Bizmut sulfit Agar je trdno sredstvo selektivni in razlika kulture, posebej prirejeno za izolacijo Salmonella enterica podvrste enterica serotipa typhi, med drugimi vrstami salmonele. Medij je znan kot agar BSA po akronimu v angleškem jeziku Bismuth Sulfite Agar.
Prvotno formulo za bizmut sulfit agar sta leta 1927 ustvarila Wilson in Blair (železov medij glukoze bizmut sulfit); Vseboval je natrijev sulfit, glukozo, raztopino bizmuta, amonijev citrat, železov sulfat in agar-agar.
Rast 48 ur inkubacije Salmonella sp na bizmut sulfit agarju. Vir: Pixnio.com Avtor: Dr. WR Erving, USCDCP
Danes obstaja modifikacija prvotnega medija, sestavljenega iz ekstrakta mesa, mesnih in kazeinskih peptonov, indikator bizmut sulfita, glukoze, dinatrijevega fosfata, železovega sulfata, svetlo zelene barve in agar-agarja.
Obstaja veliko sredstev za izolacijo vrst salmonele, toda ko gre za predelavo serotipa Typhi, ima bizmut sulfit agar pomembno prednost pred njimi, saj je v večini zelo malo ali pa se ta mikroorganizem ne pridobi. .
Vendar pa je treba pri izolaciji enteropatogenov uporabiti več vrst medija, saj je bizmutov sulfitni agar manj učinkovit za druge vrste salmonele in za rod Shigella, ki jih zavirajo ali se razvijajo zelo slabo. v tem agarju.
Treba je opozoriti, da je od vseh vrst salmonele serotip Typhi eden najpomembnejših enteropatogenov pri ljudeh, saj je to edini rezervoar. Ta serovar povzroča tifusno vročino, gastroenteritis, bakteremijo in septikemijo.
Zaradi tega je primerno vključiti ta agar pri analizi vode, zalega ali vzorcev hrane, pri katerih obstaja sum na njegovo prisotnost.
Osnove
Kot večina kulturnih medijev tudi bizmutov sulfitni agar vsebuje hranila za pospeševanje rasti bakterij, kot so peptoni in mesni ekstrakt. Prav tako glukoza deluje kot vir energije in ogljika.
Vendar na tem mediju ne bodo rasle vse bakterije, saj je bizmut sulfit agar selektivni medij. Vsebuje spojine, ki zavirajo rast gram-pozitivnih mikroorganizmov in nekaterih gram-negativnih bakterij. Te spojine so: indikator bizmut sulfit in svetlo zelena.
Soda dinatrijev fosfat ohranja osmolarnost in pH medija.
Poleg tega, bizmut sulfit Agar je razlika srednje zahvaljujoč prisotnosti železovega sulfata, ki prikazuje tvorbo H 2 S. H 2 S tvorjena z bakterijami reagira z železovim sulfatom in tvori jasno viden netopne črna oborina.
Končno agar-agar daje trdni konsistenci medij.
Priprava
Odtehtamo 52,3 g dehidriranega medija in ga raztopimo v enem litru vode. Zmes med pogostim mešanjem segrevamo 1 minuto, dokler se popolnoma ne raztopi. Ne pregrevajte se preveč. Ta medij ni samodeklaviralen, ker ekstremna toplota škoduje gojišču.
Pustimo, da se ohladi na 45 ° C in stresemo pred serviranjem v sterilne Petrijeve posode. Priporočljivo je izdelati plošče z dobro debelino. Če želite to narediti, je treba v vsako ploščo vliti 25 ml. Pustimo, da se strdi. Ker gre za medij, ki ni steriliziran, je običajno, da se predlaga njegova takojšnja uporaba.
Vendar pa je raziskava, ki jo je leta 1977 izvedel D'aoust, pokazala, da se boljša obnova Salmonella typhimurium in Salmonella enteritidis, kot je srednja stopnja bizmut sulfitnega agarja, kar ne vpliva na uspešnost serovarov Typhi in Paratiyphi B.
D'aoust priporoča uporabo plošč na 4. dan hlajenja, čeprav opozarja, da se s srednjo starostjo selektivnost zmanjšuje in sevi Proteus vulgaris lažje razvijejo.
Zaradi tega je za visoko onesnažene vzorce, kot je izmet, bolje uporabiti sveže pripravljen medij. V nasprotnem primeru uporabite na 4. dan njegove priprave. Drugi avtorji priporočajo uporabo krožnikov dan po pripravi, shranjene v hladilniku.
Ohlajene plošče je treba pred uporabo temperirati. PH medija mora biti 7,5 ± 0,2. Surovi medij je bež, pripravljen medij pa zelenkasto-siv opalescenten.
Prijave
Med vzorci, ki jih lahko posadimo v ta medij, so vzorci iztrebkov, pitne ali odpadne vode in hrane.
Za izboljšanje izolatov je priporočljivo pred setvijo na bizmut sulfit agar opraviti predhodno obogatitev z laktozno juho in po obogatitvi z juho iz tetrationata ali cistin selenita.
Plošče se 24 do 48 ur inkubirajo pri 35 ° C ± 0,2 v aerobiozi.
Značilnosti kolonij na bizmut sulfit agaru
Kolonije Salmonella Typhi so običajno opažene na tem agaru v 24 urah s črnim središčem in obkrožene s svetlo zeleno halo. V 48 urah postanejo popolnoma črne zaradi tvorbe vodikovega sulfida.
-Ta medij zavira večino vrst rodu Shigella.
- S. Typhi in S. arizonae lahko dajeta zelo podobne kolonije.
-V koliformne bakterije, ki proizvajajo H 2 S, kot je Proteus in Citrobacter nastanejo kolonije, ki so podobni tistim, Salmonella, zato je potrebno izvesti biokemijske teste identifikacije.
-Za pridobitev izoliranih kolonij je treba narediti dobro strijo; To je edini način za opazovanje značilnih značilnosti kolonij iz roda Salmonella.
QA
Za nadzor sterilnosti se ininokulirana plošča inkubira pri 37 ° C, pričakuje se, da ne bo prišlo do rasti ali spremembe barve.
Za nadzor kakovosti so znani sevi, kot so:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Pričakuje se, da bosta Escherichia coli in Shigella flexneri delno zavirana z razvojem zeleno-rjave in rjave kolonije. Obe salmoneli morata imeti odličen razvoj s črnimi kolonijami s kovinskim sijajem in končno mora biti Enterococcus faecalis popolnoma zaviran.
Reference
- Wilson, W., in EM McV. Blair. Uporaba železovega medija z glukoznim bizmutom za izolacijo vrste B. typhosus in B. proteus. Časopis za higieno, 1927; 26 (4), 374–391. Pridobljeno s .jstor.org
- D'aoust JY. Vpliv pogojev skladiščenja učinka bizmut sulfitnega agarja. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Na voljo v: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD Laboratoriji. Bizmut-sulfitni agar po WILSON-BLAIR. 2009.Dostopno na: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Himedijski laboratoriji. Bizmutov sulfitni agar. 2017. Dostopno na: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G in Ybarra M. Bakteriološka kakovost surovega kozjega mleka, pridelanega v Miravallesu, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45–54