ČOKOLADNI AGAR: OSNOVA, UPORABE IN PRIPRAVA - BIOLOGIJA - 2026

Agar čokolada je trdno gojišče kulture, obogaten, non - selektivna in ne - razlika. Uporablja se predvsem za izolacijo mikroorganizmov, ki so zahtevani s prehranskega vidika, čeprav lahko v njem rastejo vse vrste bakterij.

Zaradi tega se njegova uporabnost povečuje zlasti pri setvi vzorcev, ki so običajno sterilni, na primer CSF in sklepna tekočina. Čeprav je vključen tudi med izbrana sredstva za setev polimikrobnih vzorcev, je v teh primerih treba dodati antibiotike, ki zavirajo sočasno floro.

Čokoladni agar z rastjo bakterij

Ta medij ima značilno rjavo barvo, ki je zelo podobna čokoladi, od tod tudi njeno ime. Priprava je zelo podobna pripravi krvnega agarja, le v tem primeru je treba segreti kri, da se rdeče krvne celice razgradijo.

Njegova priprava je, podobno kot krvni agar, zelo občutljiva, saj je zlahka onesnažena. Zaradi tega mnogi laboratoriji raje pridobijo ta medij, ki so ga že pripravila komercialna podjetja, ki zagotavljajo njegovo kakovost.

Osnove

Ta medij je sestavljen iz agarne baze bogate s hranili in segrete krvi. Hemoliza rdečih krvnih celic zagotavlja faktor X (hemin) in faktor V (NAD), ki sta potrebna za rast nekaterih mikroorganizmov, kot je rod Haemophilus. Zelo uporabna je tudi za izolacijo Neisserias sp.

Tako kot krvni agar lahko tudi bazni agar uporabimo različne medije, odvisno od potrebe. Med uporabljenimi mediji so možganska infuzija srca in sojin agar s triptikazo, čeprav so najbolj priporočljivi agrum Columbia, Müeller Hinton, agar GC in agar Thayer Martin.

Nekatere različice čokoladnega agarja vključujejo komercialno razširjen dodatek, imenovan Isovitalex ali Polivitex.

Ta dopolnila vsebujejo vitamin B ₁₂ , L-glutamin, adenin, gvaninijev klorid, p-aminobenzojsko kislino, nikotinamid adenin dinukleotid (NAD), tiamin pirofosfat, železov nitrat, tiamin hidroklorid, cistein hidroklorid, L-cistin in glukozo.

Pomembno je omeniti, da je čokoladni agar bolj obogaten kot krvni agar, vendar ne omogoča opazovanja vzorcev hemolize.

Prijave

Vir: pixnio.com. Avtor:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, dr. Todd Parker, Audra Marsh, USCDCP

Čokoladni agar, pripravljen z agrumom Columbia

Ta medij vsebuje prebavil trebušne slinavke kazein in srce, peptični prebavi mesa, natrijev klorid, agar, ekstrakt kvasa in koruzni škrob. Prav tako je bogata z vitamini, minerali in esencialnimi aminokislinami.

Ta ogrevana krvna osnova je idealna za izolacijo bakterij iz rodu Neisseria. Po drugi strani pa lahko, če se mediju dodatno doda dodatek za Brucella, lahko omenjeni mikroorganizem izoliramo. Rezultati se izboljšajo s pomočjo konjske krvi.

Čokoladni agar, pripravljen z osnovnim agarjem GC (za gonokoke)

Ta medij vsebuje peptone, koruzni škrob, monobazične in dvoosne puferje, natrijev klorid in agar.

Večina komercialno pripravljenih predstavitev čokoladnih agarjev je s to osnovo in ne vsebuje segrete krvi, temveč sintetično mešanico hemina in kemično dopolnilo rastnih faktorjev, vitaminov, mineralov, aminokislin, faktorja V in glukoze.

Čokoladni agar, pripravljen z agarjem Müeller Hinton

Uporablja se za preskušanje protimikrobne občutljivosti občutljivih mikroorganizmov, kot je Streptococcus pneumoniae, z uporabo 5% segrete ovčje krvi.

Uporablja se tudi za primarno izolacijo Neisserias in Haemophilus, vendar je v posebnem primeru izolacije Haemophilus prednostna uporaba konjske krvi, saj je bogat vir faktorja X in V.

