Agar cetrimid ali cetrimid je selektivni trdna gojišče kulture zasnovan za izolacijo Pseudomonas aeruginosa. Temelji na prikazovanju proizvodnje značilnih pigmentov te vrste in je narejena iz modifikacije Tech agarja, ki so jo ustvarili King, Ward in Raney.
Prvotna formula je vsebovala soli magnezijevega klorida, kalijevega sulfata, prebavo želodca v trebušni slinavki in agar-agar. Sprememba formule je bila sestavljena iz dodatka cetrimida (cetil trimetil amonijev bromid) in glicerola.
Cetrimidni agar, posejan s Pseudomonas aeruginosa Vir: BiotechMichael, iz Wikimedia Commons
Cetrimidni agar je uporaben za mikrobiološko študijo vzorcev, pri katerih obstaja sum na prisotnost bakterije Pseudomonas aeruginosa. Treba je opozoriti, da je ta bakterija izredno pomembna, saj se pogosto ponaša kot oportunistični povzročitelj bolezni, čeprav je del običajne okoljske mikrobiote.
Zaradi tega so ena najpogostejših težav, ki jih povzroča ta zarod, nosokomične okužbe, torej tiste, ki se pojavljajo v bolnišničnem okolju, in napadajo bolnike, ki imajo depresivni imunski sistem.
Po drugi strani so zaradi afinitete, ki jo ima ta mikroorganizem z vlago, najbolj ranljive tarče onesnaženja: pomagala dihalna oprema, zdravila, nebulizatorji, vodni viri, klimatske naprave, razkužila, milne raztopine, injekcijske raztopine, odprte rane , med drugim tudi katetri, sečne cevi.
V tem smislu je cetrimidni agar uporaben za izvajanje mikrobioloških kontrol in kultur na prej omenjenih elementih.
Osnove
Cetrimidni agar temelji na sposobnosti medija, da pospešuje rast P. aeruginosa, spodbuja proizvodnjo njegovih pigmentov in posledično zavira rast drugih mikroorganizmov.
Te lastnosti so posledica delovanja vsake njegove komponente. Prisotni želatinski pepton služi kot vir dušika, vitaminov in mineralov. Glicerol ali glicerin deluje kot vir ogljika.
Cetrimid (cetil trimetil amonijev bromid) je snov, ki zavira rast bakterij razen P. aeruginosa, vključno z drugimi vrstami istega rodu.
Inhibicija nastane, ker cetramid deluje kot kationski detergent, s čimer uspe destabilizirati plazemsko membrano večine bakterij, razen P. aeruginosa in nekaterih drugih, ki jim uspe preživeti.
Po drugi strani vsebuje magnezijev klorid in kalijev sulfat. Te spojine spodbujajo fenotipsko izražanje, povezano s sposobnostjo Pseudomonas aeruginosa, da proizvaja različne pigmente, vključno s: piocijaninom, pioverdinom, piorubinom, piomelaninom in fluoresceinom. Na koncu vsebuje agar-agar, ki mu daje trdno konsistenco.
Interpretacija
Razlago rasti, dobljene v tem agaru, izvedemo na naslednji način:
Opazovanje okroglih, gladkih kolonij z rednimi robovi, s proizvodnjo modro-zelenkastih, zelenih, rjavih ali rdečkastih pigmentov, plus emisije sadnega vonja (aminoacetofenona), je domneven rezultat prisotnosti te bakterije v omenjenem vzorcu.
Po drugi strani je opazovanje svetlo zelenkasto rumenega pigmenta na kolonijah indikativno za P. aeruginosa, ko je plošča izpostavljena ultravijolični svetlobi.
Fluorescenca kolonij P. aeruginosa na agetu cetrimida pod ultravijolično svetlobo.
Treba je opozoriti, da je vsaka opažena barva posledica proizvodnje določenega pigmenta. Modro-zeleni pigment ustreza proizvodnji piociana, zeleni do pyoverdina, rdečkast do pioubin, rjav do piomelanin in svetlo rumeno-zelena fluorescenca pod UV svetlobo do fluoresceina.
