KROMPIRJEV DEKSTROZNI AGAR: UTEMELJITEV, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Krompirjev dekstrozni agar je medij, trdno snov ne - selektivna kultura hranil. V njej lahko rastejo bakterijske in glivične vrste, vendar je njegova uporaba še posebej indicirana za izolacijo nitastih gliv in kvasovk. Poznan je tudi kot medij PDA za angleški izraz Potato Dextrose Agar.

Še posebej uporabna je za izolacijo fitopatogenih gliv, torej tistih, ki vplivajo na rastline. Za setev vzorcev iz okužene zelenjave lahko uporabimo druga sredstva, kot sta agar Sabouraud ali malta-agar, vendar je za rutinsko uporabo prednostni krompirjev dekstrozni agar, saj dobimo večjo sporulacijo.

Aspergillus niger in Sinemas na agarju krompirjeve dekstroze. Vir: Alextrevelian 006 v angleški Wikipediji / Joselrojas

Uporablja se tudi za štetje glivičnih kolonij v vzorcih kozmetike, farmacevtskih izdelkov in nekaterih mlečnih živil. Prav tako je primeren za sejanje vzorcev ostankov kože v iskanju dermatofitov, ki v tem mediju zelo dobro rastejo in razvijajo svoje značilne pigmente.

Gojišče krompirjeve dekstroze je zelo enostavno in enostavno sredstvo za pripravo v laboratoriju. Vsebuje, kot že ime pove, infuzijo krompirja, dekstroze in agar-agarja. Poleg tega lahko dodamo zaviralne snovi, da preprečimo rast bakterij in povečate selektivnost za glivične vrste.

Osnove

Krompirjev dekstrozni agar je gojišče, ki zagotavlja prehranske elemente, potrebne za razvoj nitastih gliv in kvasovk.

Kombinacija infuzije krompirja z glukozo zagotavlja popoln vir energije za zadovoljivo rast gliv. Medtem ko je agar tisti, ki daje konsistenco mediju.

Sam medij ne zavira rasti bakterij, zato je neselektivno gojišče. Da bi bil selektiven, potrebuje dodajanje zaviralnih snovi, kot so vinska kislina ali antibiotiki.

Priprava

- Domača (nekomercialna) priprava agarja krompirjeve dekstroze

Petrijeve jedi

Pripravljen je na naslednji način:

V prvi vrsti krompir zelo dobro operemo in tako odstranimo zemljo, ki jo ima. Narežemo jih na tanke rezine z vsem in lupino. 200 gramov krompirja stehtamo in kuhamo v litru destilirane vode pol ure.

Ob koncu časa filtrirajte ali odcedite ves pripravek skozi gazo.

Dobljena tekočina se dopolni z destilirano vodo do enega litra. Infuziji dodamo 20 g agar-agarja in 20 g dekstroze, dobro premešamo in avtoklaviramo pri 121 ° C pri 15 kilogramov tlaka 15 minut.

Pustimo, da se ohladi na 50 ° C in postrežemo v sterilni petrijevi posodi. Pripravljene krožnike hranimo v hladilniku.

Klini

Pripravimo lahko tudi klini iz krompirjevega dekstroznega agarja.

V tem primeru pred sterilizacijo v avtoklavu odmerimo 12 do 15 ml gojišča v epruvete, kasneje jih avtoklaviramo in ob odhodu ležimo na posebnih nosilcih, dokler se ne strdi. Shranjujte v hladilniku.

Medij ostane pri pH 5,6 ± 0,2, vendar nekateri laboratoriji dodajo 10% vinske kisline, da znižajo pH na 3,1 ± 0,1, da zavirajo rast bakterij.

V tem istem smislu drugi laboratoriji raje dodajo antibiotike, da postanejo selektivni za gojenje gliv in preprečijo rast bakterij.

-Komercialna priprava agarja krompirjevega dekstroze

Odtehtamo 39 g komercialno razpoložljivega dehidriranega medija in ga raztopimo v enem litru destilirane vode. Pustite počivati ​​5 minut.

Zmes segrevamo ob pogostem mešanju, dokler se popolnoma ne raztopi. Nato se sterilizira v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut.

Plošče ali klini se lahko pripravijo. Nadaljujte, kot je opisano zgoraj.

PH ostane pri 5,6 ± 0,2. Če je pH vrednost 3,1, je treba pred serviranjem na krožnike dodati 14 ml sterilne 20% vinske kisline.

Surov medij je bež, pripravljen medij pa svetlo rumen, z rahlo motenim ali opalescentnim videzom.

Prijave

Postopek za setev rastlinskih vzorcev na agar krompirjeve dekstroze

-Za obarvane liste

Liste narežemo na koščke.

V kozarec s 50% alkohola položite koščke listov (obarvane in zdrave koščke), da površino razkužite 20 do 30 sekund. Odvrzite alkohol in dodajte 20% natrijev hipoklorit 40 do 50 sekund, če so tanki listi, in povečajte čas na 80 sekund, če je lubje in hlodovina.

Natrijev hipoklorit zavrzite in razkužene koščke vzemite s sterilnimi pincetami in jih položite na površino medija (največ 10 kosov). Datum nastavite in inkubirajte na 20-30 ° C.

-Za sadje in gomolje

Če je sadež mesnat, odprite plod, ki ga je gliva prizadela, in s sterilnim skalpelom odvzemite koščke tako obolelih kot zdravih delov in jih položite na površino agarja.

