Agar manitol sol ali manitola sol trdnem mediju selektivni in razlika kulture. Ustvaril ga je Chapman za izolacijo patogenih gram-pozitivnih kokov, zlasti Staphylococcus aureus.
Vendar pa je koristno tudi izolirati Staphylococus epidermidis, ki je včasih lahko prisoten kot oportunistični patogen, in Staphylococcus saprophyticus, priznani urinski patogen, med drugimi vrstami.
A. Fiola s pripravljenim sredstvom slanega manitolnega agarja. B. Solne plošče manitolnega agarja, posejane z bakterijskimi sevi manitola, ki ne fermentirajo. Vir: A in B: Fotografije avtorja mag. Marielsa Gil.
Nekateri enterokoki so sposobni rasti na tem gojišču, pa tudi nekatere palice, ki tvorijo gram, pozitivne spore.
Ta medij je zelo uporaben pri analizi kliničnih vzorcev, uporablja pa se tudi pri mikrobiološki študiji hrane in pri nadzoru kakovosti industrijskih izdelkov, kot so kozmetika, zdravila.
Soljeni manitolni agar je sestavljen iz ekstraktov in peptonov iz govejega mesa, tripteina, manitola, natrijevega klorida, fenolnega rdečega in agarja.
Osnove
Manitolni agar je selektiven zaradi visoke koncentracije soli. Slanost deluje kot zaviralna snov in preprečuje rast Gram negativnih bakterij.
Razlika je tudi zaradi prisotnosti ogljikohidratnega manitola in indikatorja pH fenolno rdečega. Iz tega bakterije, ki lahko fermentirajo manitol, proizvajajo kisline, zakisajo medij, obarvajo kolonije in medij rumeno.
Po drugi strani kolonije, ki ne fermentirajo manitola, rastejo v gojišču in jemljejo hranila, zagotovljena z ekstrakti in peptoni iz mesa in tripteina. Od tam bakterije pridobivajo ogljik, dušik, vitamine in minerale, potrebne za njihovo rast.
Kolonije v tem primeru so lahko šibke ali močno rožnate, medij pa ostane iste barve ali se spremeni v fuksijo.
Agar je tista snov, ki daje konsistenco mediju.
Priprava
Za pripravo litra slanega manitolnega agarja se 111 g dehidriranega medija iz prednostne komercialne družbe stehta in raztopi v 1000 ml destilirane vode z bučko.
Toplota se uporablja s pogostim mešanjem medija za izboljšanje postopka raztapljanja. Zavremo minuto.
Bučko postavimo v avtoklav pri 121 ° C za 15 minut.
Po koncu časa vialo odstranite iz avtoklava, pustite počivati in servirajte med 15 do 20 ml na sterilnih Petrijevih posodah, ko je temperatura približno 50 do 55 ° C.
Dovoljeno je strjevanje, naročeno na obrnjen način v plakate in hranjenje v hladilniku do uporabe. Pred setvijo vzorca počakajte, da plošča doseže sobno temperaturo.
Plošče sejejo s trskanjem ali površinskim setvijo z drigalski lopatico. Končni pH pripravljenega medija mora biti 7,4 ± 0,2
Barva dehidriranega medija je svetlo bež, barva pripravljenega medija pa je oranžno rdeča.
Prijave
Zaradi visoke selektivnosti je ta medij idealen za setev vzorcev z mešano floro, v katerih želite iskati prisotnost Staphylococus aureus, kot glavnega patogena tega rodu.
V tem smislu je ena najpogostejših uporab pri mikrobiološki analizi faringealnega eksudata in vzorcev izcedka iz nosu, zlasti za odkrivanje asimptomatskih nosilcev S. aureus.
Nekatere države so to analizo uvedle kot obvezno zahtevo za ljudi, ki želijo delati kot prodajalci hrane.
Ta nadzor preprečuje zaposlitev ljudi, ki so nosilci bakterije S. aureus, s čimer se izognemo zastrupitvi s hrano zaradi uživanja hrane, okužene s stafilokoknim enterotoksinom.
Med drugim se lahko vključi tudi pri sejanju okužb ran, krvnih kultur, CSF, bronhoalveolarnega izpiranja.
Soljeni manitolni agar je uporaben za ponovno izolacijo kolonij iz urinskih kultur iz agarja CLED ali krvnega agarja, katerega Gram je v grozdih razkril gram-pozitivne kaki.
Velja tudi za mikrobiološko analizo hrane, pitne vode, tal, med drugimi aplikacijami.
QA
Po pripravi serije krožnikov s slanim manitolnim agarjem je priporočljivo opraviti kontrolo kakovosti. Kontrolni sevi so posejani, da se pokaže, ali obstaja rast ali ne.
Znane vrste sevov Staphylococcus aureus lahko uporabimo kot pozitivno kontrolo. Moral bi se razviti zadovoljivo, pri čemer se razvijejo rumene kolonije, medij pa dobi isto barvo.
Prav tako je priročno vključiti znani sev Staphylococcus epidermidis. Moral bi rasti zadovoljivo razvijati rožnate kolonije, medij pa ostane iste barve ali potemni na močnejšo roza.
Kot negativna kontrola se uporabljajo sevi, ki ne smejo rasti na tem gojišču. Na primer, lahko gojimo znan sev bakterije Escherichia coli ali Klebsiella pneumoniae. Pričakovani rezultat je popolna inhibicija, torej brez rasti.
Poleg tega je treba inokulirano ploščo inkubirati. V njej ne bi smelo biti rasti ali spremembe barve.
Pomembno je, da se plošča ne uporablja, če med drugim obstajajo znaki okvare, kot so onesnaženje, dehidracija, sprememba barve.
Končne misli
Pri uporabi slanega manitolnega agarnega medija je treba upoštevati nekaj pomembnih vidikov:
- Če narastete rumene kolonije, ne pomeni, da gre za Staphylococcus aureus. Ne smemo pozabiti, da so nekateri sevi enterokoka sposobni rasti v tem mediju in fermentirati manitol, pa tudi nekatere grampozitivne palice, ki tvorijo spore.
Zato je pomembno, da se na koloniji opravi Gram in test za katalazo.
- Po drugi strani pa je treba upoštevati, da so druge vrste stafilokoka, razen aureusa, sposobne fermentirati manitol. Zato je pomembno, da kolonijo subkultiviramo v hranilno juho, da od tam odvzamemo in opravimo test koagulaze.
Med vrste stafilokoka kliničnega pomena za človeka, ki fermentirajo manitol, so: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, med drugimi.
Drugi lahko dajo spremenljivo reakcijo, torej včasih pozitivno in včasih negativno. Nekateri so med drugim S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius.
-Ne priporočamo jemanja kolonij neposredno iz manitolnega agarja za izvajanje koagulaznega testa, saj lahko visoka koncentracija soli v gojišču vpliva na rezultat.
-Na koncu je priporočljivo, da plošče, posejane s slanim manitolom, inkubirate do 48 ur, saj nekateri sevi bakterije S. aureus lahko počasi fermentirajo manitol, čeprav to ni zelo pogosto.
Reference
- Britannia Laboratories. Slani manitolni agar. 2015. Dostopno na: britanialab.com
- "Slani manitolni agar". Wikipedija, prosta enciklopedija. 31. oktober 2018, 19:08 UTC 17. januar 2019, 20:55, dostopno na: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
- BD Laboratoriji. BD manitov solni agar. 2013. Dostopno na: bd.com.