AGAR IZ KORUZNE MOKE: OZADJE, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Agar koruzni zdrob je trdno gojišče kulture, z nizko hranilno moč, uporaben za precepljanju nekaterih gliv in za predstavitev chlamydospores v sevi Candida albicans kompleks. V angleščini je znan kot koruzni obrok Agar.

Običajni koruzni medij ima zelo preprosto sestavo, vsebuje koruzno moko, agar-agar in vodo. Zaradi nizke prehranske ravni je idealen za uporabo pri vzdrževanju glivičnih sevov za zmerna časovna obdobja, zlasti črnih gliv.

A. Grafični prikaz kompleksa Candida albicans na agarju koruzne moke. B. Klamidospora kompleksa Candida albicans pod mikroskopom, ki je nastal na agarju koruzne moke. Vir: A. GrahamColm / B. Avtor: CDC / Dr. William Kaplan, Courtesy: Knjižnica slik javnega zdravja.

Sporalacija kompleksa Candida albicans je v tem mediju naklonjena, če med pripravo agarja dodamo 1% Tween 80. Za to vrsto je značilna tvorba klamidosporov in praktično edina, ki prizadene človeka.

Obstajajo tudi druge vrste, ki tvorijo klamidospore, vendar verjetno ne bodo vplivale na človeka, na primer Candida australis, prisotna v pingvinskih iztrebkih, ali C. clausenii, ki je redko najden saprofit. Prav tako jih lahko izjemoma tvorita vrsta C. stellatoidea in C. tropicalis.

Po drugi strani dodajanje glukoze v medij koruzne moke ugodno tvori pigmente v sevih Trichophytom rubrum.

Pomembno je poudariti, da obstajajo glive, ki v agarju koruzne moke ne tvorijo hyphae ali pseudohyphae, na primer Cryptococcus neoformans, ki se razlikujejo od drugih rodov.

Koruzni agar lahko izdelamo doma v laboratoriju ali pa uporabimo tudi komercialne medije.

Osnove

Koruzna moka je substrat, agar je strjevalno sredstvo, voda pa topilo.

Koruzni agar lahko dopolnimo s tween 80 (sorbitan monooleat ali polisorbatni poliester 80). Ta spojina zmanjšuje površinsko napetost medija zaradi svoje emulgiranja.

Ustvari tudi sovražno okolje, ki zavira prekomerno razmnoževanje celic in spodbudi rast hif, kar daje prednost tudi proizvodnji klamidosporov; slednji je upošteval strukture upora. Ta struktura pomaga pri identifikaciji vrste Candida albicans.

Glukoza v tem mediju povečuje sposobnost nastajanja pigmentov nekaterih gliv.

Opozoriti je treba, da koruzni medij z glukozo ni koristen za prikaz klamidospora v kompleksu Candida albicans.

Priprava

Priprava domačega koruznega agraja

Odtehtamo 47 g rumene koruzne moke in raztopimo v 500 ml destilirane vode. Segrevamo na 60 ° C, pri čemer pripravek mešamo približno 1 uro. Nato filtriramo skozi kos gaze in bombaža, po želji ga lahko ponovno filtriramo tako, da pripravek prepustimo skozi filtrirni papir Whatman No.

Dopolnite prostornino do 1000 ml z destilirano vodo. Dodamo 17 g agar-agarja, segrevamo, dokler se ne raztopi. Avtoklavirajte 15 minut pri 121 ° C.

Postrezite v sterilnih petrijevih posodah. Shranjujte v hladilniku.

Barva pripravljenega medija je belkasta z grudastim videzom.

Če želite pripraviti koruzno moko z glukozo zgoraj opisanemu pripravku, dodajte 10 g glukoze.

Komercialni agar za koruzno moko

Natehtamo 17 g dehidriranega medija in raztopimo v 1 litru destilirane vode. Zmes lahko segrejemo, nežno stresemo, da se popolnoma raztopi. Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C, pri 15 lb, 15 minut.

Vlijemo v sterilne Petrijeve posode. Pustimo, da se strdi. Do uporabe obrnite in shranite v hladilniku. Pred uporabo temperirajte.

PH naj bo 6,0 ± 0,2 pri 25 ° C.