Če je sadež citrus, na primer limona ali pomaranča, ga je treba odpreti in posejati semena.

Kadar je površina plodov prizadeta in opazimo spore, je idealno, da uporabimo metodo reševanja na plošči; To sestoji iz dotika sporov s sterilizirano in ohlajeno lopatico v obliki črke L in nato 2 do 3-krat naredite cikcak na agaru.

-Za zrna

Dezinficirajo se, kot je opisano v listih, pozneje pa jih položijo na agar.

-Za veje in stebla

Lubje se strga in pozneje se koščki zdravega in obolelega dela odvzamejo in posejejo neposredno na agar.

Semene plošče 72 ur inkubiramo aerobno pri 20-30 ° C.

Postopek za sejanje vzorcev kože, las ali nohtov na agarju krompirjeve dekstroze

Vzorčenje je treba opraviti z rezilom skalpela št. 11, bodisi za rezanje prizadetih las, kožnih lusk ali nohtov v iskanju dermatofitov. Pred odvzemom vzorca je treba območje razkužiti s 70% alkohola.

-Vzorec kože

Pri luskastih lezijah je treba rob lezije strgati, saj je gliva tam bolj verjetno.

Pri eksudativnih lezijah se vzorec odvzame s suhim ali mokrim brisom. Takoj sejte na agar krompirjeve dekstroze ali agar Sabouraud. Izogibajte se prevoznim sredstvom.

Druga metoda vzorčenja je skozi tehniko preprog preprog Mariat in Adan Campos. V tem primeru prizadeto območje podrgnemo 5-krat s kosom sterilne volne za nadaljnjo gojenje.

Vzorec se lahko da neposredno v gojišče.

-Vzorec dlake

Glede na patologijo lahko prizadeti del odrežemo ali izkoreninimo. Vzorec damo v gojišče.

-Vzorec nohta

Določen del prizadetega nohta se lahko strga ali reže. Odvisno bo od vrste poškodbe.

Pred setvijo vzorec razrežite na 1 mm, da povečate verjetnost stika glive s gojiščem.

Postopek identifikacije

Kolonije, ki jih dobimo na plošči, izoliramo v epruvetah, ki vsebujejo krompirjev dekstrozni agar, za izvajanje makroskopske študije kolonij (videz, barva, doslednost, stopnja razvoja.

Mikroskopska študija (opazovanje struktur in njihovih tvorb) se lahko izvede z mikrokulturami ali z neposrednim opazovanjem pod mikroskopom med drsnikom in drsnikom.

Štetje kolonij

Ta medij se lahko uporablja tudi za določanje glivične in kvasne obremenitve, ki je prisotna v vzorcih rastlin, hrane, kozmetike ali zdravil. V ta namen se uporablja krompirjev dekstrozni agar, dopolnjen z antibiotiki, kot so: (kloramfenikol, klorotetraciklin ali oboje).

V sterilno in prazno Petrijevo posodo vlijemo 1 ml vzorca - po možnosti razredčenega, nato stopimo blazinico krompirjevega agonja dekstroze in pustimo, da se ohladi na 45 ° C. Nalijte na Petrijevo posodo in zavrtite, dokler ni homogenizirana. Pustite počivati, dokler se ne strdi.

Inkubirajte aerobno pri 20-25 ° C (plesni) ali 30-32 ° C (kvas) 5 do 7 dni ali več, odvisno od vrste glive in vrste vzorca. Za inkubacijo v obeh temperaturnih območjih lahko uporabimo dve plošči.

Štetje glivičnih kolonij v vzorcu hrane. Krompirjev dekstrozni agar, dopolnjen z antibiotiki. Vir: Pxhere.com photo / 777267

Vzdrževanje glivičnih sevov

Krompir Dekstroza Agar se lahko uporablja za ohranjanje sposobnih glivičnih sevov več let.

V ta namen se goba goji na klinih agarja krompirjeve dekstroze in ko gliva zraste, jo prekrijemo z mineralnim oljem. Olje je treba sterilizirati v avtoklavu 45 minut in imeti viskoznost od približno 300 do 330 Saybolt. Olje naj bo od 1 do 2 cm nad vrhom poskoka.

QA

Iz vsake pripravljene šarže vzemite 1 ali 2 plošč in jih 48 ur inkubirajte pri 25 ° C ali 96 ur pri 20 ° C. Dober nadzor sterilnosti je tisti, pri katerem razvoja kolonije ne opazimo.

Lahko se uporabljajo tudi znani ali certificirani kontrolni sevi, kot so:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. V vseh primerih se pričakuje dobra rast.

Reference

1. Britannia Laboratories. Krompir z glukoznim agarjem. 2015. Dostopno na: britanialab.com
2. Neogen Laboratories. Agar krompirjevega dekstroze Dostopno na: foodsafety.neogen.com
3. Insumolab Laboratorij. Krompirjev dekstrozni agar. Dostopno na: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
5. Casas-Rincón G. Splošna mikologija. 1994. Druga izdaja osrednje univerze v Venezueli, izdaje knjižnic. Venezuela Caracas.
6. Aceituno M. Vrednotenje mikrobiološke kakovosti v senčilih, kompaktni prašek nacionalnega proizvodnega laboratorija, v skladu z referenčno metodo Pharmacopea Usp 2005. Naloga za pridobitev naziva farmacevtski kemik. Univerza San Carlos v Gvatemali.
7. Cuétara M. Obdelava površinskih vzorcev. Iberoamerican Journal of Mycology. 2007; pp 1-12