HRANILNI AGAR: UTEMELJITEV, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Hranilni agar je neselektivna medij in ne razlika trdne kulture. V tem mediju rastejo vse vrste bakterij, ki s prehranskega vidika niso zahtevne.

Je preprost medij in kljub svojemu imenu vsebuje nižjo prehransko vrednost v primerjavi z drugimi podobnimi mediji, kot sta Brain Heart Infusion Agar ali Trypticase Soy Agar.

Kolonije računajo na hranilni agar

Njegova uporabnost v laboratoriju je zelo raznolika. Uporablja se predvsem za subkultiviranje vrst, vzdrževanje sevov, štetje kolonij, kot osnova za pripravo krvnega agarja.

Prav tako se lahko zaradi svoje svetlo bež barve izjemno razlikuje proizvodnja pigmentov, ki jih ustvarjajo nekateri bakterijski sevi, na primer zelenkast pigment Pseudomonas aeruginosa, opečno rdeč pigment, ki ga pri sobni temperaturi proizvaja Serratia marcescens, zlato rumen pigment stafilokoka aureus, med drugimi.

Poleg tega je eden najcenejših rastočih medijev, ki jih najdemo na trgu.

Osnove

Kot smo že omenili, gre za zelo enostaven medij, ki se zanaša na zagotavljanje hranil za rast bakterij brez omejitev in brez kompleksnih reakcij za razlago.

Ker je medij prosojen, je idealen za štetje kolonij po metodi globinskega sejanja.

Sestava

Sestavljajo ga predvsem iz izvlečka mesa ali izvlečka kvasa, peptonov ali želatinske prebavila trebušne slinavke, agar-agarja, natrijevega klorida in destilirane vode.

Mesni ali kvasni ekstrakt in peptoni predstavljajo bistvene vire ogljika in mineralov (dušik, fosfor in žveplo), ki jih bodo bakterije uporabljale kot vir energije in rastnih dejavnikov.

Prav tako je agar-agar osnova vseh trdnih kulturnih medijev, ki je nadomestil želatino, kar je bila prva bazna spojina, ki jo je Robert Koch uporabil za trdno doslednost svojih medijev.

Agar je polisaharid, sestavljen iz galaktoze, galaktomannana, agaroze in agaropektina. Nastavi se pri 40 ° C in se topi blizu 100 ° C.

Natrijev klorid ima medij osmolarnost, potrebno za razvoj bakterij.

Končno voda služi za hidracijo in raztapljanje liofiliziranih spojin. Uporabiti je treba destilirano vodo, prilagojeno nevtralnemu pH. Voda iz pipe ne smete uporabljati, ker vsebuje kalcij in magnezij, ki lahko reagirajo s fosfati v mediju in tvorijo netopne soli.

Priprava

Za en liter hranilnega agarja je treba stehtati 31 g dehidriranega medija. Postavite ga v bučko in raztopite v litru destilirane vode. Po 5 minutah stojanja segrejte nad vročinskim virom in nenehno mešajte do vrelišča 1 ali 2 minuti.

Priprava gojišča.

Bučko nato damo v avtoklav in steriliziramo pri 121 ° C 20 minut.

Sterilizacija v avtoklavu

Na koncu ga odstranimo iz avtoklava in postrežemo v sterilni Petrijevi posodi s pomočjo laminarne pretočne nape ali gorilnika Bunsen.

Če so Petrijeve posode za enkratno uporabo (plastične), je treba medij porazdeliti, ko ima agar temperaturo približno 50 ° C, da se prepreči, da bi se preoblikovali pri prekomerni vročini.

Pustite, da se strdi, in shranite na obrnjeno držalo plošče in do uporabe v hladilniku pri 2-8 ° C.

Plošče je treba pred setvijo kaljeti. Plošče s hranilnimi agarji se ne smejo uporabljati, če so onesnažene ali dehidrirane.

PH pripravljenega medija mora biti prilagojen na 7,3 ± 0,2.

Prijave

Je najpreprostejši kulturni medij, ki se uporablja v mikrobiološkem laboratoriju. Njegova formulacija je odlična za rast nezahtevnih bakterij.

