THAYER MARTIN AGAR: TEMELJ, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Agar Thayer Martin je zelo hranljiv in trdno snov selektivno gojišče za izolacijo bakterije Neisseria meningitidis in Neisseria gonorrhoeae; oboje poznano kot patogene ali klinično pomembne Neisserije.

Ena najpomembnejših posebnih značilnosti Thayerja Martina Agarja je njegova visoka vsebnost prehranskih dopolnil. Ta lastnost je bistvenega pomena, saj so neisserije s prehranskega vidika zelo zahtevni mikroorganizmi in zato ne rastejo v običajnih medijih.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin poslovni medij. Slika vira 1: avtor avtorja mag. Marielsa Gil, slika 2. Pixinio.com bakkolonizirana, spremenjena, Thayer, Martin, agar.

Po drugi strani pa, ker se ti mikroorganizmi običajno nahajajo na nesterilnih območjih, je dodajanje zaviralcev nujno, da preprečimo rast spremljajoče flore, ne da bi to vplivalo na razvoj rodu Neisseria.

Ta agar je sestavljen iz baznega agarja GC, hemoglobina, dodatnih prehranskih dopolnil in kompleksa zaviralnih snovi (antibiotikov in protiglivičnih zdravil). Komercialne hiše prodajajo vsak dodatek posebej.

Vzorec, ki ga je treba posejati v ta medij, bo odvisen od mikroorganizma, ki ga iščejo. Za Neisseria gonorrhoeae so idealni vzorci vaginalni in sečnični izločki. Medtem ko so za Neisseria meningitidis najpogosteje uporabljeni vzorci CSF, faringealni in nazofaringealni eksudati.

Osnove

Neisserije so mikroorganizmi, ki jih uvrščamo med nadležne, zato je njihova izolacija težavna. Zato je Thayer Martín kompleksen medij in vsaka njegova komponenta izpolni funkcijo, ki je pojasnjena spodaj:

GC bazni agar

GC agar vsebuje proteozni pepton, koruzni škrob, natrijev klorid, kalijev fosfat, monokalijev fosfat in agar-agar. Njegove sestavine zagotavljajo osnovna hranila za razvoj mikrobov, nevtralizirajo strupene maščobne kisline, pomagajo pri vzdrževanju osmotskega ravnovesja, določanju pH in zagotavljajo trdno konsistenco mediju.

Hemoglobin

Hemoglobin zagotavlja dejavnika V in X (nikotinamid adenin dinukleotid NAD oziroma hemin). Zaradi tega v tem mediju rastejo tudi vrste Haemophilus. Hemoglobin se lahko komercialno pridobi v dehidrirani obliki ali se v medij lahko doda sveža defibrinirana goveja kri.

Dodatek za obogatitev

Po drugi strani pa je treba v medij Thayer-Martin dodati tudi obogatitveni dodatek, saj hranila, ki jih vsebuje bazni agar, ne zadostujejo za potrebe rodu Neisseria.

Najpogosteje uporabljen dodatek za obogatitev se imenuje isovitalex. Vsebuje glutamin, adenin, NAD, kokarboksilazo, gvanin, železov nitrat, p-amino benzojsko kislino, vitamin B12, tiamin in glukozo. Vse te spojine so potrebne za pravilen razvoj patogenih neisserij.

Zaviralci

Ker gre za zelo hranljiv medij, je treba uporabiti zaviralce, ki preprečujejo rast mikroorganizmov iz običajne flore območja in tako ugodno vplivajo na izolacijo rodu Neisseria.

Inhibicijski kompleks je sestavljen iz vankomicina, kolistina in nistatina. Vankomicin zavira rast gram-pozitivnih bakterij, kolistin preprečuje rast gram-negativnih bakterij, kot so pseudomonas in nekatere saprofitne neisserije, nistatin pa deluje na kvasovke, kot je Candida albicans.

Vendar je bil Thayer Martin Agar pozneje spremenjen; spremembe so sestavljale dodatek trimetoprima, povečanje količine agarja in dodajanje dodatne glukoze. Te spremembe so znatno izboljšale obnovo vrst Neisseria gonorrhoeae.

Treba je opozoriti, da trimetoprim zavira rast rodu Proteus in njegovo posledično rojenje. V tem smislu so antibiotiki tisti, ki posredujejo Thayerju Martinu selektivne lastnosti.

Priprava

Originalni agar Thayer Martin

-GC agar

Odtehtamo 8,2 g dehidriranega GC medija in suspendiramo v 100 ml. Premešamo in kuhamo 1 minuto ob pogostem mešanju, da se popolnoma raztopi. Mešanico sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut.

