Agar EMB je selektiven in razlika medij za trdne izolacije kulture gramnegativne bacile, zlasti Enterobacteriaceae in drugimi po Gramu negativnih bakterij nezahteven. Znan je tudi po akronimu EAM, ki pomeni eozin-metilen modro.
Ta medij sta ustvarila Holt-Harris in Teague leta 1916. Vsebuje pepton, laktozo, saharozo, dikalijev fosfat, agar, eozin, metilen modro in vodo. Zelo je podoben MacConkey Agar, še posebej, če uporabljate Levine's Modified EMB Agar, ki ne vsebuje saharoze.
Kovinski sijaj Escherichia coli na EMB agaru Vir: Carmen Moreno González, iz Wikimedia Commons
Pravzaprav se vsak laboratorij odloči, ali bo sodeloval z enim ali drugim, saj opravljajo isto funkcijo, čeprav so biokemično drugačni.
Ima celo enako pomanjkljivost kot klasični agar MacConkey, kar se tiče rodovitne proizvodnje rodu Proteus. Zato se izognemo temu pojavu, lahko koncentracijo agarja povečamo za do 5%.
Osnove
Izbirno
EMB agar je subtilno selektiven, ker vsebuje anilinska barvila (eozin in metilen modro), ki delujejo kot zaviralci in preprečujejo rast večine gram-pozitivnih bakterij in nekaterih pronicljivih Gram negativnih paličic.
Vendar ima ta agar pomanjkljivost, da se nekatere Gram pozitivne bakterije lahko upirajo prisotnosti zaviralnih snovi in rastejo kot majhne brezbarvne punktatne kolonije, na primer Enterococcus faecalis in nekaj stafilokoka.
Lahko rastejo tudi nekateri kvasovke, na primer kompleks Candida albicans, ki bo dal zelo majhne rožnate kolonije. Klamidospore se lahko razvijejo celo iz tega kvasa, če je vzorec globoko posejan.
Diferencialno
Po drugi strani je EMB agar tudi diferencialno gojišče, saj imajo ta barvila skupaj (eozin in metilen modro) lastnost, da tvorijo oborino pri kislem pH, zato služijo kot indikatorji njene proizvodnje.
Tako šibke bakterije, ki fermentirajo laktozo ali saharozo, ustvarijo vijolične kolonije v 24 do 48 urah. Na primer rodovi Klebsiella, Enterobacter in Serratia.
Tiste bakterije, ki močno fermentirajo laktozo, kot je Escherichia coli ali saharoza, kot sta Yersinia enterocolitica ali Proteus penneri, tvorijo zelenkasto-črno oborino, ki daje značilnim kovinskim sijajem videz teh vrst.
Upoštevati je treba, da če uporabimo levinski medij EMB (brez saharoze), bosta Yersinia enterocolitica in Proteus penneri ustvarila prozorne kolonije.
Bakterije, ki ne fermentirajo laktoze ali saharoze, se hranijo s prisotnostjo peptonov, ki zagotavljajo aminokisline in dušik, potreben za rast bakterij, ter ustvarjajo prozorne kolonije. Na primer, rodov Salmonella in Shigella, med drugim.
Prav tako je pomembno opozoriti, da rod Acinetobacter lahko predstavlja kolonije sivke, čeprav ni laktozni fermenter ali saharoza, vendar ima lastnost, da metilen modro pritrdi na svojo celično steno. To se lahko zgodi tudi z drugimi oksidativnimi bakterijami.
Priprava
Prvotni dehidriran medij je svetlo bež barve.
Za pripravo tega gojišča moramo v bučko, ki vsebuje en liter destilirane vode, stehtati 36 gramov dehidriranega medija.
Ko mešanico pustite počivati 5 minut, odnesite bučko k vročinskemu viru, pri čemer močno in mešamo, dokler ne zavre in se popolnoma raztopi.
Potem je treba že raztopljeno gojišče sterilizirati z avtoklavom pri 121 ° C 15 minut.
