TRYPTICASEIN SOJIN AGAR: UTEMELJITEV, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Soja agar triptona ali triptikaznem sojinem agarju je trdno gojišče in prehranske neselektivna. Črke TSA ga označujejo s kratico v angleščini Trypticase Soy Agar. Sestavljajo ga triptein, sojin pepton, natrijev klorid in agar-agar.

Zaradi visoke prehranske moči je idealen za gojenje zmerno zahtevnih in nezahtevnih mikroorganizmov. Srednje brez dodatnih dodatkov se ne priporoča za primarne kulture, je pa zelo koristno za subkultiviranje čistih sevov in njihovo ohranjanje med drugim.

Tripticasein klini sojinega agarja v epruvetah z bakelitnimi pokrovčki. Vir: Fotografija avtorja mag. Marielsa Gil.

Prav tako ta agar služi kot osnova za pripravo obogatenih medijev, kot je krvni agar, zlasti kadar je potrebno opazovati vzorce hemolize in vgraditi takto optokina in bakitracina, ki sta potrebna pri diagnozi Streptococcus pneumoniae in Streptococcus pyogenes.

Po drugi strani je v kombinaciji z antibiotiki koristno izolirati klinično pomembne fakultativne in stroge anaerobne mikroorganizme iz vzorcev z mešano floro.

Končno sestava soptinega agarina triptikaseina in njegova uspešnost izpolnjujeta zahteve različnih farmakopej (evropskih, japonskih in severnoameriških).

Osnove

Za pravilen razvoj bakterij je potrebna prisotnost zalog energije, na primer aminokislin, vitaminov, purskih in pirimidnih baz.

V tem smislu triptein in sojin pepton zagotavljata ta hranila mikroorganizmom in tako omogočata njihov polni razvoj. Vendar pa je za hitre bakterije potrebno ta agar dopolniti z defibrinirano krvjo ali ogreto krvjo, da se poveča njegova obogatitev.

Po drugi strani pa, če v medij dodamo antibiotike, postane selektivni medij. 0,6% kvasnega ekstrakta lahko dodamo tudi za izolacijo vrst rodu Listeria, dodatek cistin telurita in jagnječje krvi pa je idealen za Corynebacterium diphteriae.

Končno natrijev klorid daje osmotskemu ravnovesju medij, agar pa trdno konsistenco.

Priprava

Plošče soptinega triptaseina Agar

Za pripravo triptikasein sojinega agarja je treba digitalno tehtati 40 g dehidriranega komercialnega medija. Raztopimo ga v enem litru destilirane vode, ki je v bučki.

Mešanico pustimo počivati ​​5 minut, nato pa jo odnesemo v vir toplote, da se sredstvo raztopi. Pogosto ga mešamo in kuhamo 1 do 2 minuti. Nato se medij sterilizira v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut.

Pustite, da se ohladi na 50 ° C in porazdelite v sterilne Petrijeve posode. Pustite, da se strdi, obrnite, naročite v plakete in shranite v hladilniku.

Končni pH medija mora biti 7,3 ± 0,2.

Upoštevati je treba, da je barva dehidriranega gojišča svetlo bež barve in jo je treba hraniti med 10 in 35 ° C, v suhem prostoru.

Pripravljen agar je svetlo jantarne barve. Pripravljene plošče hranite do uporabe v hladilniku (2-8 ° C).

Plošče morajo pred uporabo doseči sobno temperaturo.

Plošče soptinasein triptasein, dopolnjene s krvjo

Krvni agar pripravimo z dodajanjem 5% defibrinirane krvi ob ohlajanju soptičnega agarja triptilkazeina na 50 ° C. Zmes homogeniziramo z vrtenjem z nežnimi gibi.

Postrezite v sterilnih petrijevih posodah. Srednja barva naj bo češnjevo rdeča.

Plošče soptinaseptina triptasein, dopolnjene s segreto kri

Za pripravo krvnega agarja na osnovi TSA nadaljujte enako kot že opisani postopki, vendar pa, ko pustite avtoklavo, pustite počivati, dokler temperatura medija ni približno 56 do 70 ° C. Takrat se odvzame kri in meša, dokler se medij ne rjavi.