Agar iz koruzne moke z Tween 80

Za skladnost z ISO 18416 je treba pripraviti agar iz koruzne moke, kot sledi:

Na liter stehtajte 65 gramov in dodajte 10 ml zdravila Tween 80. Segrejte in kuhajte nekaj minut, dokler se ne raztopi, pri čemer pazite, da se preveč ne pregreje. Sterilizirajte 15 minut pri 121 ° C.

Agar iz koruzne moke z glukozo

Za izboljšanje kromogene moči kolonij Trichophyton rubrum in njihovo razlikovanje od T. mentagrophytes lahko v prvotno formulo dodamo 0,2% glukoze. Ni potrebno, da imate Tween 80, saj glukoza zavira nastajanje klamidosporov.

Uporaba

Uporaba agarja koruzne moke je namenjena preučevanju sevov Candida, ki pomagajo pri njihovi identifikaciji z značilnim opazovanjem klamidosporov pri vrstah albicans. To pomeni, da uporaba tega agarja služi kot pomožna metoda identifikacije teh kvasovk.

Na tem agarju se lahko razvijejo tako saprofitne kot patogene vrste, vendar vsaka tvori značilne micelijske strukture. Na primer, vrste rodu Torulopsis ne proizvajajo micelija in se razmnožujejo le blastoconidia.

Prav tako vrste Trichosporon in Geotrichum proizvajajo artrokonidijo na agarju koruzne moke, zato je včasih težko razlikovati med enim in drugim.

Arthroconidia iz rodu Geotrichum proizvajajo podaljšek hif, ki spominja na hokejsko palico.

Tudi uporaba pigmentov z uporabo agarja koruzne moke, dopolnjenega z glukozo, je koristna pri identifikaciji Trichophytom rubrum.

Posejano

Sumljive kolonije Candida, pridobljene v primarnem gojenju kulture - agar Sabouraud - iz kliničnih vzorcev, kozmetike, tal, med drugim subkultivirajo na agarju koruzne moke. Gojilo se seme in inkubira 24 do 48 ur pri 22 ° C. Čas inkubacije se lahko po potrebi podaljša.

Demonstracija klamidospora

V ta namen je treba agar koruzne moke z Tween 80 inokulirati s tehniko Dalmau. Ta metoda je sestavljena iz odvzema dela sumljive kolonije s platinskim ročajem in na sredini treh vzporednih rezov, pri čemer ročaj drži 45 °. Kosi naj bodo ločeni na razdalji 1 cm drug od drugega.

Nato se na že posejane proge položi predhodno ognjeni predmet pokrova, tako da je polovica pokrita, drugi pa nepokrit.

Semene plošče inkubirajte pri 30 ° C 48-72 h in nato preglejte pod mikroskopom skozi pokrovček.

Vzdrževanje glivičnih sevov

Za vzdrževanje sevov posajene in gojene plošče hranimo v hladilniku (4 do 8 ° C). Na ta način lahko trajajo več tednov in se lahko uporabljajo v učne ali raziskovalne namene.

QA

Za kontrolo sterilnosti se plošča inkubira brez inokulacije pri sobni temperaturi, pričakuje se, da ne bo prišlo do rasti ali spremembe barve.

Za nadzor kakovosti lahko sejemo znane seve, kot so: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Pričakovani rezultati so delna inhibicija za S. aureus in E. coli. V preostalih sevih pričakujemo zadovoljivo rast.

Aspergillus niger raste s črnimi in sporuliranimi kolonijami v približno 5 dneh inkubacije.

Kolonije kvasovk Candida albicans s proizvodnjo klamidospora.

Saccharomyces cerevisiae proizvajajo velike celice kvasovk.

Omejitve

Na dnu plošče se tvori rumena oborina, ki je ne smemo zamenjati s kolonijami.

Reference

1. Neogen Laboratories. Koruzni obrok Agar. Dostopno na: foodsafety.neogen.com.
2. Microkit za kulturo. Koruzni obrok Agar. Dostopno na: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Vodnik za identifikacijo kvasovk Solís F. Dostopno na: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. vl. Perú Med.Exp. Javno zdravje, 2002; 19 (4): 206–208. Dostopno na: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Splošna mikologija. 1994. Druga izdaja osrednje univerze v Venezueli, izdaje knjižnic. Venezuela Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
8. Castillo E. Primerjalna študija nekaterih makro in mikroskopskih metod za izolacijo in prepoznavanje rodu Candida. Kolumbijska Rev. of Pharmaceutical Chemical Sciences. 1970; 3 (1): 33–57. Dostopno na: Ciencias.unal.edu.co