Priprava
Odtehtamo 43 g dehidriranega medija in raztopimo v destilirani vodi. Dodamo 10 ml glicerola. Zmes ponesite v vir toplote. Pustite vreti nekaj minut do popolnega raztapljanja.
Avtoklavirajte pri 121 ° C 15 minut. Pustimo stati in postrežemo v sterilni petrijevi posodi, ko je temperatura okoli 50 ° C.
Pustite, da se strdi, obrnite, naročite v pločevine in hranite v hladilniku do uporabe. Plošče s cetrimidnim agarjem je treba vnaprej odstraniti iz hladilnika do semena in pustiti, da dosežejo sobno temperaturo.
Končni pH medija mora biti 7,2 ± 0,2.
Barva dehidriranega medija je bež, pripravek pa motno bel.
Prijave
Vse vrste vzorcev, pri katerih obstaja sum prisotnosti Pseudomonas aeruginosa, se lahko sejejo na cetrimidnem agarju. Zato je uporaben na vseh področjih mikrobiologije (okoljska, industrijska, klinična, voda in hrana).
Pomembno je analizirati bolnišnična okolja in tako lahko uporabiti korektivne ukrepe, saj ta mikroorganizem doseže bolnike z onesnaženo opremo, zdravili, raztopinami in zalogami, ki jih bolnik uporablja.
Na ta način lahko mikroorganizem okuži spodnje dihalne poti, sečila in rane imunosupresivnih bolnikov.
Število kolonije P. aeruginosa lahko opravimo tudi z mejnimi testi za mikrobe.
Posejano
Cetrimidni agar lahko uporabimo kot primarno kulturo. Plošča je inokulirana na enem od njenih robov in se od tam po izčrpanosti porazdeli na preostalo ploščo. Tekoče vzorce lahko površinsko sejemo z drigalski lopatico.
Plošče inkubiramo aerobno pri 37 ° C 24 ur inkubacije.
Omejitve
-Majhen odstotek sevov Pseudomonas aeruginosas ne proizvaja piocianina, zato je mogoče razlagati lažni negativ.
-Neke vrste kliničnih pomembnosti Pseudomonas zavirajo v tem mediju.
- Ne glede na značilnosti, opisane za Pseudomonas aeruginosa, jih je treba potrditi z dodatnimi identifikacijskimi testi. Test, ki ga ne smemo zamuditi, je test oksidaze, dati mora pozitiven rezultat.
-Neke enterobakterije lahko rastejo v tem mediju in razvijejo rumen pigment, vendar se od Pseudomonas aeruginosa razlikuje po tem, da, ko je plošča izpostavljena ultravijolični svetlobi, ni fluorescence.
- Serratia marcescens uspe razviti in ustvariti roza pigment.
-Če so plošče, posejane s cetrimidnim agarjem, izpostavljene nekaj časa pri sobni temperaturi, lahko sevi P. aeruginosa izgubijo fluorescenco, ki jo opazimo pod ultravijolično svetlobo, vendar se lastnost povrne, če jih ponovno inkubiramo pri 37 ° C.
QA
Za analizo dobrega učinka cetrimidnega agarja lahko uporabimo kontrolne seve, kot so: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 in Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Pričakovani rezultati so:
- Dobra rast za P. aeruginosa, z modro-zelenim pigmentom in pozitivnim fluoresceinom.
- S. maltofilija in S. aureus bosta delno do konca zavirana.
- Pričakuje se, da bo Escherichia coli popolnoma zavirana.
Reference
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotipska in serološka karakterizacija kliničnih izolatov Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1–9.
- Conda Pronadisa Laboratories. Baza cetrimidnega agarja. 2014.Dostopno na: condalab.com
- Britannia Laboratories. Cetrimidni agar. 2015. Dostopno na: britanialab.com
- BD Laboratoriji. BD Pseudosel agar (Cetrimid agar). 2013. Dostopno na: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laboratorij, CA agar Cetrimid. 2009. Dostopno na naslovu: http://f-soria.es