Njegove glavne uporabe so razložene spodaj:

Kot osnova za pripravo krvnega agarja

Ta medij se včasih uporablja kot osnova za pripravo krvnega agarja, vendar ni najpogosteje uporabljena baza.

Stimulirajte sporulacijo bakterij, ki tvorijo spore

To gojišče je še posebej uporabno za spodbujanje sporelacije bakterij, ki tvorijo spore, kot je Bacillus sp.

Za to sev rodu Bacillus posejemo in inkubiramo 24 ur pri 37 ° C v aerobiozi. Ko kolonije rastejo, se plošča podvrže temperaturnemu stresu, to pomeni, da se temperatura v pečici poveča na 44 ° C in pusti nadaljnjih 24 ur ali pa se postavi v hladilnik za 24 ur.

Na koncu se naredijo razmazi kulture in obarvajo z ostanki Grama ali s sporom Shaeffer-Fulton. V njih bomo opazili bacile z endospori (spore znotraj bacila) in eksospore (spore zunaj bacila).

Vzdrževanje sevov

Nekateri raziskovalni ali univerzitetni podporni laboratoriji potrebujejo čim dlje vzdrževanje sposobnih bakterij kliničnega pomena, da se banka bakterij (bakterioteka) uporabi za raziskovalno delo ali za pripravo učnih praks, kadar Študenti se bodo naučili manipulirati in prepoznati te mikroorganizme.

V ta namen lahko uporabimo hranilni agar in agar za infuzijo možganov. Agar se pripravi, vlije v epruvete z bakelitnim pokrovom in nagne na podlago tako, da se agar strdi, tvori blok na dnu in kolobar na površini (piščal).

Vsaka epruveta je označena z imenom bakterij, ki jih je treba sejati, in datumom. Vsaka od bakterij se bo sejala na okvir in jo inkubirala 24 ur. Ko kolonije zrastejo, epruvete shranimo pri sobni temperaturi.

Bakterioteko je treba obnoviti od 1 do 3 mesece, da se prepreči kontaminacija in dehidracija medija in pa tudi smrt bakterij.

Na ta način je mogoče vzdrževati samo ne izbirčne bakterije.

Štetje kolonij

Čeprav obstajajo specializirana sredstva za štetje kolonij, kot je standardni števni agar, se lahko v ta namen uporabi hranilni agar bodisi s površinskim setvijo z drigalski lopatico ali po globini. Zaradi tega je zelo koristna pri mikrobioloških analizah hrane in vode.

Izvajanje diagnostičnih testov

Ker gre za medij, ki ne vsebuje krvi ali drugih dodatkov, je idealen za jemanje kolonij, gojenih na tem mediju, za izvajanje katalaznega testa.

Prav tako je zaradi njegove svetle barve indicirano, da izvaja preskuse oksidaze neposredno na območju zasajenega agarja brez motenj.

Izterjava mezofilnih aerobov iz rekreativnih slanih voda (Plaže)

Hranilni agar, pripravljen z 10% morske vode, je uporaben za ocenjevanje mezofilnih aerobov v plažnih vodah.

Na ta način je mogoče oceniti resnično stopnjo onesnaženosti, ki jo imajo vode s temi mikroorganizmi, saj se pri tej vrsti vzorcev rezultati prekrivajo, kadar se uporabljajo kulturni mediji, pripravljeni na običajen način.

To so dokazali Cortez in sod. leta 2013 v raziskovalnem delu.

To je mogoče razložiti zaradi nenadne spremembe, ki jo bakterije doživljajo, ko preidejo iz hipersoliranega okolja v okolje z malo soli, zato mikroorganizmi vstopijo v stanje letargije, v kateri so sposobni preživeti, vendar jih ni mogoče obdelati.

Reference

1. "Hranilni agar." Wikipedija, prosta enciklopedija. 13. september 2016, 20:33 UTC 29. dec 2018, 21:04 en.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Vpliv kulturnih medijev, pripravljenih z morsko vodo, na zdravstvene kazalce v morskih vodah zdravilišč v Chichiriviche, država Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122–128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M in Cardoso M. Mikrobiološka kakovost vode za osemenjevalne odmerke za prašiče. Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42–49.
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinična mikrobiologija. University of Cadiz, 2. izdaja UCA Služba za publikacije.