Agar biggy je trdno sredstvo selektivni in razlika kulture. Zasnovan je bil za izolacijo in pomoč pri identifikaciji glavnih vrst Candida. Ime BIGGY izvira iz kratice v angleškem jeziku Bismuth Glucose Glycine Kvas.
Izvirno formulo je ustvaril Nickerson, zato je ta medij znan tudi kot Nickerson agar. Trenutno je sestavljen iz ekstrakta kvasa, glicina, dekstroze, amonijevega citrata, bizmut citrata, natrijevega sulfita in agarja.
Grafična predstavitev BIGGY agarja. Vir: Flickr.com
BIGGY agar je oblikovan za razlikovanje vrst Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei in C. kefyr, rastejo pa tudi druge vrste, kot so Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum in Saccharomyces cerevisiae.
Ima dobro občutljivost in specifičnost, vendar je v primerjavi z drugimi mediji s podobno funkcijo na drugem mestu, saj ga CHROMagar presega. Zaradi tega je veliko laboratorijev raje slednje, čeprav je veliko dražje.
Jasno bi moralo biti, da uporaba agarja BIGGY in drugih podobnih sredstev pomaga pri hitro domnevni identifikaciji, vendar nikoli do potrditve. Zato morajo biti na voljo dodatne metode identifikacije; na primer sistem identifikacije Vitek 32 in API 20.
Osnove
BiGGY agar velja za delno selektiven medij za izolacijo kvasovk, zlasti rodu Candida, čeprav lahko rastejo tudi drugi rodovi.
To je tudi različen medij, saj se bodo glede na vrsto, barvo, obliko in velikost odvisno od vpletenih vrst. Velja za kromogeni medij, zaradi razvoja različnih barv v kolonijah.
Barva kolonije kvasovk je posledica prisotnosti bizmut sulfita v agarju. Nickerson je spoznal, da kvasovke iz rodu Candida izvajajo zunajcelično zmanjšanje bizmut sulfita in ga pretvorijo v bizmut sulfid (netopna črna snov). Tako nastanejo svetlo rjave do črne kolonije.
Ta agar vsebuje ekstrakt kvasa in dekstrozo, ki zagotavlja vir osnovnih hranil in energije za razvoj kvasa. Glicin je stimulator rasti kvasovk, medtem ko zavira rast nekaterih bakterij.
V tem smislu delujeta amonijev in bizmut citrat, pa tudi natrijev sulfit kot zaviralca rasti bakterij. Agar je sredstvo, ki daje srednje trdno konsistenco.
Priprava
Odtehtamo 45 g dehidriranega gojišča in ga raztopimo v litru destilirane vode. Mešanico pretresite in segrevajte 1 minuto do popolnega raztapljanja. Ta kulturni medij ni avtoklav.
Ko se na vodni kopeli ohladi na približno 45 ° C, vlijemo 20 ml v sterilne Petrijeve posode.
Barva dehidriranega medija je rumenkasto siva, pripravljen pa je rumenkasto bel gel, v katerem lahko opazimo rahlo flokulirajočo oborino.
PH naj bo 6,8 ± 0,2.
Pripravljen medij je treba hraniti v hladilniku (4 ° C) in ga zaščititi pred svetlobo. Ker gre za medij, ki ga ni mogoče avtoklavirati, ga je treba uporabiti čim prej. Njegova uporaba je priporočljiva pred 3 dnevi po pripravi.
Uporaba
Plošče inkubiramo pri sobni temperaturi (25 ° C) 24, 48 in 72 ur, čas inkubacije pa se lahko podaljša do 5 dni.
Vsaka vrsta Candida razvije določene značilnosti, zaradi katerih se lahko razlikujemo med seboj. Proizvajalci gojišča opisujejo naslednje značilnosti za vsako vrsto:
-Candida albicans kompleks: na tem agaru se razvije kot gladke, okrogle, rjave ali črne kolonije, z rahlo micelično mejo. Z izjemo, da temna barva ne difundira do sredine.
-Candida tropicalis: svetle, majhne, temno rjave kolonije s črnim središčem in rahlo micelijsko mejo. Temna barva se širi proti sredini, značilna za to vrsto, potem ko je bila inkubirana 72 ur.
-Candida krusei razvije velike, ravne, grobe kolonije z rjavo do črnkasto obrobo.
-Candida parakrusei: srednje velike kolonije, večinoma grobe, ravne. Barva se lahko razlikuje od svetle temno rdečkasto rjave do svetlo rdečkasto rjave. Meja kolonij ima obsežen, rumenkast micelij.
-Candida stellatoidea: razvije srednje ravne kolonije, temno rjave, skoraj črne. Razvoj micelija je zelo redek.
Študija, ki sta jo leta 2003 izvedla Yücesoy in Marol, je pokazala, da ima medij CHROMagar boljšo občutljivost in specifičnost za diferenciacijo in identifikacijo različnih vrst Candida kot agar BIGGY.
QA
Za nadzor sterilnosti neinokulirane plošče inkubiramo pri 25 ° C, v temi od 24 do 48 ur pričakujemo, da ne pride do nobene rasti ali spremembe barve.
ATCC sevi, priporočeni za kontrolo kakovosti medija so:
Candida albicans ATCC 60193 kompleks, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Pri vseh pričakujemo rast, kot je opisano zgoraj.
Uporabljajo se lahko tudi naslednji sevi:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 in Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Pri prvih dveh pričakujemo popolno inhibicijo, v primeru delnega gojenja pa bodo kolonije rumene barve.
V primeru S. aureus naj bi bil popolnoma zaviran, če pa delno raste, so njegove kolonije bele.
Omejitve
Nekatere bakterije so sposobne rasti v tem mediju in lahko celo postanejo temne barve, simulirajoč kolonijo Candida, vendar ko kolonijo razmažemo in opazujemo pod mikroskopom, jo zlahka zavržemo.
Tabela: Karakteristike kolonij nekaterih kvasovk na agaru BIGGY v skladu z delom Yücesoy M in Marol S.
Vir: Yücesoy M, Marol S. Učinkovitost CHROMAGAR candida in BIGGY agarja za identifikacijo vrst kvasovk. Ann Clin Microbiol Antimikrob. 2003; 2 (8): 1–7
Reference
- Yücesoy M, Marol S. Učinkovitost CHROMAGAR candida in BIGGY agarja za identifikacijo vrst kvasovk. Ann Clin Microbiol Antimikrob. 2003; 2 (8): 1–7.
- MCD LAB. Tehnični list BIGGY Agar. Dostopno na: mcdlab.net/
- Laboratorijski neogen. VELIKO Agar. Dostopno na: foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. VELIKI agar. Dostopno na: condalab.com
- BD Laboratoriji. BD BiGGY Agar (bizmut glukoza glicin kvas Agar). 2011. Dostopno na: bd.com