BILE ESCULIN AGAR: UTEMELJITEV, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Žolčnih -eskulin agar je selektivno in diferencialno srednje trdna kulture. Uporablja se kot diagnostični test za določitev sposobnosti določenega mikroorganizma, da raste v gojišču, ki vsebuje žolč, ter razgradi glukozidni esculin na eskuletin in glukozo.

Ta diagnostični test se uporablja za razlikovanje vrst rodu Streptococcus, ki spadajo v skupino D (žolčni pozitivni eskulin), od drugih skupin Streptococcusa, ki na ta test reagirajo negativno.

Plošča z žitnim esculinskim agarjem, posejana s sevom Enterococcus (test pozitiven). Vir: Avtor ni na voljo za branje avtorja. Philippinjl domneval (na podlagi trditev o avtorskih pravicah)

Treba je opozoriti, da lahko nekateri streptokoki iz skupine virusov hidrolizirajo esculin, vendar niso sposobni rasti v prisotnosti žolča v koncentraciji 40%, zato je v tem mediju reakcija za to skupino negativna.

Po drugi strani je žolčni eskulinski medij koristen tudi za diagnozo vrst Listeria monocytogenes ali Aerococcus sp, saj so ti mikroorganizmi pozitivni na žolčni eskulin.

Eskulinski žolčni agar je sestavljen iz peptona, mesnega ekstrakta, vola žolča, eskulina, železovega citrata, agarja in destilirane vode. Nekatere komercialne hiše vključujejo natrijev azid v sestavo medija.

Medij lahko pripravimo v laboratoriju, če imate vse spojine ločeno ali jih lahko pripravite iz komercialnega dehidriranega medija.

Osnove

Medij žolčnega eskulina vsebuje peptone in mesni ekstrakt, obe spojini zagotavljata potrebna hranila za rast mikroorganizmov.

Vsebuje tudi esculin; Ta spojina je glikozid, ki nastane z združitvijo preprostega monosaharida (glukoze) s spojino, imenovano 6,7-dihidroksikarmarin ali eskuletin (aglukon), ki jo povezuje acetalna ali glukozidna vez.

Test temelji na tem, da pokaže, ali je bakterija sposobna hidrolizirati esculin. Če se to zgodi, se esculin razgradi na eskuletin in glukozo. Esculetina reagira z železom, ki je prisoten v mediju, tvori temno rjavo, skoraj črno spojino.

To pomeni, da železov citrat deluje kot razvijalec reakcije. Zaradi te lastnosti je Bile Esculin Agar diferencialni medij.

Žolč je zaviralec, ki preprečuje rast nekaterih mikroorganizmov, zato mora biti bakterija, preden cepi esculin, lahko zraste v prisotnosti žolča. Zato ta medij velja za selektivnega.

Bakterije, ki se lahko razvijejo v tem okolju, so predvsem tiste, ki živijo v črevesnem okolju.

V tem smislu nekatera komercialna podjetja dodajo natrijev azid v medij, da še dodatno zavirajo rast enteričnih Gram negativnih bacilov in povečajo selektivnost gojišča za rast streptokoka.

Končno agar daje trdni konsistenci medij, voda pa topilo spojin.

Priprava

Domača priprava žolčevega esculinskega agarja

Tehtati:

5 g peptonov

3 g mesnega ekstrakta

40 g govejega žolča

1 g esculina

0,5 g železovega citrata

15 g agarja

1000 ml destilirane vode

V primeru dodajanja natrijevega azida stehtamo 0,25 g / liter in dodamo mešanici.

Sestavine raztopimo v litru destilirane vode, segrevamo, dokler se spojine popolnoma ne raztopijo. Razdelite 5 ml v epruvete z vijačnimi kapicami velikosti 16 x 125 mm. Avtoklav v 121 ° C, 15 kilogramov pritiska 15 minut.

Odstranite ga iz avtoklava in nagnite cevi na nosilec, tako da se agar strdi v širokem kljunu.

