BHI AGAR: TEMELJ, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2026

Agar BHI ali Brain Heart Infusion agar medija je hranilna trdna kulture. V španščini ga imenujemo kot agar za infuzijo srca v možganih. Je neselektivno gojišče, kar pomeni, da se lahko razvijejo vse vrste gram-pozitivnih in gram-negativnih bakterij, pa tudi nekatere kvasovke in nitaste glive.

Sestavljen je iz infuzije telečjih možganov in srca, peptičnega hidrolizata iz živalskih tkiv, trebušne slinavke hidrolizata kazeina, natrijevega klorida, glukoze, dinatrijevega fosfata in agarja.

BHI plošče. Vir: Fotografijo avtor mag. Marielsa Gil.

Treba je opozoriti, da je BHI agar eden najpogosteje uporabljenih kulturnih medijev v bakterioloških laboratorijih. Lahko se uporablja brez dodatkov kot primarna kultura, subkultura kolonij, pridobljenih na drugih selektivnih medijih, ali za vzdrževanje sevov v laboratoriju.

Po drugi strani je idealen medij, ki ga je treba uporabiti kot bazo pri pripravi obogatenih medijev, kot sta krvni agar in čokoladni agar. Oba sta idealna za izolacijo zahtevnih mikroorganizmov s prehranskega vidika. Vendar je treba opozoriti, da ker vsebuje glukozo, ni primeren za opazovanje vzorcev hemolize.

Prav tako se BHI agar lahko uporablja za pripravo posebnih medijev za izolacijo težko rastočih patogenih mikroorganizmov v običajnih medijih, med njimi: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae in Histoplasma capsulatum.

Z dodatkom antibiotikov BHI agar postane selektivno gojišče za izolacijo gliv.

Osnove

To je hranilno gojišče za izolacijo zmerno zahtevnih mikroorganizmov, njegovo obogatitev pa lahko povečamo z dodatkom krvi in ​​drugih prehranskih dopolnil.

Je neselektivno gojišče, zato omogoča rast večine gram-pozitivnih in gram-negativnih bakterij, pa tudi nekaterih gliv. Vendar pa ga lahko naredimo selektivno z dodatkom antibiotikov.

Medij vsebuje infuzijo telečjih možganov in srca, peptični hidrolizat živalskih tkiv in pankreasni hidrolizat kazeina; Vse te spojine delujejo kot viri vitaminov, aminokislin, dušika in ogljika.

Glukoza je ogljikov hidrat, ki mikroorganizmom zagotavlja energijo, ko jo fermentirajo. Medtem natrijev klorid in dinatrijev fosfat ohranjata osmotsko ravnovesje in zagotavljata pH blizu nevtralnosti. Na koncu agar daje srednje trdno konsistenco.

Priprava

Odtehtamo 52 gramov dehidriranega medija in ga raztopimo v enem litru destilirane vode. Mešanico privremo do vira toplote do vretja, med postopkom raztapljanja pa pogosto mešamo.

Plošče ali klini BHI agar lahko pripravimo brez dodatkov.

Klini

Za pripravo klinov pripravite tako, da polovico vsake epruvete napolnite, pokrijete in sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut, ko odhajate, položite na podlago, dokler se ne strdijo. Kasneje hranite v hladilniku do uporabe.

BHI klini za bakterioteko. Vir: Fotografijo avtor mag. Marielsa Gil.

Plošče

Raztopljeno mešanico 15 minut avtoklaviramo pri 121 ° C, nato jo pustimo, da se ohladi na 50 ° C in 20 ml gojišča postrežemo v sterilni petrijevi posodi. Dovolijo, da se strdijo, jih obrnemo in shranimo v hladilniku do uporabe. Pustite, da plošče pridejo do sobne temperature pred setvijo.

PH medija mora ostati na 7,4 ± 0,2.

Surovi medij je bež barve, pripravljen medij pa je svetlo jantarne barve.

Priprava krvnega agarja

Po sterilizaciji medija ohladimo na temperaturo približno 45 do 50 ° C, nato dodamo kri (50 ml), nežno premešamo, da se homogenizira, in aseptično serviramo 20 ml v vsako Petrijevo posodo. Če se na plošči oblikujejo mehurčki, je treba lažji plamen hitro prenesti čez mehurčke, da jih odpravimo.

Prav tako lahko pripravimo posebne medije z dodajanjem ustreznih dodatkov, ko zmes doseže temperaturo od 45 do 50 ° C.

Sredstvo ostane češnjevo rdeče.

Prijave

Uporaba brez dodatkov

BHI agar brez dodatkov je uporaben kot primarna kultura in za setev čistih sevov nizko ali srednje zahtevnih mikroorganizmov za kasnejšo identifikacijo.

