Agar Hektoen ali Hektoen enterično agar trdnem nosilcu je selektiven in razlika kulture. King and Metzger sta ga na Inštitutu Hektoen ustvarila za izolacijo enteropatogenih bakterij iz rodov Shigella in Salmonella.
Medij je sestavljen iz proteoznega peptona, izvlečka kvasa, žolčnih soli, laktoze, saharoze, salicina, natrijevega tiosulfata, natrijevega klorida, železovega citrata, amonijevega citrata, bromotimolno modrega, kislega fuksina in agarja. Ta formulacija omogoča razlikovanje rodov Shigella in Salmonella od ostalih bakterij, ki lahko rastejo v tem mediju.
A. Deviški hektoen agar B. Sejani hektoen agar. Vir: Flickr.com/ Prvotni pošiljatelj je bil Filipinjl na francoski Wikipediji.
Čeprav obstajajo drugi mediji z isto funkcijo kot Hektoen agar, ima večjo prednost v primerjavi z drugimi mediji, zlasti kadar želite obnoviti vrste Shigella.
Vrste obeh spolov povzročajo hude težave s prebavili pri človeku zaradi uživanja onesnažene hrane; zato je prenos fekalno - oralni. Zato je uporaba agenta Hektoen v glavnem navedena v mikrobiološki analizi blata in vzorcev hrane.
Osnove
Hektoen Agar vsebuje peptone in ekstrakt kvasa kot vir hranil, ki zagotavljajo bistvene elemente za razvoj mikrobov.
Vendar ima tudi žolčne soli, ki delujejo tako, da zavirajo rast nekaterih bakterij, zlasti gram-pozitivnih in nekaterih gram-negativnih. Zaradi tega velja za selektivni medij.
Po drugi strani je Hektoen agar diferencialni medij. To lastnost podeljuje prisotnost fermentibilnih ogljikovih hidratov, kot so laktoza, saharoza in salicin, skupaj s sistemom indikatorjev pH, ki ga predstavljata bromotimol modri in kisli fuksin.
Vse bakterije, ki lahko rastejo na tem mediju, ki ne spadajo v rod Salmonella in Shigella, bodo razvile kolonije lososa ali oranžne barve, razen rodu Proteus. To je posledica fermentacije enega ali več prisotnih ogljikovih hidratov, ki zakisajo medij, zaradi česar se indikator pH obrne.
Po rodu Shigella in Salmonella ne moreta fermentirati nobenega od prisotnih ogljikovih hidratov, saj kot energent uporabljata samo peptone, ki alkalizirajo medij, zato so njihove kolonije modro-zelene.
V tem mediju lahko razlikujemo tudi bakterije, ki lahko tvorijo vodikov sulfid (brezbarven plin). Natrijev tiosulfat deluje kot vir žvepla, medtem ko je železov citrat razvijalec. Obe spojini omogočata nastanek črne oborine železovega sulfida, ki kaže reakcijo.
Črna oborina na sredini kolonije s prozornim halo okoli nje daje videz ribjega očesa. Ta značilnost kaže na prisotnost roda Salmonella.
Končno natrijev klorid ohranja osmotsko ravnovesje in agar daje trdni konsistenci medij.
Priprava
Odtehtamo 76 g dehidriranega medija in raztopimo v litru destilirane vode. Zmes močno pretresite in nato pustite počivati 10 do 15 minut. Lahko ga segrevamo in kuhamo, pri čemer dajemo rotacijske gibe do popolnega raztapljanja. Ta medij ni samodejno klaviran.
Ko sredstvo doseže približno 45 ° C, se prostornina 20 ml nalije neposredno v sterilne Petrijeve posode.
Pustite, da se agar strdi. Takrat so pripravljeni za uporabo. Priporočljivo je, da jih uporabite takoj. Če to ni mogoče, jih hranite v hladilniku do uporabe.
Plošče je treba pred setvijo vnaprej odstraniti iz hladilnika, da se dosežejo sobne temperature.
PH medija mora biti 7,5 ± 0,2. Barva dehidriranega medija je vijolična, pripravljen medij pa rjavkasto zelen.
Uporaba
Uporaba agenta Hektoen priporočamo za iskanje bakterij rodu Shigella in Salmonella v blatu in vzorcih hrane.
Možnost izolacije teh bakterij se znatno poveča, če je vzorec predhodno obogaten s posebnimi juhami, kot so juha selenita, juha s cistinom, selenit, juha iz tetrationata itd.
Inokulum mora biti močan in setev se opravi s striženjem. Plošče inkubiramo pri aerobiozi 24 do 48 ur pri 37 ° C.
Inkubacija za 48 ur je priporočljiva, ker so značilnosti kolonij v tem trenutku jasnejše za njihovo interpretacijo in razlikovanje.
QA
Za nadzor kakovosti tega medija se uporabljajo certificirani bakterijski sevi, kot so: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 in Shigella sonnei ATCC 25931.
Pričakovani rezultati so naslednji: Salmonella typhimurium in Salmonella enteritidis naj razvijeta modro-zelene kolonije s črnim središčem ali brez njega. Medtem ko bo vrsta Shigella rasla kot modro-zelene kolonije.
Vključeni so lahko tudi sevi bakterije Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 in Staphylococcus aureus ATCC 25923.
V teh primerih so opažene značilnosti naslednje: E. coli in K. pneumoniae bosta v tem mediju razvila lososo-oranžne kolonije z oborino iste barve. Medtem ko bo Proteus razvil modro-zelene kolonije s črnim središčem ali brez njega.
Medtem ko je treba S. aureus in E. faecalis zavirati, E. faecalis občasno uspe rasti kot zelo majhne, rumene kolonije.
Po drugi strani pa, ker ta medij ni avtoklaviran, je pomembno oceniti sterilnost medija. Zato je treba iz vsake pripravljene šarže v aerobiozi 24 ur inkubirati eno uro do dve neokulirani plošči pri 37 ° C.
Na krožniku očitno ne pričakujemo nobene rasti.
Omejitve
- V tem mediju se lahko razvijejo vrste Proteus, značilnosti njihovih kolonij pa je mogoče zamenjati z vrstami Salmonella ali Shigella. Zaradi tega je treba z biokemijskimi testi potrditi vsako sumljivo kolonijo.
- Uporabo tega medija je treba spremljati z drugimi manj selektivnimi agarji, ker če se iskani mikroorganizem nahaja v nizkih koncentracijah, se v tem mediju morda ne bo razvil.
-Pri pripravi se ne pregrevajte, saj prekomerna toplota spremeni sestavo medija.
-Nenavadno se lahko pojavijo kolonije laktozne fermentacije salmonele, ki lahko ostanejo neopažene.
Reference
- Sodelavci Wikipedije. Hektoen enterični agar. Wikipedija, prosta enciklopedija. 13. marec 2019, 23:38 UTC. Dostopno na: .wikipedia.org / Dostopano 16. marca 2019.
- BD Laboratoriji. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Dostopno na: bd.com
- Britannia Laboratories. Hektoen Enteric Agar. 2015. Dostopno na: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Hektoen agar. Dostopno na: f-soria.es
- Difco & BBL priročnik, Hektoen Enteric Agar. 2. izdaja Dostopno na: bd.com/europe