SABOURAUD AGAR: TEMELJ, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Agar Sabourand , znan tudi kot Sabourand agar z dekstrozo, je trdna medij, zlasti obogatena za izolacijo in razvoj glivic, kot so kvasovke, plesni in dermatofiti.

Zato tega medija ne more manjkati v mikrobiološkem laboratoriju, ki bi preučil prisotnost patogenih ali oportunističnih gliv, bodisi iz kliničnih ali nekliničnih vzorcev. Prav tako je idealen tudi za rast nitastih bakterij, kot so Streptomyces in Nocardias. Njegova uporaba je zelo široka, saj jo lahko uporabljamo pri človeški, živalski, rastlinski in industrijski mikologiji.

A. Nesejan agar Sabouraud. B. Sabouraud agar, posejan s kvasom. Vir: Fotografije avtorja mag. Marielsa gil

Ta medij je leta 1896 ustvaril ugledni dermatolog Raimond Sabouraud, ki je postal svetovno znan specialist za motnje na lasišču, ki jih povzročajo predvsem dermatofiti.

Njeno ustvarjanje je bilo tako pomembno, da so ga uporabljali od nekdaj in ostaja še danes, čeprav z nekaj spremembami.

Čeprav je posebna za glive, lahko bakterije rastejo v tem mediju, zato je za vzorce z mešano floro potrebno vključitev antibiotikov v njihovo pripravo, da zavirajo rast bakterijske flore, ki je lahko prisotna.

Izbira antibiotika mora biti previdna in upoštevati vrsto glive, ki jo je treba obnoviti, saj nekatere zavirajo v prisotnosti določenih snovi.

Osnove

Dekstrozni agar Sabouraud je medij, ki je v svoji prvotni formulaciji zaradi svojega kislega pH 5,6 ± 0,2 šibko selektiven, vendar se lahko bakterije še vedno razvijejo, predvsem v dolgotrajnih inkubacijah.

Medij vsebuje kazein pepton in prebavni trebuh trebušne slinavke živalskega tkiva, ki zagotavljata vir ogljika in dušika za rast mikroorganizmov.

Vsebuje tudi visoko koncentracijo glukoze, ki deluje kot vir energije in spodbuja rast gliv preko bakterij. Vse to je pomešano z agar-agarjem, sestavnim delom, ki mu daje pravo konsistenco.

Po drugi strani je agon Sabouraud dekstroza lahko selektiven, če dodamo antibiotike.

Z antibiotiki je še posebej uporaben pri vzorcih ran, odprtih razjed ali katerem koli vzorcu, pri katerem obstaja sum na veliko bakterijsko kontaminacijo.

Najpogosteje uporabljene kombinacije agruma Sabouraud dekstroze z antibiotiki

-Saburaud agar s kloramfenikolom: idealen za obnovo kvasovk in nitastih gliv.

- Sabouraud agar z gentamicinom in kloramfenikolom: skoraj vse nitaste glive in kvasovke rastejo v tem mediju in zavira veliko število bakterij, vključno z enterobacteriaceae, Pseudomonas in stafilokokom.

- Sabouraud agar s cikloheksimidom: je še posebej uporaben za vzorce s kože ali dihal, če so sum dimorfne glive.

Cikloheksimid je treba uporabljati previdno; Čeprav se uporablja za zaviranje rasti nepatogenih ali okoljskih gliv in kvasovk, ki so lahko prisotne kot kontaminanti v vzorcu, pa zavira tudi rast nekaterih gliv, kot so Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp in druge oportunistične glive.

- Sabouraud agar s kloramfenikolom in cikloheksimidom: uporablja se predvsem za izolacijo dermatofitov in dimorfnih gliv. Pomanjkljivost je, da zavira nekatere vrste oportunističnih gliv, kot so Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes ali C. neoformans.

- Sabouraudov agar s kloramfenikolom, streptomicinom, penicilinom G in cikloheksimidom: idealen je za vzorce, izjemno onesnažene z bakterijami in saprofitnimi glivami, vendar ima slabost, ker poleg zgoraj omenjenih oportunističnih gliv zavira rast.

Priprava

Če imate sestavine ločeno, jih lahko pripravite na naslednji način:

Sabouraud dekstrozni agar

Tehtati:

- 40 gr dekstroze

- 10 g peptona

- 15 gr agar-agarja

- Izmerite 1000 ml destilirane vode

Vse sestavine zmešamo, pH prilagodimo na 5,6. Topila se raztopijo z vretjem, 20 ml medija se porazdeli v epruvete 25 x 150 mm, brez platišča in po možnosti z bombažno kapo.

Cevi z bombažno kapo. Vir: Fotografijo avtor mag. Marielsa gil

Uporabite lahko tudi druge velikosti cevi, odvisno od razpoložljivosti.

V atmosferskem tlaku (121 ° C) jih 10 minut samodejno klaviramo. Časa samoklaviranja ne bi smeli prekoračiti. Ko zapustite avtoklavo, so cevi nagnjene s pomočjo podpore, dokler se ne strdijo v kljuni piščali.