Ker gre za svetlo obarvan medij, je idealen za opazovanje pigmentov in ker ne vsebuje motečih snovi, se lahko na njem opravijo nekateri biokemijski testi, na primer oksidaza in katalaza, ali pa se iz teh kolonij izvedejo drugi biokemijski testi. agar.

Prav tako se klini BHI agar široko uporabljajo za vzdrževanje sevov za določen čas v laboratoriju (bakterioteca).

Plošče ali klini, posejane po površini z bakterijskimi sevi, se inkubirajo pri 37 ° C 24 do 48 ur. Medtem pa bo pri glivah temperatura in čas inkubacije odvisna od vrste glive, ki jo iščejo.

Kot osnovni agar za pripravo drugih medijev

S to osnovo lahko pripravimo obogatene in selektivne medije.

Obogatena

Njegova glavna funkcija je služiti kot osnova za pripravo krvnega agarja za rutinsko uporabo v mikrobioloških laboratorijih. Zlasti BHI temelji na izolaciji Streptococcus sp. Vendar ima pomanjkljivost, ker ni primeren za opazovanje vzorcev hemolize, ker vsebuje glukozo.

Uporablja se tudi za pripravo zajčjega ali konjskega krvnega agarja za izolacijo Haemophilus sp. Za najboljše rezultate lahko dodate dopolnilo za obogatitev (IsoVitaleX).

Če vzorci prihajajo iz dihalnih poti, lahko v agar dodamo bakitracin, ki zavira spremljajočo floro in poveča verjetnost za okrevanje bakterije Haemophilus sp.

Lahko pa pripravimo krvni agar (jagnjetino ali človeka) s cistinskim teluritom, da izoliramo Corynebacterium diphtheriae. Prav tako je koristno pripraviti agar za kunčje krvi z dodatkom cistina in glukoze za izolacijo Francisella tularensis.

Sejanje plošč iz krvnega agarja se opravi z izčrpavanjem in jih inkubiramo pri 35-37 ° C 24-48 ur v mikroaerofilnosti (5-10% CO ₂ ).

Izbirno

Ta medij z dodatkom antibiotikov lahko nadomesti agar Sabouraud za izolacijo gliv.

Kombinacija BHI agarja s kloramfenikolom - gentamicinom ali penicilinom - streptomicinom in konjsko krvjo je idealna za izolacijo Histoplasma capsulatum.

Glede na mikroorganizem, ki ga je treba izolirati, se priporoča inkubacija pri 35-37 ° C ali pri sobni temperaturi v aerobiozi. Včasih je potrebno inkubacijo v obeh temperaturnih območjih, za to uporabimo 2 plošči.

Nekatere glive, kot so Trichophyton mentagrophytes, je treba inkubirati pri sobni temperaturi do 7 dni.

QA

Iz vsake pripravljene šarže je priporočljivo 24 ur inkubirati 1 ploščo ali klin pri 37 ° C in preveriti, da ni rasti; Posebej je pomemben pri pripravi krvnega agarja, saj je lahko kontaminiran medij.

Po drugi strani je mogoče kakovost medija oceniti z inokulacijo znanih ali certificiranih standardnih sevov in opazovanjem njihovega razvoja.

V tem smislu lahko za ovrednotenje BHI agarja brez aditivov uporabimo seve bakterije Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 ali Candida albicans ATCC 10231, ki jih v aerobiozi inkubiramo pri 37 ° C v 24 do 48 urah. V vseh primerih se pričakuje zadovoljiva rast.

Za ocenjevanje krvnih agarskih plošč se lahko sejejo sevi Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ali Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakterijski sevi se v mikroaerofilnosti 24 ur inkubirajo pri 37 ° C, gliva pa se v vlažni komori inkubira do 7 dni pri sobni temperaturi. V vseh primerih se pričakuje zadovoljiva rast.

Reference

1. Britannia Laboratories. Infuzija možganskega srca. 2015. Dostopno na: britanialab.com.
2. BD Laboratoriji. Infuzija možganskega srca (BHI) Agar. 2013. Dostopno na: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA možganska infuzija srca Agar. 2009
4. Neogen laboratorij. Infuzija možganskega srca. Dostopno na: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Krvni agar: temelj, uporaba in priprava. 2018. Dostopno na: lifeder.com.
6. Sodelavci Wikipedije. Infuzija možganskega srca. Wikipedija, prosta enciklopedija. 19. september 2018, 03:58 UTC. Dostopno na: wikipedia.org. Dostopno 2. marca 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Mikrobiološka diagnoza Bailey & Scott. 12 izd. Uredništvo Panamericana SA Argentina.