BAIRD PARKER AGAR: TEMELJ, PRIPRAVA IN UPORABA - BIOLOGIJA - 2025

Agar Baird Parker je trdno sredstvo selektivni in razlika kulture. Ustvarjen je bil leta 1962 za odkrivanje in štetje koagulazno pozitivnih stafilokokov (Staphylococcus aureus).

Sestavljajo ga hidrolizat trebušne slinavke kazeina, izvleček mesa, izvleček kvasa, litijev klorid, glicin, natrijev piruvat, kalijev telurit, agar in emulzija rumenjaka.

Tipične kolonije Staphylococcus aureus na agaru Baird Parker. Vir: Daizy John

Baird Parker Agar temelji na sposobnosti S. aureus, da zmanjša telurit in proizvaja lecitinazo. Obe lastnosti ustvarjata kolonijo s specifičnimi lastnostmi za to vrsto. Zato je zelo učinkovit pri odkrivanju tega mikroorganizma.

Tipične kolonije S. aureus so črne ali temno sive barve, brezbarvne obrobe in svetlobni halo, ki jih obdaja, ki jih razlikujejo od drugih mikroorganizmov. Ta patogen najdemo v kliničnih vzorcih, vodah, kozmetiki ter surovi ali kuhani hrani.

Njegova diagnoza ali odkrivanje je izrednega pomena zaradi različnih patologij, ki jih povzroča, kot so zastrupitev s hrano, sindrom razgaljene kože, sindrom toksičnega šoka, abscesi, meningitis, septikemija, endokarditis.

Osnove

Negovalna moč

Kareain hidrolizat trebušne slinavke, mesni ekstrakt in ekstrakt kvasa so vir hranil, vitaminov in mineralov, potrebnih za splošni razvoj mikrobov, medtem ko sta piruvat in glicin spojine, ki podpirata specifično rast Staphylococcus aureus.

Izbirno

Baird Parker Agar je selektiven, ker vsebuje snovi, ki zavirajo rast spremljajoče flore, hkrati pa spodbujajo razvoj S. aureus. Inhibicijske spojine so litijev klorid in kalijev telurit.

Diferencialno

Ta medij omogoča razlikovanje S. aureus od preostalih stafilokokov, ki so negativni na koagulazo. S. aureus ima sposobnost reduciranja telurita do prostega kovinskega črnega telurja, ki tvori črne ali temno sive kolonije.

Prav tako jajčni rumenjak daje substrati, da dokaže prisotnost encima lecitinaza in lipaza. S. aureus je pozitiven na lecitinazo, zato bo okoli kolonije opazen jasen halo, kar kaže na hidroliziranje lecitina.

V tem smislu videz na tem agarju sijajnih črnih ali temno sivih kolonij s svetlo halo okoli njih kaže na prisotnost S. aureus.

Če nastane padavinsko območje, to kaže na aktivnost lipaze. Nekateri sevi bakterije S. aureus so pozitivni na lipazo, drugi pa negativno.

V primeru, da je S. aureus pozitiven na lipazo, bo opaziti neprozorno območje okoli črne ali temno sive kolonije in nato svetlo delovanje zaradi delovanja lecitinaze.

Kolonije bakterij razen S. aureus, ki lahko rastejo na tem mediju, bodo razvile brezbarvne ali rjave kolonije brez okoliškega haloa.

Atipične črne kolonije lahko vidimo tudi z brezbarvno mejo ali brez nje, vendar brez svetlobne halo. Teh kolonij ne bi smeli upoštevati, ne ustrezajo S. aureus.

Priprava

Emulzija rumenjaka

Vzemite sveže piščančje jajce, ga dobro operite in položite v 70% alkohol za 2 do 3 ure. Jajce nato odpremo aseptično in belo previdno ločimo od rumenjaka. Nato odvzamemo 50 ml rumenjaka in ga zmešamo s 50 ml sterilne fiziološke raztopine.

Kalijev telurit 1% w / v

Nekatere komercialne hiše prodajajo 1% kalijev telurit, pripravljen za uporabo. Sredstvu se doda, preden se medij strdi.

Za pripravo te raztopine v laboratoriju odtehtamo 1,0 g kalijevega telurita in ga raztopimo v enem delu vode. Nato se količina vode dopolni, dokler ne dosežemo 100 ml. Raztopino je treba sterilizirati po metodi filtracije.

Priprava gojišča

Odtehtamo 60 g dehidriranega medija in raztopimo v 940 ml destilirane vode. Mešanica naj sedi približno 5-10 minut.

Vročino dodajte tako, da medij pogosto mešate, da izboljšate postopek raztapljanja. Zavremo eno minuto. Sterilizirajte v avtoklavu pri 121 ° C 15 minut.