Drugi način je, da sestavine raztopimo s segrevanjem, dokler ne zavre. Avtoklavirajte 10 minut v isti viali in nato razdelite 20 ml v petrijeve posode.

Če imate gojišče agruma Sabouraud dekstroze, ki že vsebuje vse sestavine, nadaljujte s tehtanjem količine, ki jo je določil komercialno podjetje za en liter vode. Preostali koraki so enaki zgoraj opisanim.

Dekstrozni agar Sabouraud (modifikacija Emmons)

Tehtati:

- 20 gr dekstroze

- 10 g peptona

- 17 gr agar-agarja

- Izmerite 1000 ml destilirane vode

Vse sestavine zmešamo, pH nastavimo na 6,9. Nadaljujte enako kot prejšnji primer.

Obstajajo komercialne hiše, ki ponujajo medij z vsemi sestavinami. V tem primeru stehtajte in pripravite, kot je opisano na vložku.

Sabouraud dekstrozni agar (modifikacija Emmons) s kloramfenikolom

Zaloga kloramfenikola

- Odmerimo 500 mg kloramfenikolne osnove

- Izmerite 100 ml 95% etanola

- Premešaj

Gojišče agruma sabouraud dekstroze (Emmons) se pripravi na način, opisan prej, poleg tega se vsakemu litru medija doda 10 ml osnovne raztopine kloramfenikola pred avtoklaviranjem.

Sabouraud Emmons Dekstroza Agar s cikloheksimidom

Zaloga raztopine cikloheksimida

- Natehtamo 5 gr cikloheksimida

- Izmerite 100 ml acetona

- Premešaj

Gojišče agarja Sabouraud dekstroze (Emmons) se pripravi na način, ki je že opisan, poleg tega pa se na vsak liter medija doda 10 ml osnovne raztopine cikloheksimida pred avtoklaviranjem.

Agar saksturov dekstroza (Emmons) s kloramfenikolom in cikloheksimidom

Medij agarja Sabouraud dekstroze (Emmons) pripravimo kot je že opisano, poleg tega pa dodamo 10 ml osnovne raztopine kloramfenikola in 10 ml osnovne raztopine cikloheksimida pred avtoklaviranjem.

Drugi antibiotiki, ki se jih lahko doda

20.000 do 60.000 enot penicilina na liter gojišča.

30 mg streptomicina na liter medija.

Oboje je treba vgraditi po avtomatiziranju, rahlo ohlajenem (50-55 ° C).

0,04 g neomicina na liter gojišča.

0,04 g gentamicina na liter gojišča.

Posebni premisleki

Zaradi varnosti je bolje, da se agroz Sabouraud dekstroze seja v klinasto oblikovane cevi (nagnjene v kljunasto pištolo), ne pa v petrijeve posode, da se prepreči razprševanje in vdihavanje spore.

Pomembno je, da so epruvete agarja Sabouraud obložene z bombažem in ne z vijačnim pokrovčkom, saj je bilo dokazano, da pol-anaerobni pogoji v nekaterih sevih zavirajo nastajanje spore, na primer Coccidioides immitis. Tudi večina gliv je aerobnih.

V primeru uporabe vijačne kapice ne zapirajte hermetično.

QA

Pripravljeni medij mora biti pod nadzorom kakovosti, da se preveri njegovo pravilno delovanje. Za to so posejani določeni kontrolni sevi.

Za Sabouraud dekstrozni agar s kloramfenikolom se lahko uporabljajo sevi ATCC Candida albicans, ki morajo imeti odlično rast. Druga plošča je inokulirana s sevi Escherichia coli, ki jih je treba popolnoma zavreti.

Inkubira se tudi neinokulirana plošča, v kateri ne smejo rasti mikroorganizmi.

Sevi trichophyton mentagrophytes se lahko uporabljajo za agar Sabouraud dekstroze s kloramfenikolom in cikloheksimidom, ki bi se morali dobro razvijati. Druga plošča je inokulirana s sevom Aspergillus flavus, v katerem mora biti malo ali nič rasti. Poleg tega se inkunira neinokulirana plošča, da se pokaže njena sterilnost.

Za agon dekstroze Sabouraud s cikloheksimidom se uporabljajo sevi Candida albicans, Trichophyton rubrum ali Microsporum canis, ki morajo pokazati dobro rast.

Prav tako je vključen sev bakterije Aspergillus flavus, ki kaže malo ali nič rasti. Končno inkubirajte neokrnjeno ploščo za nadzor sterilnosti.

Prijave

Primarna kultura

Klasični agar Sakouraud dekstroze vsebuje 4 grame dekstroze in je odličen kot primarni izolacijski medij, saj kaže na značilno morfologijo vsake glive.

Odličen je tudi za prikaz proizvodnje pigmentov. Vendar to ni najboljše sredstvo za opazovanje sporalacije.

Prav tako se ne priporoča za gojenje Blastomyces dermatitidis, ki ga zavira visoka koncentracija glukoze.

