RAZPISANI AGAR: UTEMELJITEV, UPORABA IN PRIPRAVA - BIOLOGIJA - 2026

CLED agar (Cistin-laktoza-Elektrolit deficientna) je trdno gojišče kulture razlika, ki se uporablja za diagnozo okužbe sečil. Sestava gojišča je zasnovana za dobro rast urinskih patogenov in je idealna za količinsko določitev enot, ki tvorijo kolonije (CFU).

Gojitveni medij CLED ni selektiven, saj lahko v njem rastejo gram-negativni in gram-pozitivni mikroorganizmi. Vendar to ni problem, saj večino UTI povzroča samo ena vrsta mikroorganizmov.

CLED agar

V primeru polimikrobnih okužb lahko dobimo 2 ali 3 različne bakterije, vendar je zelo redka in večino časa gre za okužene vzorce.

Med Gram negativnimi bakterijami, ki lahko rastejo v tem mediju, so bacili, ki pripadajo družini Enterobacteriaceae, in drugi enterični bacili, pri čemer so uropatogeni najpogosteje izolirani v vzorcih urina: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, med drugim.

Med Gram pozitivne bakterije, ki lahko rastejo v tem gojišču, lahko rastejo tudi Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp in celo kvasovke, na primer kompleks Candida albicans.

Vendar zaradi kemične sestave gojišča ne omogoča rasti nekaterih zahtevnih genitourinarnih patogenov, kot so med drugim Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis.

CLAR Agar utemeljitev

Gojitveni medij CLED ima kot energijski vir ekstrakt mesa, pankreasni hidrolizat kazeina in hidrolizat želatine. Zagotavljajo hranila za razvoj nezahtevnih bakterij.

Vsebuje tudi cistin, aminokislino, ki omogoča rast koliform, ki se razlikuje po njihovi majhnosti.

Prav tako vsebuje laktozo kot fermentiran ogljikov hidrat, zato je ta medij različen; da lahko ločimo fermentirajoče bakterije od ne-laktozne fermentacije.

Bakterije, ki fermentirajo, povzročijo, da se pH medija spremeni zaradi proizvodnje kislin, razvijejo rumene kolonije, medtem ko bakterije, ki ne fermentirajo, v mediju ne ustvarjajo sprememb, zato prevzamejo barvo prvotnega agarja, zeleno.

Reakcija fermentacije se razkrije zahvaljujoč prisotnosti indikatorja pH, ki je v tem mediju bromotimol modre barve.

Po drugi strani pa nizka koncentracija elektrolitov v sredstvu zavira značilno invazivno rast rodu Proteus, imenovano učinek rojenja. To ustvarja prednost pred drugimi mediji, saj omogoča štetje CFU, tudi če je rod Proteus prisoten.

Vendar pa nizka koncentracija elektrolitov zavira rast nekaterih vrst rodu Shigella, kar je v primerjavi z drugimi gojišči slabost.

Obrazložitev za CLED agar (Bevis)

Obstaja različica ali sprememba tega medija Bevisa, ki je v prvotno sestavo vključil kisli fuksin (Andradeov indikator). Deluje v povezavi z bromothymol modro, da loči fermentacijo od nefermentnih bakterij.

Razlika med običajnim in spremenjenim medijem je barva kolonije. V primeru bakterij, ki fermentirajo laktozo, se kolonije obarvajo rdečkasto oranžno z roza ali rdečo halo, pri ne fermentacijskih pa modrikasto-sive.

Prijave

CLED agar se uporablja izključno za sejanje vzorcev urina. Uporaba tega medija je v evropskih laboratorijih še posebej pogosta, medtem ko se v Ameriki manj uporablja.