Pustite stati, dokler ne doseže temperature 45 ° C in dodajte 50 ml emulzije rumenjaka in 10 ml 1% telurita. Dobro premešamo in nalijemo 15-20 ml na sterilne Petrijeve posode.

Pustite, da se strdi, zapored obrnite v plošče in shranite v hladilniku do uporabe.

Končni pH pripravljenega medija mora biti 6,8 ± 0,2.

Pred setvijo vzorca počakajte, da plošča doseže sobno temperaturo. Plošče sejte z vrstico ali s površinskim setvijo z lopatico Drigalski.

Barva dehidriranega medija je svetlo rjava, barva pripravljenega medija pa svetlo rjava.

Uporaba

Klinični vzorci

Klinični vzorci so posejani neposredno, na enem koncu plošče se izloči del materiala, od tam pa se izčrpava. Inkubirajte 24 do 48 ur pri 35-37 ° C.

Vzorci hrane

10 g vzorca hrane natehtamo in homogeniziramo v 90 ml 0,1% peptonske vode, od tam pripravimo redčenja. Plošče v treh izvodih napolnite z 0,3 ml pripravljenih raztopin in na površino semenite z lopatico Drigalski. Inkubirajte 24 do 48 ur pri 35-37 ° C.

Ta metodologija omogoča štetje dobljenih tipičnih kolonij in je idealna, kadar obstaja sum S. aureus nad 10 CFU na g / ml vzorca.

Če se domneva, da je količina S. aureus majhna ali je veliko spremljajoče flore, priporočamo, da vzorec obogatite v sojini brozgi triptikaze z 10% NaCl in 1% natrijevim piruvatom. To bo spodbudilo rast bakterije S. aureus in zaviralo razvoj spremljajoče flore. Motne cevi so posejane na agarju Baird Parker.

Vzorci vode

V steriliziranem vakuumskem filtracijskem sistemu se filtrira 100 ml študijske vode, nato pa se s sterilnimi kleščami odstrani 0,4 mikronska mikroporozna membrana in položi na ploščico Baird Parker. Inkubirajte 24 do 48 ur pri 35-37 ° C. Ta tehnika omogoča štetje značilnih kolonij S. aureus.

QA

Za oceno kakovosti agenta Baird Parker se lahko uporabljajo znani sevi, kot so Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ali Proteus mirabilis ATCC 43071.

V primeru sevov S. aureus ATCC je znano, da zmanjšujejo telurit, pozitivna sta na lipazo in lecitinazo. Zato mora biti zadovoljiv razvoj in rasti konveksnih kolonij s črnim središčem in brezbarvno obrobo, z neprozornim halo in lahkim zunanjim halo.

Pričakuje se, da se bo S. epidermidis na tem mediju slabo razvil, s sivo-rjavimi do črnimi kolonijami, brez svetlobe.

Za E. coli in P. mirabilis naj bi bilo v celoti ali delno zavirano. V primeru rasti se bodo razvile rjave kolonije brez neprozornega območja ali lahkega hala.

priporočila

- Medij se ne sme segrevati po dodajanju telurita in rumenjaka.

-Priprava emulzije rumenjaka in njeno dodajanje na sredini je zelo ranljiv korak za kontaminacijo. Treba je biti zelo previden.

-Če obstaja značilna kolonija bakterije S. aureus, je treba to potrditi z namestitvijo testa koagulaze na omenjeni sev.

-Če pri koagulazi obstajajo dvomljivi rezultati, je treba vgraditi druge potrdilne teste.

- Pazite, da prisotnosti tipičnih kolonij S. aureus ne zamenjate z netipičnimi črnimi kolonijami.

Reference

1. Sodelavci Wikipedije. Baird-Parkerjev agar. Wikipedija, prosta enciklopedija. 15. marec 2017, 19:36 UTC. Dostopno na: wikipedia.org/ Dostopano 18. februarja 2019.
2. BD Laboratoriji. Baird Parker Agar. 2006.Na voljo na: bd.com
3. Britannia Laboratories. Bagar Parkerjeva agar baza. 2015. Dostopno na: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Dostopno na: http://f-soria.es/Inform
5. Britannia Laboratories. Kalijev telurit. 2015. Dostopno na: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Prevoz enterotoksigenega Staphylococcus aureus tipa A, v nazofaringealni razmazi pri hranilnikih s hrano. Rev Med Čile 2017; 145: 1559-1564
7. Venezuelski standard Covenin 1292-89. (1989). Živila. Izolacija in naštevanje Staphylococcus aureus. Dostopno na: sencamer.gob.ve