Agar Salmonella Shigella znan tudi kot SS agar je selektivno in diferencialno medij zmerno, posebej za izolacijo enteropathogenic bakterij rodu Salmonella in Shigella, obeh vzorcih iz okolja, kot klinično.
SS agar ima zapleteno sestavo; Sestavljajo ga iz mesnega ekstrakta, peptona, laktoze, žolčnih soli, natrijevega citrata, natrijevega tiosulfata, železovega citrata, agarja, nevtralno rdeče, svetlo zelene in destilirane vode. Glede na veliko selektivnost je mogoče posejati vzorce z bogato mešano floro.
SS agar s kolonijami Salmonella sp. Vir: Manurx27, iz Wikimedia Commons
V mikrobioloških laboratorijih se medij Salmonella-Shigella široko uporablja za raziskovanje prisotnosti Salmonella in Shigella v vzorcih driskanih blatu, odplak, pitne vode in hrane.
Včasih je za obnovo sevov salmonele potrebno uporabiti predbogatelno juho (laktozna juha) in obogatitveno brozgo (selenitna cistinska juha).
Ti koraki so potrebni, če obstaja sum na obstoj salmonele v zelo majhni količini ali kadar sev lahko zlorabijo postopki, značilni za industrijsko proizvodnjo, pretežno predelane hrane. Priporočljivo je tudi obogatiti vzorce blata pri bolnikih, ki so bili zdravljeni z antibiotiki.
Nato lahko obogateno juho sejemo na agar Salmonella-Shigella in druge podobne medije, kot so ksilozni agar, lizin deoksilat (XLD) in enterični hektoen agar (HE).
Osnove
Vsaka komponenta gojišča Salmonella-Shigella ima specifično funkcijo, zmes kot celota pa ji zagotavlja lastnosti, ki so značilne.
Negovalna moč
Mesni ekstrakt in pepton (prebavljen s kazeinom in živalskim tkivom) zagotavljata potrebna hranila (nitrogene, ogljik in vitamine) za razvoj mikroorganizmov, ki lahko prenašajo preostale sestavine.
Doslednost
Agar-agar je odgovoren za zagotavljanje trdne konsistence na mediju.
Izbirno
Ta medij je zelo selektiven, saj vsebuje žolčne soli, natrijev citrat in svetlo zeleno. Zato zavira rast vseh gram-pozitivnih bakterij in večine gram-negativnih bacilov, vključno z nekaterimi koliformami.
Medtem ko bakterije iz roda Salmonella in nekateri sevi Shigella podpirajo te spojine.
V glavnem je rod Salmonella zelo odporen na žolčne soli, in sicer toliko, da lahko živijo v žolčniku nekaterih bolnikov-prenašalcev, ki bakterije v svojih blatu nenehno izločajo.
Diferencialno
Laktoza je fermentirajoči ogljikov hidrat, ki pomaga razlikovati laktazno fermentirajoče seve od ne fermentirajočih. To lastnost dokazuje prisotnost indikatorja pH, ki je v tem mediju fenolno rdeč.
Laktazni fermentacijski sevi dajo rdeče kolonije, medtem ko so ne fermentirajoči sevi brezbarvni. Ta značilnost je pomembna, saj salmonela in šigella ne fermentirata laktoze.
Po drugi strani ta medij vsebuje natrijev tiosulfat kot vir sulfida in železov citrat kot vir železa. Obe spojini sta sposobni razlikovati bakterije, ki so sposobne proizvajati vodikov sulfid. Te reagirajo, da tvorijo vidno, netopno, oborino črnega železovega sulfida.
To lastnost najdemo v nekaterih sevih roda Salmonella. Običajno so njihove kolonije ravne brezbarvne barve s črno piko na sredini. Preostali del salmonela ne proizvajajo H 2 S in razvije kot brezbarvne kolonije.
Po drugi strani so kolonije iz rodu Shigella ravne brezbarvne brez črnitve.
Priprava
Ta medij je zelo preprost za pripravo.
Odtehtamo 63 g dehidriranega komercialnega medija in ga raztopimo v litru destilirane vode. Raztopino segrejemo in premešamo. Zmes lahko vre do nekaj minut.
Ta medij ne sme biti samodejno klaviran. Po raztapljanju ga postrežemo neposredno na enojnih ali dvojnih sterilnih krožnikih.
Ko se strdijo, jih na obrnjen način razporedimo po trombocitih in do uporabe hranimo v hladilniku (2-8 ° C).
Medij po pripravi naj ostane pri pH 7,2 ± 0,2 in oranžno-rdeče barve.
Pred setvijo vzorcev je pomembno, da se plošče segrejejo. Izvirni vzorec je mogoče posejati neposredno, material izprazniti na del agarja in nato od tam streljati.
Če uporabljate obogatene juhe, dodajte del juhe selenita in posejajte z drigalski lopatico.
V aerobiozi 24 ur inkubirajte pri 37 ° C.
Upoštevajte, da se število gramov, ki jih je treba tehtati, in končni pH medija lahko razlikujeta od ene poslovne hiše do druge. Srednja osnova vedno prinese indikacije za njeno pripravo.
Uporaba
Pogosto se uporablja pri analizi kulture blata in mikrobiološki študiji vzorcev odpadne vode, pitne vode in hrane.
Pogosto se pripravijo dvojne plošče, na eni strani je postavljen agar Salmonella-Shigella, na drugi pa agar XLD.
Omejitve
- Nekateri sevi Shigella ne rastejo v tem mediju. Zato se ne priporoča za primarno izolacijo tega rodu.
- nobena prozorna kolonija s črnim središčem ne kaže na salmonelo; Za pravilno identifikacijo je treba izvesti biokemijske preiskave, saj se kolonije nekaterih sevov Proteus ne razlikujejo od bakterij salmonele.
-Dehidrirani medij mora skrbeti za izpostavljenost okolju, saj je zelo higroskopičen. Zato ga je treba hraniti v suhem in dobro zaprtem okolju. Odprto za zelo kratka obdobja.
-Včasih se lahko žolčne soli v gojišču obarjajo in tvorijo sliko podobno mat v agarju, vendar to ne vpliva na rezultate.
- Nekateri sevi Shigelle lahko počasi fermentirajo laktozo.
QA
Da bi dokazali, da medij deluje pravilno, je priporočljivo, da posadite znane ali certificirane kontrolne seve in opazite, ali rast ustreza pričakovanim značilnostim.
Za to se lahko uporabljajo sevi E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium ali Enterococcus faecalis.
Pričakovani rezultati so:
Enterobacter in Klebsiella ------ velike kolonije in rdeči ali roza mukoidi.
Shigella flexneri ---------- prozorne ali brezbarvne ravne kolonije.
Salmonella typhimurium ------ brezbarvne kolonije s črnimi središči.
Enterococcus faecalis -------- popolna inhibicija.
Reference
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Salmonella-Shigella agar. 2009.Na voljo na: f-soria.es
- BD Laboratorij. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Dostopno na: bd.com
- Britannia Laboratories. Salmonella-Shigella Agar. 2015. Dostopno na: britanialab.com
- Valtek diagnostika. Salmonella-Shigella Agar (SS Agar). 2010. Dostopno na: andinamedica.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.