Po koncu časa se odstrani iz avtoklava in na kratko pusti stati. Nato še vedno toplo (45-50 ° C) v vsako sterilno petrijevo posodo postrežemo 15-20 ml agarja. Medij naj bo lakmus modro.
Po serviranju krožnike pustimo rahlo nepokrito, dokler se agar rahlo ne ohladi. Nato jih pokrijemo in pustimo, da se popolnoma strdijo. Nato so nameščeni v obrnjena držala za plošče in do uporabe shranjeni v hladilniku (8 ° C).
Ta postopek se po možnosti izvaja v pokrovu z laminarnim tokom ali pred Bunsenovim gorilnikom, da se prepreči kontaminacija.
Pomembno je upoštevati, da bo vsaka gospodarska hiša navedla količino, ki jo bo stehtala za pripravo gojišča.
Končni pH medija mora biti 7,2 ± 0,2
Prijave
Ta medij se uporablja za sejanje urina in blata ali katere koli druge vrste kliničnega vzorca, še posebej, če obstaja sum na prisotnost nonšastnih gram-negativnih bacilov, kot so bacili iz družine Enterobacteriaceae, ki na tem mediju rastejo zelo dobro.
Enteropatogene bakterije rodov Shigella in Salmonella se odlikujejo po svojih brezbarvnih ali rahlo jantarnih kolonijah.
Med drugim rastejo tudi druge ne-laktozne fermentirajoče bacile, kot so Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter.
Prav tako je ta medij zelo uporaben pri mikrobioloških analizah hrane in vode, saj je idealen za popolno potrditveno fazo določanja koliform, torej za potrditev prisotnosti E. coli iz motenj EC bujon iz najverjetnejše tehnike števila (MPN).
QA
Če želite preveriti, ali sveže pripravljen gojišče deluje dobro, lahko posadite kontrolne seve, da opazite značilnosti kolonij in preverite, ali dajejo po pričakovanjih.
Za to se lahko uporabljajo sevi ATCC ali dobro identificirani sevi E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa in nekatere gram-pozitivne bakterije, kot je S. aureus.
Pričakuje se, da E. coli ustvari dobro razvite modro-črne kolonije z zelenim kovinskim sijajem. Ker bi morali Enterobacter aerogenes in Klebsiella sp imeti dobro razvite modrikasto-črne sluznice.
Po drugi strani morata Salmonella typhimurium in Shigella flexneri razviti velike kolonije, brezbarvne ali z rahlo jantarno barvo.
Nazadnje rod Pseudomonas aeruginosa raste kot brezbarvne kolonije nepravilne velikosti, medtem ko bi morale Gram pozitivne bakterije popolnoma zavirati ali redko rasti z zelo majhnimi kolonijami.
Končne misli
Včasih sterilizacija povzroči zmanjšanje metilen modre barve, kar kaže srednje oranžno barvo. Da metilen modra oksidira in povrne vijolično barvo, jo je treba nežno mešati, dokler se barva ne obnovi.
Po sterilizaciji se lahko barvilo tudi obori, zato ga moramo pred serviranjem petrijevih jedi dobro premešati.
Reference
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B in Velázquez O. 2009. Tehnike mikrobiološke analize živil. 2. izd. Fakulteta za kemijo, UNAM. Mehika.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Karakterizacija in porazdelitev potencialno patogenih sevov Escherichia coli, izoliranih iz piščančjih piščancev s perutninskih kmetij v Peruju. Rev. veterinar. Peru 2012 23 (2): 209–219. Dostopno na: scielo.org.
- Laboratorios Conda SA Eozin in metilen modri agar. 2010. Dostopno na: condalab.com
- Britannia Laboratories. Levine EMB (z eozinom in metilen modro) 2011. Dostopno na: britanialab.com
- BD Laboratoriji. Agar BD EMB (eozin metilen modri agar), spremenjen. 2013. Dostopno na: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Argentina. Uredništvo Panamericana SA