LIA (LIZIN ŽELEZOV) AGAR: TEMELJ, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Agar LIA (Lizin železo) je biokemični preskus za identifikacijo bakterije iz družine enterobakterije. Ta medij sta ustvarila Edwards in Fife, ki temelji na Falkow formuli.

Prvotno je bil ta test juha, ki je vsebovala peptone, izvleček kvasa, glukozo, L-lizin, vijolično bromokresol in destilirano vodo. Edwards in Fife sta dodala agar-agar, železov amonijev citrat in natrijev tiosulfat.

Pozitiven in negativen test za lizarinsko dekarboksilacijo. Vir: Lastnost fotografij in diagramov avtorja mag. Marielsa gil

Test v osnovi obsega dokazovanje prisotnosti encima lizin dekarboksilaze, ki je sposoben reagirati s karboksilno skupino aminokisline L-lizin. Deaminacija aminokisline se lahko pojavi tudi zaradi prisotnosti encima lizin deaminaza.

Poleg tega sestava medija kaže sposobnost nekaterih bakterijskih rodov, da proizvajajo vodikov sulfid. Nazadnje je mogoče opazovati tudi nastajanje ali ne plina v mediju.

Osnove

Peptoni in ekstrakt kvasa

Tako kot večina kulturnih medijev tudi lizin Agar vsebuje sestavine, ki zagotavljajo vir hranil, potrebnih za rast bakterij. Te sestavine predstavljajo peptoni in ekstrakt kvasa.

Glukoza

Prav tako ta agar vsebuje glukozo kot fermentiran ogljikov hidrat. Znano je, da vse bakterije iz družine Enterobacteriaceae fermentirajo glukozo.

Ta korak je ključen, saj bo odgovoren za zakiselitev medija, kar je bistven pogoj, da encim lizin dekarboksilaza, če je prisoten, deluje na njegov substrat.

V nekaterih bakterijskih rodih lahko opazimo proizvodnjo plina zaradi fermentacije glukoze.

Plin je razviden, ko pride do premika agarja v epruveti, pri čemer ostane prazen prostor na dnu epruvete ali z zlomom medija na dva ali več delov.

L-lizin

Ko lizin dekarboksilira, nastaneta diamin (kadverin) in ogljikov dioksid.

Dekarboksilacija se pojavi v prisotnosti koencim piridoksal fosfata. Ta reakcija je nepovratna.

Indikator PH (bromokresol vijolična)

Vse pH vrednosti, ki se pojavljajo v mediju zaradi različnih reakcij, se odkrijejo z vijoličnim indikatorjem pH bromokresola.

V tem smislu se pri nakisanju medij obarva rumeno in se ob alkalizaciji medij vrne v prvotno vijolično ali vijolično barvo.

Ko pride do deaminacije lizina zaradi prisotnosti encima lizin deaminaza, se na površini tvori rdečkasta barva, značilna za rodove Proteus, Providencia in nekatere vrste morganele.

To je posledica dejstva, da med deaminacijo nastaja alfa-keto-ogljikova kislina, ki reagira z amonijevim citratom v prisotnosti kisika, kar povzroči prej omenjeno barvo.

Železov amonijev citrat in natrijev tiosulfat

Po drugi strani pa bakterije, ki proizvajajo vodikov sulfid bo razvidno iz prisotnosti natrijevega tiosulfata (vir žvepla) in železovega amonijevega citrata, ki je razvijalec H ₂ S.

Bakterije, ki imajo encim tiosulfat reduktazo imajo sposobnost, da deluje z zmanjšanjem natrijev tiosulfat darilo, tvori sulfit in vodikov sulfid (H ₂ S).

Slednji je brezbarven plin, ko pa reagira z železovo soljo, tvori železov kovinski sulfid, ki je netopna spojina (vidna črna oborina).

Vendar pa je sposobnost, da se tvori H ₂ S s tem mediju ni zelo zanesljivo, saj nekateri lizin dekarboksilaze negativne bakterije lahko proizvede H ₂ S ne tvori črna oborina, kot kislosti medija posega. Zato je priporočljivo preveriti z drugimi mediji, ki vsebujejo železo.