- 2% hemoglobina

2 g dehidriranega hemoglobina suspendirajte v 2 ali 3 ml vroče destilirane vode, dokler ne nastane enotna zmes. Dodajte malo po malo vode, da dobite prostornino 100 ml. Pred sterilizacijo mora biti suspenzija homogena.

Sterilizirajte v avtoklavu 15 minut.

-Dopolnilni dodatek

Trgovinsko vialo rekonstituirajte z razredčilom, ki ga je ponudilo isto komercialno podjetje. Dobro premešaj. Količina razredčila, ki jo je treba uporabiti, bo določena v navodilih za komplet.

-VCN inhibicijsko dopolnilo (vankomicin, kolistin, nistatin)

Vialo rekonstituirajte z razredčilom, ki ga je dobavilo komercialno podjetje. Dobro premešaj. Količina razredčila, ki jo je treba uporabiti, bo določena v navodilih za komplet.

-Pripravljeno

Za vsakih 100 ml GC agarja postopek:

Ko GC agar izstopi iz avtoklava, ga pustite, da se ohladi na približno 50 ° C in dodajte 2 ml pripravljene raztopine hemoglobina, 2 ml dodatka za obogatitev (izobitalex ali britalex) in 2 ml dodatka za inhibicijo. Premešamo in postrežemo v sterilni petrijevi posodi.

Do uporabe pustite, da se strdi in hranite v hladilniku.

Barva pripravljenega medija je češnjevo rdeča. Končni pH medija je 7,2 ± 0,2

Spremenjen agar Thayer Martin

Odtehtamo 8,2 g dehidriranega GC medija in suspendiramo v 100 ml. Dodamo 1 g agar-agarja in dodamo 0,3 g glukoze. Premešamo in kuhamo 1 minuto ob pogostem mešanju, da se popolnoma raztopi. Mešanico sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut.

Pripravite dodatek za hemoglobin in obogatitev, kot je že opisano.

Uporabljeno supresijsko dopolnilo je VCNT (vankomicin, kolistin, nistatin, trimetoprim).

-Pripravljeno

Nadaljujte, kot je opisano za originalni agar Thayer Martin.

Uporaba

Thayer Martin Agar je treba pustiti, da se ogreje, preden se vzorci stisnejo. Običajno uporabljeni vzorci so faringealni brisi, brisi iz nosu, vaginalni, sečnični in / ali rektalni izcedek in CSF.

Uporabite sveže vzorce in naredite močne inokulume na agarju. Vzorci se sejejo neposredno z odvajanjem materiala in nato izčrpanost črta na površino.

Plošče inkubiramo pri 35-37 ° C 24 do 48 ur v mikroaerofilni posodi (5% CO ₂ ). Na koncu časa inkubacije se plošče pregledajo za majhne, ​​sive in včasih mukoidne kolonije.

Opravite Gram in potrditvene biokemijske preiskave na sumljivih kolonijah.

QA

Naslednje mikrobne seve lahko uporabimo za nadzor kakovosti Thayerja Martina Agarja.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 in Neisseria meningitidis ATCC 13090; pri obeh sevih se pričakuje zadovoljiv razvoj.

Vključiti je treba tudi naslednje seve: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 in Candida albicans ATCC 10231. Pri vseh teh pričakujemo popolno ali delno inhibicijo v tem mediju.

Omejitve

- Ne smemo pozabiti, da lahko bakterije, ki so odporne na uporabljene inhibitorje, rastejo v mediju.

- Obstajajo sevi bakterije Neisseria gonorrhoeae, ki so lahko občutljivi na uporabljeno koncentracijo vankomicina. Zaradi tega je priporočljivo uporabljati čokoladni agar, dopolnjen z izovitalexom, vendar brez zaviralcev.

- Obstajajo nistatin odporni sevi kvasovk, ki lahko rastejo v tem mediju in motijo ​​izolacijo patogenih neisserij, zlasti gonokokov.

Reference

1. Diagnostični laboratoriji Valtek. Thayer-Martin Agar, 2016. Dostopno na: com
2. Britannia Laboratories. Thayer Martin Srednje spremenjen. 2010.Dostopno na: britanialab.com
3. Sodelavci Wikipedije. Thayer-Martin agar. Wikipedija, prosta enciklopedija. 26. oktober 2017, 16:33 UTC. Dostopno na: wikipedia.org 4. Dostopno 28. februarja 2019.
4. Britannia Laboratories. GC agar. 2010.Dostopno na: britanialab.com.
5. Laboratoriji BBL ™ srednja obogatitev za hitre mikroorganizme. 1999. Dostopno na: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.