MACCONKEY AGAR: UTEMELJITEV, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Agar MacConkey je trdna medij, ki omogoča izključno izolacijo Gram negativnih bakterij. Zaradi tega je selektivni medij in omogoča tudi razlikovanje med laktozno fermentacijo in ne fermentirajočimi bacili, zaradi česar je različen medij. Je eden najpogosteje uporabljenih kulturnih medijev v mikrobiološkem laboratoriju.

Ta medij se uporablja predvsem za izolacijo gram-negativnih bacilov iz družine Enterobacteriaceae, vključno z oportunističnimi in enteropatogenimi vrstami.

MacConkey agar je posejan z dvema vrstama bakterij. Leve stranske kolonije fermentacije laktoze, desne stranske ne-laktozne fermentacijske kolonije.

Uporablja se lahko tudi za izolacijo drugih enteričnih bacilov, ki živijo v prebavilih, vendar ne spadajo med Enterobacteriaceae, kot so Aeromonas sp, Plesiomonas sp.

Končno lahko izolira druge gram-negativne bacile, ki ne fermentirajo glukozo, ki jih najdemo v okolju, vodi ali tleh, včasih pa so to lahko oportunistični patogeni, kot so Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, med drugimi.

Osnove

MacConkey agar

Temelj tega medija je mogoče razložiti z opisom njegovih sestavnih delov, saj ima vsak svoj namen, ki določa njegovo lastnost.

Žolčne soli in kristalno vijolično

V tem smislu ima agar MacConkey kompleksno sestavo. Najprej vsebuje žolčne soli in kristalno vijolično.

Ti elementi so odgovorni za zaviranje rasti gram-pozitivnih bakterij in nekaterih pronicljivih Gram negativnih bacilov. Po drugi strani daje prednost razvoju gram-negativnih bacilov, na katere te snovi ne vplivajo. Zato je selektivni medij.

V primerjavi z drugimi mediji, ki prav tako zavirajo rast grampozitivnih bakterij in večine gram-negativnih bakterij, naj bi bilo rahlo selektivno.

Peptoni, polipektoni in laktoza

Vsebuje snovi, ki mikroorganizmom, ki se razvijejo v tem okolju, zagotavljajo potrebna hranila, kot so peptoni, polipektoni in laktoza.

Laktoza je ključna točka, da je medij diferencialno, saj mikroorganizmi, ki lahko fermentirajo laktozo, razvijejo močne roza kolonije.

Nekatere bakterije lahko počasi ali šibko fermentirajo laktozo in razvijejo bledo roza kolonije in ostanejo laktozno pozitivne.

Tisti, ki ne fermentirajo laktoze, uporabljajo peptone kot vir energije, proizvajajo amoniak, alkalizirajo medij. Zaradi tega so kolonije, ki izvirajo, brezbarvne ali prozorne.

Indikator PH

Spremembo barve dosežemo z drugo bistveno sestavino, ki jo ima agar MacConkey. Ta spojina je indikator pH, ki je v tem primeru nevtralno rdeč.

Fermentacija laktoze povzroči nastajanje mešanih kislin. Medij zakisajo do pH pod 6,8.

Zaradi tega se indikator pH obrne proti globoko roza odtenku. Intenzivnost barve se lahko razlikuje glede na končni pH.

Destilirana voda, natrijev klorid in agar

Po drugi strani vsebuje destilirano vodo in natrijev klorid, ki dajeta srednje hidratacijo in osmotsko ravnovesje. Končno medij vsebuje agar, ki je osnova, ki zagotavlja konsistenco trdnega medija.

Pripravljen medij MacConkey agarja mora imeti končni pH prilagojen na 7,1 ± 0,2.

Priprava

Za en liter MacConkey agarja je treba stehtati 50 g dehidriranega medija, nato ga dati v bučko in raztopiti v enem litru destilirane vode. Po 10 minutah stajanja segrevamo, neprestano mešamo do vrenja 1 minuto.

Bučko nato damo v avtoklav in steriliziramo pri 121 ° C 20 minut. Po koncu časa ga odstranimo iz avtoklava in pustimo, da se ohladi, dokler ne dosežemo temperature 45 ° C, da bi kasneje postregli v sterilnih Petrijevih posodah znotraj laminarne nape ali pred gorilnikom Bunsen.

Pustite, da se strdi, in shranite v obrnjeno držalo za ploščo in do uporabe v hladilniku hladite pri 2-8 ° C.