Za pridobitev zanesljivih rezultatov mora odvzem vzorcev ustrezati določenim parametrom, vključno:

• Ne jemljite antibiotikov pred vzorčenjem.
• Najbolje je, da urin najprej vzamete zjutraj, saj je bolj koncentriran, kadar vzorca ni mogoče odvzeti z invazivnimi metodami.
• Pred odvzemom vzorca genitalije dobro izperite.
• Zaprite prvi tok uriniranja in nato položite posodo.
• Zberite 25 do 30 ml urina v dobro označeni sterilni posodi.
• Odpeljite se takoj v laboratorij, obdan v led.
• Predelati ga je treba v 2 urah po izdaji ali hladiti pri 4 ° C največ 24 ur.

Seme vzorcev urina

Vzorec urina je treba razredčiti 1:50.

Za redčenje damo 0,5 ml bolnikovega urina in razredčimo s 24,5 ml sterilne fiziološke raztopine.

Na CLED mediju izmerite 0,1 ml razredčenega urina in površinskega namaza z drigalski lopatico. To je najboljši način setve za štetje kolonij. Zaradi tega se uporablja v vzorcih urina, saj morajo biti rezultati izraženi v CFU / ml.

Če želite količinsko določiti dobljene kolonije, nadaljujte na naslednji način: preštejte kolonije na plošči in pomnožite z 10 in nato s 50. Tako dobite količino CFU / ml urina.

Interpretacija

Šteje nad 100.000 CFU / ml -– Označuje urinsko okužbo

Šteje pod 1000 CFU / ml- Brez okužbe

Šteje med 1000–10 000 CFU / ml –– Dvomljivo, možna kontaminacija, ponovljeno vzorčenje.

ID

Kolonije, gojene na agar CLED, bi morale imeti Gram in glede na morfotintorialne značilnosti mikroorganizma se izvaja določena subkultura.

Na primer, če gre za Gram negativni bacil, ga bomo posejali na agar MacConkey, kjer je fermentacija laktoze ali ne. Poleg tega je za izvedbo preskusa oksidaze pritrjen hranilni agar.

V primeru, da Gram odkrije gram-pozitivne kaki, ga lahko subkultiramo na slanem manitolnem agarju in na hranilnem agarju. Pri slednjem se izvede preskus katalaze. Nazadnje, če bomo opazili kvasovke, ga bomo posejali na agar Sabouraud.

Mnogi laboratoriji se izogibajo uporabi CLED medija in raje uporabljajo samo krvni agar, MacConkey in hranilni agar za vzorce semenskih urin.

Priprava

V bučki z litrom destilirane vode raztopimo 36,2 g praška CLAR agar. Po 5 minutah stajanja segrejte resuspendirani agar in nenehno mešajte, da vre 1 minuto.

Nato v avtoklavu 15 minut sterilizirajte pri 121 ° C. Po koncu časa ga odstranimo iz avtoklava in pustimo, da se ohladi do temperature 45 ° C. Kasneje v vsako sterilno petrijevo posodo postrežemo 15-20 ml.

Postopek serviranja plošče je treba izvesti znotraj pokrova laminarnega toka ali pred gorilnikom Bunsen, da se prepreči onesnaženje.

Odstavljene plošče pustimo, da se strdijo, razporedimo v obrnjeno stojalo in do uporabe hranimo v hladilniku (2-8 ° C).

Končni pH pripravljenega medija mora biti 7,3 ± 0,2.

Reference

1. Priporočila za mikrobiološko diagnozo urinske okužbe. čili. infektol. 2001; 18 (1): 57–63. Dostopno na: scielo.org.
2. Panchi J. Identifikacija mikrobnega povzročitelja, ki povzroča okužbe sečil pri bolnikih, pri katerih se kateterizira mehur. 2016. Dodiplomsko delo za pridobitev diplome iz kliničnega laboratorija. Tehniška univerza v Ambatu. Ekvador
3. Britannia Laboratories. CLED medij. Dostopno na: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Navodila za uporabo, CLED Agar. 2013 Dostopno na: es.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories. Osnovni priročnik mikrobiologije. Dostopno na: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Možnost agarja CLED v uriniranju urinske kulture. Možnostna in primerjalna ocena. Diagn Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287–90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinična mikrobiologija. University of Cadiz, 2. izdaja UCA Služba za publikacije.