Po drugi strani pa je treba za gojenje upoštevati določene vidike.

Nekatere glive najbolje uspevajo pri sobni temperaturi, kot so plesni, druge uspešno uspevajo pri 37 ° C, na primer nekateri kvasovke, tretje pa lahko rastejo pri obeh temperaturah (dimorfne glive).

Iz tega razloga je včasih treba uporabiti več plošč Sabouraud agar za isti vzorec, saj se dvojno seme pogosto opravi za inkubacijo ene plošče pri sobni temperaturi in druge pri 37 ° C.

Sporothrix schenckii je na primer posejan v dveh ploščah; eno inkubiramo pri sobni temperaturi, da dobimo fazo plesni, drugo pa inkubiramo pri 37 ° C, da dobimo fazo kvasovk, pri slednji pa je potrebno v medij dodati 5% krvi.

V drugih primerih, na primer vzorce micetoma, sejemo dve ploščici agarja Sabouraud, ena s kloramfenikolom, druga pa s cikloheksimidom. Prvi bo omogočil rast povzročiteljev micetomov glivičnega izvora (Eumycetoma), drugi povzročitelji micetom bakterijskega izvora, kot so aktinomicecetomi.

Sporalacija

Emmonsov modificirani Sakouraud dekstrozni agar vsebuje 2 grama dekstroze in se ne uporablja samo za izolacijo, temveč tudi za sporulacijo in ohranjanje gliv.

V tem mediju je mogoče obnoviti sevov vrste Blastomyces dermatitidis.

Ohranjanje

Za ohranitev gobskih kultur jih lahko hranimo v hladilniku (2-8 ° C). Čas hranjenja se lahko razlikuje od 2 do 8 tednov. Po tem času jih je treba subkultivirati, da ponavljajo postopek.

Nekatere glive se najbolje obdržijo pri sobni temperaturi, kot so Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum in Microsporum audounii.

Vzdrževanje seva je mogoče podaljšati, da se prepreči pleomorfizem, če se dekstroza popolnoma odstrani iz agarja in če se količina agarja v gojišču zmanjša, da se prepreči suhost.

Mikrokulture

Za identifikacijo nekaterih nitastih gliv je potrebno izvajati mikrokulture s agarjem Sabouraud ali drugimi posebnimi sredstvi za opazovanje struktur spolne in aseksualne reprodukcije.

V človeški mikologiji

Uporablja se predvsem za diagnosticiranje glivičnih bolezni, zlasti tistih, ki prizadenejo kožo in njene priloge (lase in nohte).

Vzorci so lahko izločki, eksudati, koža, lasje, nohti, sputum, CSF ali urin. Pogosto izolirani patogeni so dermatofiti, glive, ki povzročajo podkožne in sistemske mikoze.

Živalska mikologija

Živali pogosto trpijo zaradi glivičnih okužb, zato je agar Sabouraud enako koristen v živalski mikologiji kot pri ljudeh.

Na primer, dermatofiti lahko pogosto vplivajo na živali. Tak primer je Microsporum canis var distortum, ki pogosto okuži pse, mačke, konje, prašiče in opice. Prav tako Microsporum gypseum okuži pse, mačke in živino.

Ptice, kot so kokoši, petelini in piščanci, prizadenejo Microsporum gallinae.

Tudi druge glive, kot je Zymonema farciminosum, so vzrok bolezni pri živalih, predvsem pri konjih, mulah in oslih, ki povzročajo pomembno vnetje v limfnih žilah.

Sporothrix schenkii in Histoplasma capsulatum vplivajo na domače živali in ljudi.

Okoljska mikologija

Številne patogene ali oportunistične glive se lahko kadar koli koncentrirajo v danem okolju, zlasti v operacijskih dvoranah in oddelkih intenzivne nege klinik in bolnišnic. Zato je treba nad njimi nadzorovati.

Drugi ranljivi prostori so knjižnice in stare zgradbe, na katere lahko vpliva koncentracija okoljskih gliv.

V okoljskih študijah se za izolacijo gliv uporablja agar Sabouraud dekstroza.

Industrijska mikologija

Dekstrozni agar Sabouraud med drugim ne bi smel izostati za preučevanje okuženih gliv pri proizvodnji kozmetike, hrane, pijač, usnja, tekstila.

Mikologija rastlin

Rastline trpijo tudi zaradi bolezni, ki jih povzročajo glive in prizadenejo različne dele rastline, kar lahko celo konča letino in povzroči velike izgube v kmetijstvu.

Reference

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mikrobiološka diagnoza mikoz in študij protiglivične občutljivosti. Priporočila španskega društva za nalezljive bolezni in klinično mikrobiologijo. Dostopno na: coesant-seimc.org
2. ValteK Laboratorij. (2009). Sabouraud dekstrozni agar s cikloheksimidom. Dostopno na: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). Veterinarska mikologija. Nacionalna agrarna univerza. Nikaragva.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. Splošna mikologija. 1994. Druga izdaja osrednje univerze v Venezueli, izdaje knjižnic. Venezuela Caracas.