Postrezite v sterilnih petrijevih posodah. Barva medija je čokoladno rjava.

Trypticasein klini iz sojinega agarja

Postopek priprave agarja je enak tistemu, ki je opisan za krožnike, s to razliko, da se namesto da se medij servira na Petrijevih posodah, pred sterilizacijo porazdeli med 10 do 12 ml v epruvetah z Bakelitovim pokrovom.

Nato se epruvete 15 minut avtoklavirajo pri 121 ° C. Ko odidejo, jih nagnemo s pomočjo opore in pustimo, da se strdijo.

Pripravljeni klini so posejani po površini in služijo nekaterim nezahtevnim mikroorganizmom, da so določen čas sposobni preživeti.

Prijave

Trypticasein sojin agar se uporablja v naslednjih primerih:

- Kot osnova za pripravo klasičnega krvnega agarja, ki se rutinsko uporablja v večini laboratorijev.

-Izolacija zahtevnih bakterij.

-Opazovanje vzorca hemolize.

-Izvedba diagnostičnih testov.

- Kot osnova za pripravo posebnega krvnega agarja za Corynebacterium diphteriae s cistinskim teluritom in jagnjetino krvjo.

-Kao osnova za pripravo jagnjetinega krvnega agarja, plus kanamicin-vankomicin za rast anaerob, zlasti Bacteroides sp.

- za vzdrževanje nezahtevnih sevov (Bacterioteca).

- Število aerobnih mikrobov pri preučevanju mikrobne meje vzorcev vode, okolja, hrane in kozmetičnih izdelkov.

Posejano

Vzorce je mogoče posejati neposredno na površino soka Aptrik Trippticasein, dopolnjenega s krvjo ali drugimi dodatki. Seja se ga zaradi izčrpanosti.

Medtem ko se plošče soptičnega agarja s triptikaseinom brez dodatkov običajno uporabljajo za subkulturo mikrobnih sevov (bakterij ali kvasovk).

QA

Nadzor sterilnosti

Za preverjanje sterilnosti različnih medijev, pripravljenih s sopom agarina triptilkaseina, priporočamo naslednje: iz vsake pripravljene šarže je treba 1 uro in 2 inokulirane plošče ali epruvete 24 ur inkubirati pri 37 ° C, da pokažemo njihovo sterilnost. V vseh primerih mora ostati brez rasti.

Če je ugotovljena kontaminacija, je treba celotno serijo zavreči.

Nadzor rasti

Naslednje bakterijske seve lahko uporabimo za preučevanje pravilnega delovanja soptičnega agarja triptikaseina: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 in Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Sove sejemo in aerobno inkubiramo 24 ur pri 37 ° C.

V vseh primerih mora biti rast zadovoljiva.

Uporabljajo se lahko tudi glive, kot sta Candida albicans Complex ATCC 10231 in Aspergillus niger ATCC 16404. Pri obeh vrstah se pričakuje dobra rast.

Vzorec nadzora in hemolize rastlinskega sojinega agarja, dopolnjenega s krvjo

Za preverjanje pravilnega delovanja krvnega agarja, pripravljenega s to bazo, lahko uporabimo naslednje seve: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 in Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Sejemo in inkubiramo pri 37 ° C v mikroaerofilnosti 24 ur.

V vseh primerih mora biti rast zadovoljiva, če upoštevamo, da je pri S. pyogenes treba opaziti beta-hemolizo (rahlo halo okoli kolonije), pri obeh sevih bakterije S. pneumoniae pa opazovati alfa hemolizo (zelenkasto halo okoli kolonije). kolonije).

Reference

1. Sodelavci Wikipedije. Tripticaza Sem agar. Wikipedija, prosta enciklopedija. 17. december 2018, 15:47 UTC Dostopno na: https://en.wikipedia.org
2. Britannia Laboratories. Triptein sojin agar. 2015. Dostopno na: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Triptični sojin agar. Dostopno na: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
5. BD Laboratoriji. Tripticaza Sem Agar. 2014.Dostopno na: .bd.com