Interpretacija testa

Dekarboksilacija lizina

Epruvete je treba prebrati po 24 urah inkubacije, sicer obstaja nevarnost napačne razlage reakcije in lažnih negativnosti.

Ne pozabite, da bo prva reakcija fermentacija glukoze, zato bodo vse epruvete po 10 do 12 urah postale rumene.

Če ob koncu inkubacijskega časa (24 ur) opazimo rumeno ozadje z vijolično ali vijolično površino, je reakcija negativna. Vijolična barva površine ustreza alkalizaciji medija z uporabo peptonov.

Pozitivna reakcija je tista, pri kateri sta dno in površina cevi popolnoma vijolična, torej se vrne v prvotno barvo.

Kdor določi pozitivnost testa, je osnova ali ozadje medija. Če dvomite o barvi, ga lahko primerjamo z necepljeno cevjo LIA.

Deaminacija lizina

Epruveta, ki prikazuje razkrojevanje lizina, ima rdečkasto rjavo barvo in rumeno (kislo) ozadje ali celotno cev rdečkasto rjavega.

Ta reakcija se razlaga kot negativna za dekarboksilacijo lizina, pozitivna pa za deaminacijo lizina.

Ta reakcija je opredeljena in razlagana na okvirju.

Proizvodnja vodikovega sulfida (H

Pozitivna reakcija se opazi s pojavom črne oborine v celotnem ali delu medija. Običajno med robom poševnice in podlago.

Če se oborina pojavlja po cevki, ne bo razkrila drugih reakcij, ki se pojavijo na sredini.

Zapis rezultatov

Pri interpretaciji testa se rezultati zapišejo na naslednji način:

Najprej se bere konus, nato dno ali blok, nato proizvodnja H ₂ S in na koncu proizvodnja plina.

Primer: K / A + (-). To pomeni:

• K: Alkalni okvir (vijolična barva)
• O: Kislo ozadje (rumeno), to je negativna reakcija dekarboksilacije in negativno razkrojitev.
• +: Proizvodnja vodikovega sulfida
• (-): Brez plina.

Priprava

Natehtamo 35 g dehidriranega lizina iz železovega agarja in ga raztopimo v enem litru destilirane vode.

Segrevajte, dokler se agar popolnoma ne raztopi, za to pa pustite vreti minuto in pogosto mešajte. Z bombažnimi pokrovčki razdelite 4 ml gojišča v epruvete 13/100.

Sterilizirajte 15 minut v avtoklavu pri 121 ° C. Odstranite iz avtoklava in pustite stati pod kotom, tako da je globoka podlaga in kratek poševni.

Shranjujte v hladilniku 2-8 ° C. Pred setvijo bakterijskega seva pustite, da se ogreje.

Barva dehidriranega medija je bež, pripravljen medij pa je rdečkasto vijoličen.

Končni pH pripravljenega medija je 6,7 ± 0,2

Medij postane rumen pri pH 5,2 ali manj in je vijoličen pri pH 6,5 ali več.

Prijave

Ta test se skupaj z drugimi biokemijskimi preskusi uporablja za identifikacijo bacilov iz družine Enterobacteriaceae.

Medij je posejan z ravno zanko ali iglo, na dnu cevi se naredi en ali dva prebijanja, nato pa se površina medija v cikcaku.

V aerobiozi 24 ur inkubirajte pri 35-37 ° C. Če je potrebno, ga pustimo inkubirati nadaljnjih 24 ur.

Koristno je predvsem za ločevanje na laktozo negativne vrste Citrobacter od Salmonellas sp.

Vir: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.

Reference

1. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testi za identifikacijo bakterij kliničnega pomena. 3. izd. Uredništvo Panamericana. Buenos Aires Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. Lizin železov agar. 2015. Dostopno na: britanialab.com
5. BD Laboratoriji. BBL Lysine Iron Agar Trakovi 2007. Dostopno na: bd.com
6. Valtek Laboratories. Srednja LIA 2009. Dostopno na: andinamedica.com