Do uporabe hranite v hladilniku. Pred setvijo se segrejte na sobno temperaturo.

Pripravimo lahko tudi plošče z žitnim eskulinskim agarjem; v tem primeru se celotna mešanica avtoklavira v bučko in se nato porazdeli v sterilne Petrijeve posode. Pustite, da se strdijo in shranite v hladilniku.

PH medija mora biti 6,6 ± 0,2.

Priprava žolčnega eskulinskega agarja iz komercialnega medija

Odtehtajte količino, določeno z vstavkom. To se lahko razlikuje od ene poslovne hiše do druge. Nato nadaljujte enako kot zgoraj opisan postopek.

PH medija mora biti 6,6 ± 0,2. Barva dehidriranega medija je svetlo bež, pripravljen medij pa temno jantarna.

Komercialni žolčni esculinski medij. Vir: Fotografijo avtor mag. Marielsa Gil.

Prijave

Medij žolčnega eskulina se uporablja v glavnem za razlikovanje Streptokoka iz skupine D (žolčni pozitivni eskulini) od preostalih skupin streptokokov (žolčni negativni eskulin).

Če kombinirate test rasti hipersolirane juhe z testom žolčnega eskulina, lahko ugotovite posebno skupino streptokoka skupine D, imenovano Enterococcus.

Ta posebna skupina Streptococcusa spada v skupino D omenjenega rodu in so sposobni hidrolizirati esculin v prisotnosti žolča kot ostali člani skupine D, vendar se lahko razvijejo tudi v hipersoliciranem mediju (BHI s kloridom 6,5% natrija), lastnost, ki pomembno vpliva.

Zato se Streptokoki, ki hidrolizirajo esculinski žolč, vendar ne rastejo v hipersolirani juhi, imenujejo streptokoki, ki niso enterokoki skupine D.

Posejano

Sredstvo cepite po možnosti iz čiste 24-urne juhe Todd-Hewitt.

Na površino medija dodajte 2 kapljici s pasterjevo pipeto in jo razmažite s platinasto zanko.

Inkubirajte 48 ur pri 35 ° C, medtem ko je čas inkubacije dosežen, lahko spremljate, ali je pozitivna reakcija. Če ob koncu časa reakcija ostane negativna, jo lahko inkubiramo do 72 ur.

Interpretacija

Pozitivna reakcija : videz temno rjave, skoraj črne barve v kljunu piščali (v primeru epruvete s cevjo) ali črnitev agarja okoli kolonij (v primeru testa s ploščo).

Negativna reakcija : ne pride do črnitve medija ali v manj kot polovici epruvete po 72 urah inkubacije. Po drugi strani pa je treba rast bakterij v gojišču brez pojava črne barve šteti za negativen test.

QA

Za oceno kakovosti gojišča mora biti na voljo sev Enterococcus faecalis ATCC 29212 kot pozitivna kontrola in sev Streptococcus, ki ne spada v skupino D, kot negativna kontrola.

Omejitve

-Mediji, ki ne vsebujejo natrijevega azida, omogočajo rast enteričnih Gram negativnih bacilov. Nekateri od njih lahko črnijo sredino.

- Nekatere komercialne hiše dodajo nizko koncentracijo žolča (10%) in zaradi tega se lahko v gojišču razvije streptokok, ki ne spada v skupino D, in hidrolizira esculin, kar lahko povzroči napake pri interpretaciji.

Reference

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka diagnoza. 5. izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testi za identifikacijo bakterij kliničnega pomena. 3. izd. Uredništvo Panamericana. Buenos Aires Argentina.
4. Laboratorij Britannija. Eskulinski žolč z azidnim agarjem. 2015. Dostopno na: britanialab.com
5. "Bile Esculin Agar." Wikipedija, prosta enciklopedija. 22. avgust 2017, 17:30 UTC. 22. april 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd Bile Esculin Agar Slants. 2015. Dostopno na: bd.com
7. Neogen Laboratories. Bile esculin agar. Dostopno na: foodsafety.neogen.com