Po drugi strani pa, če vzorec, ki ga je treba sejati, prihaja z nesterilnega območja, se priporoča dodajanje antibiotikov za zaviranje normalne flore območja.

Primer za dihalne vzorce, pri katerih obstaja sum na prisotnost bakterij iz rodu Haemophilus, se bakitracin uporablja za zaviranje rasti stafilokoka, mikrokoka, streptokoka in saprofitskih Neisserijev.

V primeru vzorcev genitalnega črevesa, pri katerih obstaja sum na hemofilus ducreyi, je bil uspešno uporabljen čokoladni agar, pripravljen na naslednji način: Müeller - Hinton agar s 5% čokoladirane konjske krvi, 1% obogatitve Isovitalex in 3 µg / ml vankomicina.

Čokoladni agar, pripravljen s agarjem Thayer Martin

Ta medij je poseben za izolacijo bakterije Neisseria gonorrhoeae. Vsebovati mora antibiotike za zaviranje spremljajoče flore. Uporablja se jagnjetova kri.

Priprava

Videti morate indikacije za pripravo baznega agarja, ki ga boste uporabili. Najdemo jih na zadnji strani posode dehidriranega medija. Na splošno opisujejo, koliko morate tehtati, da pripravite liter gojišča.

Točno potrebno količino lahko pripravite v laboratoriju, lahko je več ali manj od litra.

Izračuni

Za izračun količine tehtanja za pripravo želene prostornine se uporablja pravilo tri. Primer:

Če je za 1 liter potrebno tehtati 40 gr, laboratorij pa potrebuje 800 ml, se reče:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

Formula bo naslednja:

X = 32 gr (količina, ki se stehta za 800 ml).

Odtehtamo in raztopimo

Potrebno količino stehtamo in z vodo postavimo v bučko.

Segrejte na zmerni vročini in rahlo mešajte z rotacijskimi gibi, dokler se dehidrirani medij popolnoma ne raztopi in pustite vreti 1 minuto.

Sterilizirajte

Bučko damo v avtoklav, da medij steriliziramo pri 121 ° C 20 minut.

Krvni agregat

Ko pustite avtoklavo, ga pustite počivati, dokler temperatura medija ni približno med 56 in 70 ° C, da se odvzame kri in meša, dokler medij ne porjavi.

Če dodajate dodatke, je to čas, da to storite. Nato zmešajte in postrežite 20 ml v vsako sterilno petrijevo posodo.

Celoten postopek je treba izvesti v pokrovu z laminarnim tokom ali okoli Bunsenovega gorilnika.

Pustite stati, dokler se ne strdijo in hranite obrnjeno v hladilniku.

Drug način za pripravo čokoladnega agarja brez uporabe krvi

Osnovni medij pripravimo, kot je opisano zgoraj, komercialno dobljeni dehidrirani hemoglobin se raztopi in sterilizira v avtoklavu.

Obe raztopini pustimo, da se ohladita na 50 ° C, združita in dodamo dodatek. Mešajte v aseptičnih pogojih in nato postrezite v sterilni petrijevi posodi.

QA

Pomembno je, da se kri postavi na navedeno temperaturo, saj je idealna za liziranje rdečih krvnih celic in hkrati ohranja faktor V, ki je toplotno občutljiv.

Na površini agarja ne smejo ostati mehurčki. Iz vsake serije 100 plošč lahko eno ali dve plošči 24 ur inkubiramo v pečici pri 37 ° C, da preverimo njihovo sterilnost.

Za najboljše rezultate je treba čokoladni agar uporabiti kmalu po pripravi.

V laboratoriju je treba hraniti kontrolne bakterijske seve, da bi ocenili učinkovitost svežega gojišča za rast glavnih hitrih mikroorganizmov kliničnega pomena.

Reference

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktična klinična mikrobiologija. University of Cadiz, 2. izdaja UCA Služba za publikacije.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Argentina. Uredništvo Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. (5. izd.). Argentina, uredništvo Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Izvedljivost uporabe baznega kulturnega gojišča GC-Biocen Agar v mikrobiološkem laboratoriju. Rev Kubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237–238. Dostopno na: scielo.sld.
5. Sodelavci Wikipedije. Čokoladni agar. Wikipedija, prosta enciklopedija. 17. december 2018, 19:54 UTC. Dostopno na: en.wikipedia.org.