brezbarvne kolonije za večino vrst Proteus in Citrobacter.

Priprava

-Tehta 58 gramov komercialno pridobljenega dehidriranega medija. Dodajte ga v liter redestilirane vode. Premešamo, pustimo stati nekaj minut in postavimo mešanico na vir toplote, dokler se popolnoma ne raztopi.

-Avtoklavirajte pri 121 ° C 15 minut, ne prekoračite časa sterilizacije.

-Pusti počitek in postrežemo, ko je vroče v sterilnih petrijevih posodah. Končni pH naj bo 6,9 ± 0,2.

-Počistite in hranite v hladilniku do uporabe. Pred setvijo plošče naj bo sobna temperatura.

-Predilni prašek je zelene barve in pripravljen prevzame oranžno-rjavo ali rdečkasto zeleno barvo, odvisno od pH in tržne družbe. Zelo rjava barva kaže na pregretje agarja.

- Ko se agar strdi, se ne priporoča preoblikovanja, saj se medij poslabša.

Uporaba / aplikacije

Ta medij se med drugim uporablja za iskanje sevov roda Salmonella iz vzorcev blata in mlečne hrane.

Ker gre za precej neprijetno okolje, je priporočljivo posejati obilno cepivo, če se uporabi neposredni vzorec. V nasprotnem primeru je treba pred setvijo v ta medij opraviti predhodno obogatitev in obogatitev osebkov.

Ker nekateri sevi salmonele zavirajo ali rastejo s težavo, je priporočljivo, da to sredstvo spremljate z drugimi selektivnimi agarji za salmonelo.

Vsako kolonijo z značilno značilnostjo salmonele je treba opraviti na biokemične preiskave, da se lahko dokončno identificira.

QA

Za preverjanje dobrega učinka svetlo zelenega agarnega medija lahko ATCC seve uporabimo za opazovanje njihovega razvoja na njem.

Najpogostejši sevi, ki se uporabljajo za nadzor kakovosti, so: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 12022.

Prve 3 naj bi imele rožnato ali prozorno belo kolonijo na rdečem ozadju. Salmonela z dobrim razvojem in Proteus z majhno ali redno rastjo.

Za Klebsiella in Escherichia pričakujemo rumeno-zelene kolonije z rumenim ozadjem, v primeru Shigella in stafilokoka pa jih je treba zavirati.

Dehidrirani medij je treba hraniti pri sobni temperaturi, na suhem mestu, ker je medij zelo higroskopen.

Reference

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Briljantno zeleni agar. 2009
2. Britannia Laboratory. Svetlo zelen agar. 2015
3. BD Laboratorij. BD Briljantni zeleni agar. 2013
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Argentina. Uredništvo Panamericana SA