Za pridobitev agarja MacConkey, ki zavira učinek rojstva, ki ga povzroča rod Proteus, se uporablja nizko-solni agar MacConkey.

Uporaba običajnega MacConkey agarja

MacConkey Agar je vključen v vse komplete kulturnih medijev, ki so urejeni za setev kliničnih vzorcev, prejetih v laboratoriju. Uporabna je tudi v mikrobiologiji hrane in mikrobiologiji okolja.

Raznolikost gram-negativnih palic, ki rastejo v tem mediju, izraža fenotipske lastnosti, ki pomagajo pri postavitvi domnevne diagnoze zadevne vrste. Na primer velikost, barva, konsistenca in vonj kolonij so nekatere lastnosti, ki lahko vodijo.

V tem mediju vrste Escherichia coli, Klebsiella sp in Enterobacter sp proizvajajo močne rožnate kolonije, obdane z območjem oborjenega žolča.

Medtem ko so bakterije, kot so Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp in Hafnia sp, lahko po 24 urah videti brezbarvne ali bledo roza v 24 -48 urah.

Prav tako rodovi Proteus, Edwadsiella, Salmonella in Shigella proizvajajo brezbarvne ali prozorne kolonije.

Druge različice agarja MacConkey

Obstajajo tudi druge različice MacConkey Agar, ki imajo posebne namene. Spodaj so omenjeni:

MacConkey agar s sorbitolom

Ta medij je bil zasnovan tako, da je razlikoval enteropatogeni sev (enterohemorrhagic Escherichia coli O157: H7) od preostalih sevov Escherichia coli.

Ta medij izmenjuje ogljikove hidrate laktozo za sorbitol. Enterohemoragični sevi E. coli O157: H7 se od preostalih razlikujejo po tem, da ne fermentirajo sorbitola in zato dobijo prozorne kolonije, preostali sevi E. coli pa fermentirajo sorbitol in kolonije so močno rožnate.

MacConkey agar brez kristalno vijolične, niti soli

Ta agar se močno razlikuje od klasičnega MacConkey agarja, saj nima vijoličnega kristala in lahko rastejo Gram pozitivne bakterije.

Po drugi strani odsotnost soli zavira pojav roja na agarju, ki ga proizvajajo nekateri enterični bacili, kot so rodovi Proteus, in tako olajša izolacijo vseh prisotnih bakterij, vključno z grammy pozitivnimi bakterijami.

MacConkey agar s cefoperazonom

Ta različica agarja MacConkey je bila zasnovana za prvotno izolacijo Laribacter hongkongensis, kasneje pa je bilo ugotovljeno, da je uporabna za izolacijo Arcobacter butzleri. Obe sta rahlo ukrivljeni Gram negativni palici, odporni na cefoperazon.

Te bakterije so pred kratkim povezane pri povzročanju gastroenteritisa in diareji pri azijskih in evropskih osebah, ki se pojavljajo kot dva močna nastajajoča patogena.

Antibiotik omogoča zaviranje spremljajoče flore prebavil, kar daje prednost razvoju teh bakterij in jim preprečuje, da bi ostali neopaženi, saj za rast potrebujejo 72 ur.

MacConkey agar, pripravljen z morsko vodo pri 10% v / v

Ta varianta je uporabna za oceno bakterijskih sanitarnih kazalcev onesnaženosti s fekalijami, vključno s skupnimi koliformami in fekalnimi koliformami v rekreativnih slanih vodah (plažah in zalivih).

Cortez in sod. V letu 2013 so pokazali, da tako pripravljen medij znatno poveča obnovo teh mikroorganizmov v fiziološkem okolju v primerjavi z uporabo agarja MacConkey, pripravljenega z destilirano vodo.

To je posledica dejstva, da spremenjen medij spodbuja rast bakterij, ki so fiziološko v latenci "sposobne preživetja, vendar niso kultivirane", zato jih ni mogoče obnoviti v običajnih medijih.

Reference

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT et al. Uporaba cefoperazonskega agarja MacConkey za selektivno izolacijo Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839–41.
2. MacConkey agar. Wikipedija, prosta enciklopedija. 4. april 2018, 18:16 UTC 29. dec 2018, 15:22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Vpliv kulturnih medijev, pripravljenih z morsko vodo, na zdravstvene kazalce v morskih vodah zdravilišč v Chichiriviche, država Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122–128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinična mikrobiologija. University of Cadiz, 2. izdaja UCA Služba za publikacije.